鄭一鳴,郭建昇

(山西醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院普外科,太原 030001;*通訊作者，E-mail:1713789732@qq.com)

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FOXP1在結直腸癌中的表達及意義

鄭一鳴,郭建昇*

(山西醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院普外科,太原 030001;*通訊作者，E-mail:1713789732@qq.com)

目的 探討FOXP1(fork-head box protein 1)蛋白在結直腸癌中的表達及意義。 方法 采用免疫組化染色方法檢測120例結直腸癌及20例癌旁組織中FOXP1蛋白的表達水平。 結果 FOXP1蛋白在結直腸癌中表達率為68.3%(82/120),顯著高于其在癌旁組織的表達[10.0%(2/20),P<0.05];FOXP1蛋白表達率分別在淋巴結轉移更多、腫瘤分化程度更低、TNM分期更高的結直腸癌分組陽性率更高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);FOXP1蛋白表達率在不同性別、年齡、腫瘤大小和腫瘤部位的結直腸癌分組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論 FOXP1蛋白表達與結直腸癌發(fā)生發(fā)展密切相關,FOXP1蛋白高表達提示腫瘤惡性程度高,預后差。

FOXP1蛋白; 結直腸癌; 免疫組化

結直腸癌是我國最常見的消化道惡性腫瘤之一,每年結直腸癌新增及死亡病例均呈上升趨勢[1]。結直腸癌患者治療方式仍以手術為主,術后輔以化療、靶向藥物治療,但患者術后復發(fā)率較高,每年仍有60余萬人死于該病[2]。FOXP1(叉頭框蛋白)是FOXP亞家族成員,在免疫B細胞不同分化階段均出現表達,參與機體的免疫調控[3]。有學者研究證實FOXP1蛋白與彌漫大B細胞淋巴瘤[4]及乳腺癌[5]發(fā)生密切相關,其在結直腸癌中研究未見報道。本實驗通過免疫組織化學方法,研究120例CRC患者腫瘤組織中FOXP1蛋白表達水平,探討其與結直腸癌發(fā)生發(fā)展及預后的相關性。

1 材料與方法

1.1 組織標本

隨訪2008-04～2012-04在山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院普外科住院的150名結直腸癌(CRC)患者病例,收集其中120例Ⅰ-Ⅳ期患者病例資料。納入標準:患者入院前未行任何抗腫瘤治療,且為首發(fā)腫瘤排除其他腫瘤病史。男58例,女62例;年齡40-80歲,中位年齡60歲。結腸癌77例,直腸癌43例。根據2000年WHO消化系腫瘤分類標準,高分化腺癌25例,中分化腺癌62例,低分化腺癌33例。TNM分期采用UICC(國際抗癌聯盟)2009年發(fā)布的第7版分期統(tǒng)一標準。選取20例癌旁正常組織,所有患者入院前均未接受任何抗腫瘤治療,無其他惡性腫瘤病史。

1.2 試劑

濃縮型兔抗人FOXP1多克隆抗體購自武漢博士德公司。

1.3 免疫組織化學

所有石蠟標本,切片厚度4 μm。采用EnVision法檢測FOXP1的表達情況。加入兔抗人FOXP1多克隆抗體(濃度1 ∶100)。4 ℃冰箱過夜,滴加50 μl的辣根過氧化物酶HRP標記的二抗,DAB顯色。

結果判定:FOXP1蛋白表達定位于胞核內,胞質或胞膜呈棕黃色或棕褐色顆粒為陽性信號。按染色強度進行分類及評分。在40倍鏡下觀察著色強度:細胞未著色(0分)、淡黃色(1分)、棕黃色(2分)、棕褐色(3分);在400倍鏡下判定陽性細胞百分比率:隨機觀察10個視野,陽性細胞百分比率為視野下陽性細胞數占所有瘤細胞的比值,取平均值,<5%(0分)、5%-25%(1分)、>25%-50%(2分)、>50%-75%(3分)、>75%(4分)。將著色強度與陽性細胞百分率的得分相乘,乘積為染色指數(SI)。SI>4為高度表達,≤4為低度表達。染色結果由2名高年資病理醫(yī)生判定。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用 SPSS 19.0進行統(tǒng)計數據,計數資料數據間比較采用χ2檢驗和Fisher確切概率法進行分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 FOXP1蛋白在癌旁和腫瘤組織中的表達

FOXP1蛋白在結直腸癌中的表達明顯高于癌旁組織(見圖1),結直腸癌組織的高表達陽性表達率為68.3%,癌旁組織為10.0%,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,見表1)。

A.高分化結直腸腺癌組織;B.中分化結直腸腺癌組織;C.低分化結直腸腺癌組織;D.癌旁組織(FOXP1低表達)圖1 FOXP1蛋白免疫組化結果在結直腸癌中的表達 (EnVision,×100)Figure 1 Expression of FOXP1 in colorectal cancer (EnVision,×100)

表1 FOXP1蛋白在組織中的表達 (例)

Table 1 Expression of FOXP1 in colorectal tissues (cases)

組織來源n低表達高表達χ2P癌旁組織2018224306<0001腫瘤組織1203882

2.2 FOXP1蛋白表達情況與臨床病理特征的關系

120例CRC患者中,在男性CRC病例中FOXP1蛋白高表達為70.7%,低表達29.3%;女性CRC患者中FOXP1蛋白高表達率為66.1%,低表達率為33.9%,不同性別之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。>55歲與≤55歲年齡組間FOXP1蛋白高表達率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。120例CRC中FOXP1蛋白在結、直腸高表達和低表達差異無統(tǒng)計學差異(P>0.05,見表2)。

120例CRC患者中,高分化腺癌FOXP1蛋白高表達率低于中分化、低分化腺癌,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。不同淋巴結轉移組間FOXP1蛋白高表達率差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。FOXP1蛋白高表達與CRC的TNM分期亦存在密切關系,Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期FOXP1蛋白高表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表2 FOXP1蛋白表達情況與臨床病理特征的關系

Table 2 Comparison of the expression of FOXP1 in colorectal cancer patients with different clinicopathologic parameters

臨床病理特征nFOXP1低表達FOXP1高表達χ2 P性別0288 0591 男5817(293)41(707) 女6221(339)41(661)年齡0189 0664 ≤55歲4415(341)29(659) >55歲7623(303)53(697)腫瘤大小0362 0832 <5cm4512(267)33(733) ≥5cm7526(347)49(653)腫瘤部位0025 0875 結腸7724(312)53(689) 直腸4314(326)29(674)分化程度40748<0001 高2521(840)4(160) 中6213(210)49(790) 低334(121)29(879)淋巴轉移25302<0001 N02616(615)10(385) N16314(222)49(778) N2318(258)23(742)TNM分期11741<0001 Ⅰ+Ⅱ5627(482)29(518) Ⅲ+Ⅳ6411(172)53(828)死亡4836 0028 是6515(231)50(769) 否5523(418)32(582)

3 討論

在我國,結直腸癌患者發(fā)病率和死亡人數逐年上升,目前臨床上以手術治療為主要手段,術后輔助化療、分子靶向藥物等多模式參與治療以提高患者生存率。患者術后復發(fā)率及生存率個體差異較大,可能與機體免疫功能不同有關[6]。 FOXP1蛋白是FOXP亞家族的轉錄因子成員,其家族成員龐大,生理功能尚不完全明確。有研究表明FOXP1蛋白與轉錄抑制、B細胞發(fā)育的轉錄調節(jié)有關,從而與機體的免疫功能密切相關[7-9]。還有研究顯示FOXP1蛋白通過多種信號轉導通路在多種癌癥組織中調控機體細胞分化、分裂、遷移以及代謝等[10-12]。

張鳳梅等[13]通過免疫組化SP法檢測FOXP1在正常膀胱黏膜、低分化膀胱癌組織中的表達,證實FOXP1在低分化膀胱癌中高表達,提示FOXP1蛋白可能發(fā)揮致癌作用促進膀胱癌的發(fā)生與發(fā)展。張亞楠等[14]收集40例彌漫性大B細胞淋巴瘤,通過免疫組化方法檢測FOXP1蛋白的陽性表達率為50%,FOXP1陽性表達者的中位無病生存期(PFS)和中位總生存期(OS)較陰性表達者縮短,證實FOXP1高表達于non-GCB型DLBCL,且可能是DLBCL的一個獨立預后指標,提示預后不良。本研究采用免疫組化Envision法檢測FOXP1蛋白在CRC組織及癌旁正常組織的表達情況,結果顯示FOXP1蛋白在CRC組織高表達率明顯高于癌旁組織,提示FOXP1蛋白可能與CRC的發(fā)生進展有關。癌旁組織為無異型細胞組織,其免疫微環(huán)境與腫瘤組織明顯不同。FOXP1蛋白作為重要的免疫調控因子在細胞異型性明顯的腫瘤組織中高表達可能因為腫瘤細胞微環(huán)境刺激免疫細胞表達的上調所致。研究發(fā)現在臨床分期Ⅲ期+Ⅳ期CRC患者比Ⅰ期+Ⅱ期患者FOXP1蛋白的高表達率更高,在死亡組比非死亡組間高表達率更高,淋巴結轉移N1、N2比N0高表達率更顯著,提示FOXP1蛋白可能與CRC的惡性程度及預后不良有關。結直腸癌隨著臨床分期越高,惡性程度亦明顯增高,可能趨化更多的免疫細胞進入癌組織,導致FOXP1蛋白的更高表達。

張小偉等[15]收集60例乳腺癌手術標本及癌旁乳腺組織60例,通過免疫組化方法檢測FOXP1蛋白在乳腺癌的高表達,與乳腺癌的臨床分期、組織學分級、雌激素受體 (ER)表達顯著相關。乳腺癌為激素依賴性腫瘤,FOXP1的表達與激素受體狀態(tài)(包括雌激素受體α和孕激素受體)呈正相關。FOXP1通過調節(jié)雌激素信號傳導在乳腺癌細胞的增殖中起重要作用,FOXP1的免疫反應性可能與臨床乳腺癌的雌激素依賴性相關,這可能揭示了用他莫昔芬治療的患者有利的預后。以上研究可能提示FOXP1蛋白與多種腫瘤的發(fā)生進展密切相關,FOXP1蛋白檢測可能對結直腸癌(CRC)患者預后指導存在潛在價值,可以在今后的治療措施中開發(fā)新的免疫干預途徑。

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Expression and implication of FOXP1 in human colorectal cancer

ZHENG Yiming,GUO Jiansheng*

(DepartmentofGeneralSurgery,FirstClinicalMedicalCollege,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China;*Correspondingauthor,E-mail:1713789732@qq.com)

ObjectiveTo investigate the expression of FOXP1 in human colorectal cancer and its significance.MethodsExpression of FOXP1 was detected with immunohistochemistry assay in 20 cases of cancer adjacent tissues and 120 cases of colorectal cancer tissues.ResultsThe positivity rate of FOXP1 protein expression in human colorectal cancer tissues was significantly higher than that of cancer adjacent tissues(68.3%vs10.0%,P<0.05).The expression of FOXP1 in colorectal cancer was higher in the more lymph node metastasis,the poorer tumor differentiation and the higher TNM staging colorectal cancer tissues(P<0.05),and there was no significant difference between patients with different sex,age,tumor size and tumor location(P>0.05).ConclusionThe expression of FOXP1 protein is closely related to the occurrence and development of colorectal cancer.The high expression of FOXP1 protein may predict a high degree of malignancy and poor prognosis.

FOXP1; colorectal cancer; immunohistochemistry

鄭一鳴,男,1987-07生,在讀碩士,E-mail:297198478@qq.com

2017-03-02

R735.3

A

1007-6611(2017)06-0602-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.06.020