馬金環(huán)

(昌邑市婦幼保健院 檢驗科，山東 昌邑261300)

急性胃出血患者早期血液CD4+CD25+T細胞及其細胞因子的變化

馬金環(huán)

(昌邑市婦幼保健院 檢驗科，山東 昌邑261300)

急性胃出血是消化內科常見的急性疾病，主要由于胃部及十二指腸潰瘍、口服阿司匹林、胃癌、燒傷等原因引起的活動性出血[1]。近年研究發(fā)現(xiàn)[2]，免疫系統(tǒng)紊亂會加重原發(fā)病灶病變程度，進而加重出血的發(fā)生。CD4+CD25+T細胞是具有免疫增強及抑制的雙重T細胞，是一群能同時表達CD4及CD25分子的T細胞，能減輕過度免疫反應，從而減輕對器官及組織的損害，但當其水平過度升高時不僅不能有效抑制機體過強的炎癥反應，反而會加重炎癥損傷，進而加重患者病情[3,4]。本研究將探討急性胃出血患者早期血液CD4+CD25+T細胞及其細胞因子的變化及其與患者貧血程度的關系，旨在為急性胃出血患者早期診斷及預后評價提供指導。

1 資料及方法

1.1 臨床資料

2014年6月至2015年6月收治急性胃出血患者38例，患者符合中華醫(yī)學會消化內科學會對急性胃出血的診斷標準，臨床表現(xiàn)為血壓下降、腹痛、嘔血、黑便等，患者均經(jīng)胃鏡檢查確診，男 18例，女20例，年齡18-68歲，平均(42.3±4.9)歲；另選取同期就診的35例經(jīng)胃鏡診斷為消化潰瘍但未發(fā)生出血的患者為潰瘍組，男 18例，女17例，年齡18-66歲，平均(41.9±5.2)歲；選取同期行常規(guī)身體檢查的30例健康體檢者為對照組，男 16例，女14例，年齡18-67歲，平均(42.2±4.9)歲，3組性別、年齡無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 急性胃出血患者入院后禁食、禁水，同時留置胃管接引流觀察胃部內容物性狀，并從胃部注入止血藥物，同時給予保護胃黏膜、抑酸等治療，對于Hb<70 g/L的患者則輸注紅細胞直至恢復正常血壓水平。治療72 h后再次采集靜脈血測量相關指標。

1.2.2 CD4+CD25+T細胞測定 潰瘍組及對照組于檢查當天清晨8-9點空腹抽取靜脈血5 ml，急性胃出血組于入院當天及治療第3 d后分別抽取靜脈血5 ml，加入肝素鈉抗凝后離心處理10 min，留取血漿，并置于-80℃中待測。取上述樣品恢復至常溫后，調整樣品濃度至2×106/ml，并將樣品接種在6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)，收集對數(shù)生長期的細胞于測定管中，采用PBS洗滌2次后，分別加入IL-17A-FTTC及IFN-γ-FTTC染色劑對細胞漿進行染色，并采用美國貝克曼公司提供的Beckm Epics流式細胞儀測定外周血CD4+CD25+T細胞比例。

1.2.3 CD4+CD25+細胞因子測定 采用ELISA法測定3組IL-10、TGF-β水平，IL-10試劑盒由上海博研生物工程研究中心提供，TGF-β試劑盒由上海常斤生物科技有限公司提供，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.2.4 Hb、RBC水平測定 采用日本Sysnex公司提供的SYSMEX1000型全自動化血液分析儀測定患者血紅蛋白含量(Hb)及紅細胞水平。

1.3 貧血判斷標準

血紅蛋白濃度(Hb)水平120-160 g/L為正常；90 g/L

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 3組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平對比

急性胃出血組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著高于潰瘍組及對照組(P<0.05)，而Hb、RBC平顯著低于慢性胃潰瘍組及對照組(P<0.05)。潰瘍組與對照相比，CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 三組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平對比

注：與對照組相比，aP<0.05；與胃潰瘍組相比，bP<0.05.

2.2 急性胃出血組患者治療前后CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平對比

急性胃潰瘍組治療后CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平較治療前顯著下降，而Hb、RBC較治療前顯著升高(P<0.05)，見表2。

表2 急性胃出血組治療前后CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平對比

2.3 CD4+CD25+、IL-10、TGF-β與貧血程度的關系

與輕度及中度貧血組相比，重度貧血組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著升高(P<0.05)，見表3。

表3 CD4+CD25+、IL-10、TGF-β與貧血程度的關系

注：與輕度組相比，aP<0.05；與中度組相比，bP<0.05.

3 討論

CD4+CD25+是重要的輔助性T細胞，可分泌IL-10、TGF-β等重要細胞因子，同時具有免疫調節(jié)的重要作用。與免疫增強作用相比，CD4+CD25+T細胞往往起到重要的免疫抑制作用[5,6]。研究表明[7]，免疫細胞功能異常尤其是T細胞異常會引發(fā)胃腸道疾病并會導致消化道出血如炎癥性腸病、消化性潰瘍、惡性腫瘤等。有研究指出[8]，胃腸疾病患者腸細胞壁免疫性損傷是導致胃部大出血的重要原因，而其主要作用機制可能與CD4+CD25+T細胞不能有效抑制血管壁內過強的炎癥反應，從而加重胃腸血管壁內膜損傷，并最終導致血管破裂有關。

本研究結果顯示，急性胃出血組患者外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著高于潰瘍組及對照組，而潰瘍組與對照組外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平差異無統(tǒng)計學意義，這表明在急性胃出血患者中存在免疫功能失調現(xiàn)象，CD4+CD25+比例上調、IL-10、TGF-β表達水平增多與胃出血發(fā)病有密切的關系。因此通過測定CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平有助于早期急性胃出血診斷，結果與Thanh等[9]一致。本研究發(fā)現(xiàn)，急性胃出血患者Hb、RBC水平顯著低于潰瘍組及對照組，從而提示急性胃出血患者容易由于失血過多而發(fā)生貧血。此外，本研究發(fā)現(xiàn)急性胃出血患者經(jīng)積極的治療后，外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著低于治療前，從而提示外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平可作為急性胃出血患者預后的評價指標。與治療前相比，治療后患者Hb、RBC水平較明顯升高，這提示急性胃出血患者入院后經(jīng)止血、保護胃黏膜等措施治療后能有效減輕胃腸道黏膜免疫性損害，從而有效改善患者病情。本研究發(fā)現(xiàn)，與輕度及中度貧血組相比，重度貧血組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著升高，這提示急性胃出血患者免疫功能失調與貧血存在一定的關系，即CD4+CD25+T細胞水平越高，患者出血程度越重，Hb水平越低，其可能機制可能與CD4+CD25+T細胞表達水平過高會導致消化黏膜免疫屏障功能障礙，從而表現(xiàn)為黏膜下血管通透性升高，增加患者出血量[11,12]。

[1]柴明如.胃大部分切除術治療胃十二指腸潰瘍大出血的近期療效觀察[J].河南外科學雜志,2012,18(4):89.

[2]Peris Munyaka,Mohammad F,Valentin A,etal.Central Muscarinic Cholinergic Activation Alters Interaction between Splenic Dendritic Cell and CD4+CD25- T Cells in Experimental Colitis[J].PLoS One,2014,9(10):109272.

[3]呂承剛,李永翔.胃腸道惡性腫瘤患者CD4+CD25+調節(jié)性T細胞的檢測及意義[J].安徽醫(yī)科大學學報,2012,47(7):817.

[4]Yi-Ying Wu,Jiunn-Horng Chen,Jung-Ta Kao,etal.Expression of CD25high Regulatory T Cells and PD-1 in Gastric Infiltrating CD4+T Lymphocytes in Patients with Helicobacter pylori Infection[J].Clin Vaccine Immunol,2011,18(7):1198.

[5]陸 威,李永翔,張尚鑫，等.胃癌患者外周血及癌組織中CD4+CD25+調節(jié)性T細胞、轉錄因子Foxp3的表達及臨床意義[J].安徽醫(yī)科大學學報,2013,48(7):790.

[6]盧 芩,俞 婷,張有珍，等.胃癌患者外周血及癌組織中調節(jié)性T細胞和Foxp3的表達意義[J].中國老年學雜志,2014,(18):5140.

[7]Thanh-Long,Nguyen,Shradha S,et al.Autoimmune gastritis mediated by CD4+ T cells promotes the development of gastric cancer[J].Cancer Res,2013,73(7):2117.

[8]鄒小杰,徐 震,毛姍姍，等.輕度胃腸炎伴嬰幼兒良性驚厥患兒T細胞活化亞群、細胞因子的變化[J].中華實驗和臨床病毒學雜志,2014,28(5):349.

[9]Thanh-Long M,Nguyen,Nabil T,et al.In Vitro Induced Regulatory T Cells Are Unique from Endogenous Regulatory T Cells and Effective at Suppressing Late Stages of Ongoing Autoimmunity[J].PLoS One,2014,9(8):104698.

[10]喬曉媛,牛潤桂,魏淑青等.中晚期肺癌患者化療前后的CD4+CD25+調節(jié)性T細胞含量變化及其作用研究[J].中國藥物與臨床,2015,(5):680.

[11]郄 燕.胃癌患者CD4+CD25+Foxp3+調節(jié)性T淋巴細胞數(shù)量和分布的研究[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2013,34(5):545.

[12]龔曉成,曾 輝,韓 偉,等.胃癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+調節(jié)性T細胞55例分析[J].中華危重癥醫(yī)學雜志(電子版),2013,6(5):38.

1007-4287(2017)07-1170-03

2016-07-17)