許輝 閆廣鵬 馬晶 夏志剛 唐暉 李軍

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·論著·

γ干擾素釋放試驗(yàn)檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液輔助診斷頸部淋巴結(jié)結(jié)核的初步報(bào)告

許輝 閆廣鵬 馬晶 夏志剛 唐暉 李軍

目的 評(píng)估γ干擾素釋放試驗(yàn)(IGRA)檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液對(duì)頸部淋巴結(jié)核的輔助診斷價(jià)值。方法 將2015年1月至2016年5月在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院收治的48例頸部淋巴結(jié)腫大患者采用復(fù)合診斷標(biāo)準(zhǔn)分為頸部淋巴結(jié)結(jié)核組(21例)，非頸部淋巴結(jié)結(jié)核組(27例)，對(duì)48例患者的外周血和頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液進(jìn)行γ干擾素釋放試驗(yàn)檢測(cè)，運(yùn)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組間斑點(diǎn)形成細(xì)胞(SFCs)個(gè)數(shù)的比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，樣本間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果 IGRA檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液和外周血的敏感度分別為90.48%(19/21)、95.24%(20/21)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.00，P>0.05)，頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液和外周血的特異度分別為70.37%(19/27)、92.59%(25/27)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.43，P<0.05)。頸部淋巴結(jié)結(jié)核組中IGRA檢測(cè)外周血和頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液的SFCs中位數(shù)及上下四分位數(shù)[M(Q1,Q3)]分別為109(52，186)個(gè)、68(30，156)個(gè)，不同標(biāo)本間檢測(cè)的SFCs中位數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U=175.00,P>0.05)。非頸部淋巴結(jié)結(jié)核組中IGRA檢測(cè)外周血和頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液的SFCsM(Q1,Q3)分別為0(0，18)個(gè)、0(0,3) 個(gè),不同標(biāo)本間檢測(cè)的SFCs中位數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U=271.00，P>0.05)。頸部淋巴結(jié)結(jié)核組的淋巴結(jié)細(xì)胞懸液SFCs明顯高于非頸部淋巴結(jié)結(jié)核組的淋巴結(jié)細(xì)胞懸液SFCs，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U=45.00，P<0.05)。結(jié)論 γ干擾素釋放試驗(yàn)檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液具有可行性，對(duì)頸部淋巴結(jié)結(jié)核的輔助診斷有一定的價(jià)值。

結(jié)核, 淋巴結(jié)； 標(biāo)本制備； 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)； 干擾素γ； 敏感性與特異性

新疆是中國(guó)結(jié)核病疫情較為嚴(yán)重的地區(qū)，2010年全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查顯示，全國(guó)15歲及以上人群活動(dòng)性肺結(jié)核的患病率為459/10萬(wàn)，而新疆地區(qū)15歲以上人群標(biāo)化活動(dòng)性肺結(jié)核患病率為1526.12/10萬(wàn)[1-2]，明顯高于全國(guó)平均水平。頸部淋巴結(jié)結(jié)核作為一種常見(jiàn)的肺外結(jié)核，在該地區(qū)的發(fā)病率也處于較高水平。結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)作為頸部淋巴結(jié)結(jié)核的確認(rèn)性診斷，該檢查手段特異度高但敏感度低，其陰性結(jié)果也無(wú)法排除結(jié)核分枝桿菌感染，并且結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)周期長(zhǎng)達(dá)數(shù)周，給及時(shí)確診頸部淋巴結(jié)結(jié)核帶來(lái)了困難。頸部淋巴結(jié)穿刺活檢作為一種微創(chuàng)的檢查手段，因其提取的組織量有限往往需要結(jié)合其他輔助診斷做出綜合判斷[3]。切取頸部淋巴結(jié)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查也是目前臨床上常用的確診頸部淋巴結(jié)結(jié)核的方法，但抗酸染色陽(yáng)性率低[4]，有時(shí)難以與其他淋巴結(jié)肉芽腫病病變相鑒別。因此，有時(shí)頸部淋巴結(jié)結(jié)核的診斷需要綜合影像學(xué)檢查、臨床表現(xiàn)，以及細(xì)胞學(xué)和組織病理學(xué)檢查做出綜合判斷[5-6]。γ干擾素釋放試驗(yàn)(γ-interferon release assay，IGRA)通過(guò)將2種結(jié)核分枝桿菌特異性抗原[早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)和培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP-10)]做為刺激原去刺激外周血中致敏淋巴細(xì)胞，定量檢測(cè)經(jīng)過(guò)抗原刺激后分泌γ干擾素的相關(guān)效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)量來(lái)判斷是否存在結(jié)核分枝桿菌的感染，已被廣泛應(yīng)用于結(jié)核病的輔助診斷。中國(guó)屬于結(jié)核病的高負(fù)擔(dān)國(guó)家，運(yùn)用IGRA對(duì)我國(guó)不同人群所做的結(jié)核潛伏感染調(diào)查顯示，結(jié)核潛伏感染率為13%～33.6%[7-9]。因此，在新疆這一結(jié)核病高負(fù)擔(dān)地區(qū)，IGRA對(duì)頸部淋巴結(jié)結(jié)核的輔助診斷價(jià)值必然受到該地區(qū)較高結(jié)核潛伏感染的影響。我們嘗試運(yùn)用IGRA對(duì)頸部腫大淋巴結(jié)的細(xì)胞懸液進(jìn)行檢測(cè)，探討該方法對(duì)頸部淋巴結(jié)結(jié)核的輔助診斷價(jià)值。

資料和方法

一、研究對(duì)象

選擇2015年1月至2016年5月新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院收治的48例頸部淋巴結(jié)病變患者，研究對(duì)象的入選標(biāo)準(zhǔn)是以頸部淋巴結(jié)腫大為診斷收治的新疆本地常住居民患者，患者需要并同意行頸部淋巴結(jié)活檢。

排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有未經(jīng)治愈的肺結(jié)核和(或)除外頸部淋巴結(jié)結(jié)核的肺外結(jié)核病變；接受免疫調(diào)節(jié)治療，無(wú)病理學(xué)或細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果而臨床診斷為頸部淋巴結(jié)結(jié)核，原發(fā)灶明確的頸部轉(zhuǎn)移癌。

依據(jù)組織病理學(xué)和(或)微生物學(xué)診斷結(jié)果將患者分為頸部淋巴結(jié)結(jié)核組和非頸部淋巴結(jié)結(jié)核組。

頸部淋巴結(jié)結(jié)核組有21例，其中女14例，男7例，年齡中位數(shù)及上下四分位數(shù)[M(P25,P75)]為35(15,76)歲。

非頸部淋巴結(jié)結(jié)核組27例，其中女13例，男14例，年齡M(P25, P75)為46(17,78)歲，該組頸部淋巴結(jié)病變包括：頸部淋巴結(jié)反應(yīng)性增生24例，頸部神經(jīng)鞘瘤并發(fā)頸部淋巴結(jié)反應(yīng)性增生1例，頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌1例，濾泡性淋巴瘤1例。

所有研究對(duì)象簽署知情同意書，本研究經(jīng)過(guò)新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審查并被核準(zhǔn)執(zhí)行。

二、方法

1. 外周血結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)檢測(cè)：選擇T-SPOT.TB試劑盒(Oxford Immunotec公司產(chǎn)品)進(jìn)行IGRA檢測(cè)。以肝素抗凝真空采血管采集患者8 ml的外周靜脈血，置于室溫環(huán)境內(nèi)并于4 h內(nèi)進(jìn)行外周血單個(gè)核細(xì)胞分離，并制備成濃度為2.5×106個(gè)/ml的單個(gè)核細(xì)胞懸液。50 μl細(xì)胞培養(yǎng)液加入到空白對(duì)照孔；將50 μl抗原B(CFP-10)加入至檢測(cè)孔B；將50 μl抗原A(ESAT-6)加入至檢測(cè)孔A；將50 μl陽(yáng)性對(duì)照(植物血凝素，PHA)加入至陽(yáng)性對(duì)照孔。然后在預(yù)包被好γ干擾素抗體的平板中，每孔依次加入100 μl濃度為2.5×106個(gè)/ml的單個(gè)核細(xì)胞懸液。 放入CO2培養(yǎng)箱(37 ℃，5% CO2)培養(yǎng)16～20 h。先根據(jù)標(biāo)本量計(jì)算好酶結(jié)合物工作液所需的量，以1∶200的比例將酶結(jié)合物原液與磷酸鹽緩沖液(PBS)混合，制成酶結(jié)合物工作液，每孔加50 μl，4～8 ℃孵育1 h。每孔用200 μl PBS液洗滌4次，拍干，然后加顯色液50 μl，暗處?kù)o置7 min，用蒸餾水終止反應(yīng)。將板孔內(nèi)液體拍干，晾至底膜干透后行斑點(diǎn)形成細(xì)胞(SFCs)個(gè)數(shù)讀取，并記錄報(bào)告結(jié)果。

陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照孔SFCs個(gè)數(shù)為 0～5 個(gè)、且抗原 A 或抗原 B 孔的SFCs個(gè)數(shù)-空白對(duì)照孔SFCs個(gè)數(shù)≥6個(gè)；空白對(duì)照孔SFCs個(gè)數(shù)為 6～10 個(gè)、且抗原 A 或抗原 B 孔的SFCs個(gè)數(shù)≥2×空白對(duì)照孔SFCs個(gè)數(shù)。陰性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：如果不符合上述標(biāo)準(zhǔn)且陽(yáng)性對(duì)照孔正常時(shí)，檢測(cè)結(jié)果判斷為陰性。若空白對(duì)照孔內(nèi)SFCs個(gè)數(shù)≥10個(gè)或陽(yáng)性對(duì)照孔內(nèi)SFCs個(gè)數(shù)<20個(gè)，試驗(yàn)結(jié)果判斷為無(wú)效試驗(yàn)。

2.淋巴結(jié)細(xì)胞懸液T-SPOT.TB檢測(cè)：選擇與外周血檢測(cè)相同的試劑盒。淋巴細(xì)胞懸液制備所用器械用品均經(jīng)過(guò)滅菌處理或?yàn)橐淮涡詿o(wú)菌包裝。頸部病變淋巴結(jié)均經(jīng)手術(shù)摘取，如果頸部病變淋巴結(jié)發(fā)生液化則取臨近腫大淋巴結(jié)。頸部淋巴結(jié)手術(shù)摘取后隨即切取約0.5 cm3～1 cm3大小淋巴結(jié)組織，用以制備淋巴結(jié)細(xì)胞懸液，其余送病理檢查。以生理鹽水反復(fù)沖洗淋巴結(jié)后剝離并去除淋巴結(jié)包膜，隨后置于15 ml玻璃勻漿器內(nèi)加8 ml 0.9%氯化鈉注射液制備勻漿，制備過(guò)程中緩慢用力至無(wú)肉眼可見(jiàn)淋巴結(jié)組織團(tuán)塊后以70 μm細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾，抽取6 ml過(guò)濾后的淋巴結(jié)細(xì)胞懸液注入肝素抗凝真空采血管內(nèi)，并于2 h內(nèi)進(jìn)入檢測(cè)環(huán)節(jié)。檢測(cè)前用注射器緩慢吸入上述懸液至離心管中，加入1640培養(yǎng)液至10 ml，以700×g離心7 min。棄上清液，重復(fù)此步驟一次。再加入1640培養(yǎng)液，定容到7～8 ml 左右，混勻，將該混懸液加到裝有3～4 ml淋巴細(xì)胞分離液的離心管中，以1000×g離心22 min。將管中離心后的呈云霧狀白膜的淋巴細(xì)胞層由上向下慢慢吸取加入到新的15 ml離心管中，并加1640培養(yǎng)液定容至10 ml，顛倒混勻一次后以600×g離心7 min。離心后盡快倒掉上清，先加少量 1640培養(yǎng)液，吹打?qū)⒓?xì)胞打開，再加1640培養(yǎng)液至10 ml，混勻，以350×g離心7 min。離心后倒掉上清，加入500 μl AIM-V培養(yǎng)液，用移液器吹打重懸細(xì)胞沉淀，另取1.5 ml離心管，按標(biāo)本號(hào)編號(hào)，離心管中加入100 μl細(xì)胞懸液+100 μl 1640培養(yǎng)液, 混勻后上機(jī)(三分類/五分類計(jì)數(shù)儀工程師模式)并行涂片人工計(jì)數(shù)復(fù)核。按照方案將每個(gè)標(biāo)本的淋巴細(xì)胞數(shù)稀釋至2.5×106個(gè)/ml。其余步驟及結(jié)果判定同外周血檢測(cè)方案。陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果示例見(jiàn)圖1。整個(gè)研究過(guò)程中由病理科醫(yī)生及檢驗(yàn)科醫(yī)生獨(dú)立做出結(jié)果判斷。

空白對(duì)照：空白對(duì)照孔；陽(yáng)性對(duì)照：PHA檢測(cè)孔；抗原B:抗原CFP-10檢測(cè)孔； 抗原A：抗原ESAT-6檢測(cè)孔圖1 頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液IGRA檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果示例

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，非正態(tài)分布的計(jì)量資料采用“M(Q1,Q3)”表示，兩組樣本間率的比較采用χ2檢驗(yàn)， SFCs的比較用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1. IGRA檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液和外周血結(jié)果：IGRA檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液和外周血的敏感度分別為90.48%(19/21)，95.24%(20/21)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.00，P>0.05)；檢測(cè)外周血和頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液的特異度分別為70.37%(19/27)、92.59%(25/27)，頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液的特異度高于外周血，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.43，P<0.05)，詳見(jiàn)表1。非頸部淋巴結(jié)結(jié)核組中有2例患者的外周血及淋巴結(jié)細(xì)胞懸液IGRA均為陽(yáng)性。1例為頸部神經(jīng)鞘瘤并發(fā)頸部淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者(SFCs外周血為109個(gè)，淋巴組織懸液為 239個(gè))，另1例為濾泡性淋巴瘤患者(SFCs 外周血為114個(gè)，淋巴組織懸液為40個(gè))。

頸部淋巴結(jié)結(jié)核組和非頸部淋巴結(jié)核組外周血及淋巴細(xì)胞懸液SFCs比較：頸部淋巴結(jié)結(jié)核組中IGRA檢測(cè)外周血和頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液的SFCs個(gè)數(shù)M(Q1，Q3)分別為109(52，186)個(gè)、68(30，156)個(gè)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U=175.00,P>0.05)。非頸部淋巴結(jié)結(jié)核組中IGRA檢測(cè)外周血和頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液的SFCs個(gè)數(shù)M(Q1,Q3)分別為0(0，18)個(gè)、0(0，3)個(gè)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U=271.00，P>0.05)。但頸部淋巴結(jié)結(jié)核組的淋巴結(jié)細(xì)胞懸液的SFCs個(gè)數(shù)明顯高于非頸部淋巴結(jié)結(jié)核組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U=45.00，P<0.05)。

討 論

目前有2種IGRA檢測(cè)方法：一種是采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法，該方法檢測(cè)全血中致敏淋巴細(xì)胞受到結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激后釋放的γ干擾素水平；另一種方法是采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中致敏淋巴細(xì)胞受到結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激后釋放的γ干擾素水平，兩種檢測(cè)方法的檢驗(yàn)原理和效能相似[10]。因酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)檢測(cè)的是經(jīng)分離的單個(gè)核細(xì)胞，重點(diǎn)檢測(cè)活細(xì)胞的功能[11]，能排除懸液中其他成分對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生不可預(yù)測(cè)的影響，因此本研究采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

表1 48例患者頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液和外周血進(jìn)行IGRA檢測(cè)的結(jié)果分析

注 敏感度(%)=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%；特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(%)=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%；陰性預(yù)測(cè)值(%)=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%；陽(yáng)性似然比=敏感度/(1-特異度)；陰性似然比=(1-敏感度)/特異度

2010年全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告顯示,新疆肺結(jié)核患者中男性是女性患病概率的1.31倍[12]，而納入本研究的頸部淋巴結(jié)結(jié)核病患者中女性患者較多(14/21)，女性較男性更易患頸部淋巴結(jié)結(jié)核這一現(xiàn)象也被其他相關(guān)研究所證實(shí)[13-14]，但相關(guān)原因仍有待進(jìn)一步分析。

本研究中將分離后得到的頸部淋巴結(jié)組織單個(gè)核細(xì)胞和外周血單個(gè)核細(xì)胞濃度均調(diào)整為2.5×106個(gè)/ml，然后行IGRA檢測(cè)。白雪娟等[15]采用IGRA檢測(cè)結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液時(shí)發(fā)現(xiàn)，需要將分離得到的胸腔積液中單個(gè)核細(xì)胞的濃度進(jìn)行重新調(diào)整，否則影響結(jié)果判定。而本研究采用制備相同濃度的外周血及頸部淋巴結(jié)組織單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行IGRA檢測(cè)，并未發(fā)現(xiàn)影響結(jié)果判定。然而，IGRA檢測(cè)的γ-干擾素是由活化的 T淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞組成的細(xì)胞群經(jīng)結(jié)核特異性抗原刺激后分泌的[11]，目前尚不清楚外周血單個(gè)核細(xì)胞和淋巴組織單個(gè)核細(xì)胞中上述細(xì)胞群在經(jīng)結(jié)核特異性抗原刺激后的表現(xiàn)是否具有同質(zhì)性，再加之本研究樣本量的局限性，因此能否采用相同的臨界值進(jìn)行結(jié)果判斷仍需更多的樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步研究來(lái)驗(yàn)證。

本研究中IGRA檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液和外周血對(duì)診斷頸部淋巴結(jié)結(jié)核的特異度分別為92.59%、70.37%，IGRA檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液診斷頸部淋巴結(jié)結(jié)核的特異度明顯高于外周血檢測(cè)結(jié)果(P<0.05)。我國(guó)新疆地區(qū)的結(jié)核病負(fù)擔(dān)水平較高導(dǎo)致該地區(qū)存在較多的潛伏結(jié)核感染者,在本研究中非頸部淋巴結(jié)結(jié)核組外周血IGRA檢測(cè)的陽(yáng)性率為29.63%(8/27)，這使得本研究中IGRA檢測(cè)外周血對(duì)診斷頸部淋巴結(jié)結(jié)核的特異度較低。正常情況下機(jī)體在感染結(jié)核分枝桿菌后會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏T淋巴細(xì)胞,由于致敏T淋巴細(xì)胞有在結(jié)核感染區(qū)域富集的特性[16-17]，被結(jié)核分枝桿菌感染的頸部淋巴結(jié)內(nèi)富集有針對(duì)結(jié)核分枝桿菌的致敏淋巴細(xì)胞，通過(guò)提取頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液中的單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行IGRA檢測(cè)可判斷該淋巴結(jié)是否存在結(jié)核致敏淋巴細(xì)胞，從而判斷該淋巴結(jié)是否存在結(jié)核分枝桿菌感染。因此，本研究中IGRA檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液診斷結(jié)核病的特異度明顯高于IGRA檢測(cè)外周血。

納入本研究的非頸部淋巴結(jié)結(jié)核病患者中有2例患者的外周血及淋巴結(jié)細(xì)胞懸液IGRA檢測(cè)均為陽(yáng)性。1例為頸部神經(jīng)鞘瘤并發(fā)頸部淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者(SFCs外周血檢測(cè)為109個(gè)，淋巴組織懸液檢測(cè)為 239個(gè))， 來(lái)自屬于新疆結(jié)核病的高發(fā)區(qū)之一的和田地區(qū)，但否認(rèn)與結(jié)核病患者有密切接觸史，術(shù)后隨訪22個(gè)月未見(jiàn)頸部出現(xiàn)異常腫大淋巴結(jié)。另1例為濾泡性淋巴瘤患者，該患者2年前曾經(jīng)病理活檢確認(rèn)為右頸部淋巴結(jié)結(jié)核，行抗結(jié)核藥物治療9個(gè)月，因左頜下淋巴結(jié)腫大血液科要求行切除活檢，術(shù)后病理報(bào)告為濾泡性淋巴瘤，該患者SFCs外周血檢測(cè)為114個(gè)，淋巴組織懸液檢測(cè)為40個(gè)。頸部淋巴結(jié)結(jié)核的組織病理特征性病變是干酪樣壞死及肉芽組織形成，但在這些特征性病變形成之前，結(jié)核分枝桿菌進(jìn)入淋巴結(jié)后就會(huì)引起淋巴結(jié)內(nèi)效應(yīng)淋巴細(xì)胞針對(duì)結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生細(xì)胞免疫，即使淋巴結(jié)已被淋巴瘤細(xì)胞浸潤(rùn)，仍有相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞。而且，目前尚無(wú)診斷與鑒別診斷潛伏性結(jié)核感染和活動(dòng)性結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)，IGRA可以用作檢測(cè)結(jié)核感染的手段但不能區(qū)分潛伏性結(jié)核感染和活動(dòng)性結(jié)核病[18]，因此，即使淋巴結(jié)細(xì)胞懸液IGRA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，因組織病理學(xué)缺乏特征性的病變或被其他病變所掩蓋，這些淋巴結(jié)難以被病理學(xué)診斷為淋巴結(jié)結(jié)核。

在納入本研究的頸部淋巴結(jié)結(jié)核患者中有2例患者的外周血IGRA結(jié)果為陽(yáng)性而淋巴結(jié)細(xì)胞懸液IGRA為陰性。分析該2例患者的病歷資料，發(fā)現(xiàn)其中1例患者的頸部淋巴結(jié)結(jié)核病變均發(fā)生大面積液化壞死并波及皮下組織,術(shù)中切取液化壞死區(qū)邊緣部分的可疑頸部淋巴結(jié)病變組織制備淋巴結(jié)懸液，可能未切取到淋巴結(jié)組織或切取的有效淋巴結(jié)組織過(guò)少而導(dǎo)致陰性結(jié)果。另1例切取液化壞死區(qū)周圍腫大頸部淋巴結(jié)標(biāo)本的病理檢查結(jié)果為淋巴結(jié)反應(yīng)性增生，我們推測(cè)該淋巴結(jié)的增生不是由于感染了結(jié)核分枝桿菌而引起，而是淋巴結(jié)液化壞死后引起周圍組織炎癥從而引起的周圍淋巴結(jié)反應(yīng)性增生，因該淋巴結(jié)并未有結(jié)核分枝桿菌侵入而產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，所以該淋巴結(jié)制備的淋巴結(jié)細(xì)胞懸液IGRA檢測(cè)結(jié)果為陰性。但上述推測(cè)是否正確仍需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

IGRA通過(guò)檢測(cè)頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液中結(jié)核分枝桿菌致敏的淋巴細(xì)胞數(shù)量，起到了判斷被檢頸部淋巴結(jié)是否存在結(jié)核分枝桿菌感染的作用，彌補(bǔ)了外周血IGRA檢測(cè)無(wú)法定位結(jié)核感染部位的不足，特別是當(dāng)其他輔助方法提供的診斷證據(jù)不充分時(shí)，為頸部淋巴結(jié)結(jié)核的診斷可提供有力的支撐。但I(xiàn)GRA檢測(cè)作為一種間接檢測(cè)手段，并不能區(qū)分潛伏性結(jié)核感染和活動(dòng)性結(jié)核病，也不能夠檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的數(shù)量，特別是懷疑頸部淋巴結(jié)腫瘤性病變并發(fā)結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)，頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液IGRA檢測(cè)結(jié)果需要結(jié)合其他輔助診斷方法(如GeneXpert MTB/RIF[19]等方法)來(lái)綜合判斷是否為頸部淋巴結(jié)結(jié)核。

本研究采用頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液進(jìn)行IGRA檢測(cè)也存在一定的局限性：由于頸部淋巴結(jié)標(biāo)本需要手術(shù)切取獲得, 因此該方法更適用于對(duì)經(jīng)無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)檢查手段無(wú)法確診頸部淋巴結(jié)結(jié)核而需要行頸部淋巴結(jié)切取活檢的患者；頸部淋巴結(jié)細(xì)胞懸液標(biāo)本無(wú)法如外周血標(biāo)本那樣批量采集、集中處理，其操作程序也較復(fù)雜，檢測(cè)價(jià)格較高，在低收入結(jié)核高負(fù)擔(dān)地區(qū)推廣有一定難度。另外，因本研究樣本量所限，相關(guān)結(jié)論還需進(jìn)行大樣本量的研究來(lái)做進(jìn)一步驗(yàn)證。

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(本文編輯：薛愛(ài)華)

Preliminary report on the value of cervical lymph node cells suspensions performed with interferon-gamma release assay for diagnosing tuberculous lymphadenitis

XUHui,YANGuang-peng,MAJing,XIAZhi-gang,TANGHui,LIJun.

DivisionofOralandMaxillofacialSurgery,People’sHospitalofXinjiangUyghurAutonomousRegion,Urumqi830001,China

XUHui,Email:omsxuhui@139.com

Objective The aim of the study was to evaluate the value of cervical lymph node cells suspensions performed with interferon-gamma release assays (IGRA) for diagnosing cervical tuberculous lymphadenitis (CTL). Methods Of the 48 patients with cervical lymphadenitis, 21 were confirmed as CTL, and 27 were diagnosed as non-CTL. IGRA using peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and cervical lymph node cell suspensions were performed to examine the IFN-γ response to the ESAT-6 and CFP-10 antigens. Spot forming cells (SFCs) in diffe-rent groups were compared using the Mann-WhitneyUtest. Categorical variables were compared using the Pearson Chi-squared test. The criterion for statistical significance wasP<0.05. Results The IGRA sensitivity of Cervical lymph node cell suspensions and PBMC was 90.48% (19/21) and 95.24% (20/21)，respectively．The specificity of cervical lymph node cell suspensions and PBMC was 70.37% (19/27) and 92.59% (25/27)，respectively．There was no significant difference of between sensitivity peripheral blood mononuclear cells and cervical lymph node cell suspensions (χ2=0.00，P>0.05).The specificity of cervical lymph node cell suspensions IGRA was significantly higher than that of peripheral blood mononuclear cells (χ2=4.43，P<0.05). In CTL group, SFCs median of PBMC and cervical lymph node cell suspensions performed IGRA were 109 (52,186) and 68 (30,156), respectively. There was no statistical difference in the SFCs median of PBMC and cervical lymph node cell suspensions (U=175.00,P>0.05). In non-CTL group, SFCs median of PBMC and cervical lymph node cell suspensions performed IGRA were 0 (0, 18) and 0 (0,3),respectively. There was no statistical difference in the SFCs median of PBMC and cervical lymph node cell suspensions. However, the SFCs of cervical lymph node cell suspensions in CTL group was significantly higher than that in non-CTL group (U=45.00,P<0.05). Conclusion Cervical lymph node cells suspensions performed with IGRA can be used as a tool to detect cervical tuberculous lymphadenitis.

Tuberculosis, lymph node； Specimen handling； Enzyme-linked immunospot assay； Interferon-gamma； Sensitivity and specificity

10.3969/j.issn.1000-6621.2017.08.011

新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院科研基金 (20150118)，國(guó)家自然基金 (81160210)

830001 烏魯木齊，新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院口腔頜面外科(許輝、閆廣鵬、李軍)，檢驗(yàn)科(馬晶、夏志剛、唐暉)

許輝， Email: omsxuhui@139.com

2017-05-31)