李秀啟，叢旭日，師吉華，高云芳，姜 濤，楊 健

（1：山東省淡水漁業(yè)研究院，山東省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點實驗室，濟南250013）（2：中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院內(nèi)陸漁業(yè)生態(tài)環(huán)境與資源重點開放實驗室，無錫214081）

耳石鍶標(biāo)記在識別鳙（Aristich thys nobilis）放流個體的可行性?

李秀啟1，叢旭日1，師吉華1，高云芳1，姜 濤2，楊 健2

（1：山東省淡水漁業(yè)研究院，山東省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點實驗室，濟南250013）
（2：中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院內(nèi)陸漁業(yè)生態(tài)環(huán)境與資源重點開放實驗室，無錫214081）

為探討耳石微化學(xué)分析的相關(guān)方法和技術(shù)在鳙（Aristichthys nobilis）放流群體識別中的應(yīng)用，以鳙的1齡幼魚為研究對象，設(shè)置1、2、4、8、16 mg／L 5個濃度梯度的SrCl2溶液標(biāo)記，利用元素電子顯微探針技術(shù)（EPMA）檢測獲得了良好的標(biāo)記圖譜.面分布分析結(jié)果顯示，暫養(yǎng)28 d后外源Sr在耳石的邊緣形成明顯的標(biāo)記環(huán)，與對照組的藍色邊緣相比，高鍶環(huán)帶從黃綠色過渡到橘紅色，隨著標(biāo)記濃度增大有加深的趨勢.定量線分析表明對照組的Sr／Ca比值處于穩(wěn)定的2.14± 0.39，而不同濃度Sr的實驗組Sr／Ca比值均出現(xiàn)一個較為明顯的峰值范圍（5.04～32.32），且外源Sr濃度與耳石邊緣的Sr／Ca比值之間存在明顯的線性關(guān)系，標(biāo)記過程中對照組和標(biāo)記濃度間的死亡率并沒有顯著差異.結(jié)果表明鍶標(biāo)記原理和方法在鳙的大規(guī)模放流群體標(biāo)記是可靠和安全的，驗證了耳石鍶標(biāo)記在識別鳙放流個體上的可行性.建議選擇鳙放流前仔稚魚和幼魚，以4 mg／L設(shè)為外源Sr的最適標(biāo)記濃度，標(biāo)記持續(xù)時間為28 d以上為宜.

鳙；耳石；鍶標(biāo)記；電子探針；群體標(biāo)記技術(shù)

自2008年我國開始設(shè)立專項資金實施增殖放流工作以來，每年數(shù)以億萬的苗種被放流自然水域，重大意義在于補充漁業(yè)資源和修復(fù)水域生態(tài)系統(tǒng).當(dāng)前放流工作迫切需要解決的是如何客觀評價增殖放流效果，可靠的標(biāo)記手段一直是科學(xué)評價放流魚類增殖效果的技術(shù)瓶頸.目前，群體標(biāo)記方法主要有體外標(biāo)記、熒光標(biāo)記、化學(xué)標(biāo)記和分子標(biāo)記［1-2］，傳統(tǒng)的體外標(biāo)記會影響魚類正常生長和存活，損失率很高，回捕個體記錄少，統(tǒng)計往往依賴于漁業(yè)報告.先進的體內(nèi)熒光和電子標(biāo)簽價格較高，標(biāo)記過程復(fù)雜，需要昂貴的特殊設(shè)備和大量的專業(yè)人員來跟蹤識別，不適宜大規(guī)模的群體標(biāo)記放流工作，而且特定外源物質(zhì)的熒光或化學(xué)標(biāo)記往往涉及標(biāo)記的有效保留時間和外源物質(zhì)的安全性問題［3］.

耳石微化學(xué)分析已成為研究魚類生活史的重要方法之一.魚類在生長發(fā)育過程中，水體中的碳酸鈣在耳石上沉積的同時，其他微量元素也被沉積在耳石中，由于它的非細胞性和代謝惰性，一般不會發(fā)生分解或重吸收，這種元素的信息可以一直保存下來，成為記錄魚類生活史的元素指紋（elemental fingerprints）.耳石元素指紋分析能有效表征魚類特定生活階段所特有的微化學(xué)組成，以此重新構(gòu)建或反演魚類的生活史和環(huán)境史中相關(guān)問題.利用電子顯微探針技術(shù)（EPMA）分析魚類耳石上Sr和Sr／Ca含量比值，成為獲取魚類生活履歷的有效手段，特別在洄游性魚類能夠準(zhǔn)確而且直觀地“反演”魚類過去生活環(huán)境“履歷”［4-5］，被廣泛應(yīng)用于魚類生活史重建、魚類資源時空動態(tài)監(jiān)測、產(chǎn)卵場溯源和種群識別等研究［6-8］.鍶作為淡水魚類和海洋魚類特別是具有生殖洄游習(xí)性的魚類一種生物標(biāo)志物［9-10］，或作為一種人工標(biāo)記元素用來評估人工增殖放流的效果［11-12］，在漁業(yè)生物學(xué)研究中具有重要應(yīng)用價值.國內(nèi)一些學(xué)者開展了鍶標(biāo)記的安全濃度和浸染時間一些探索，王臣等［13］利用外源Sr浸染大麻哈魚（Oncorhynchus keta）發(fā)眼卵后期胚胎在耳石得到清晰的標(biāo)記環(huán)，表明可以利用外源Sr對大麻哈魚耳石進行標(biāo)記.

鳙（Aristichthys nobilis）作為我國的“四大家魚”之一，增殖放流不僅補充內(nèi)陸水體漁業(yè)資源，而且在富營養(yǎng)化水體中放養(yǎng)濾食性的鰱、鳙被認為是控制藍藻水華、凈化水質(zhì)的有效手段［14-15］，在我國淡水增殖漁業(yè)中占有極其重要的地位.以山東省東平湖為例，自2005年來連續(xù)11年累計放流魚蟹15862萬尾（只），其中鰱鳙所占比例為51.46%，由于尚未開展規(guī)范的放流效果評估，大規(guī)模生產(chǎn)性放流在某種意義上帶有很大的盲目性，放流群體對漁業(yè)資源的恢復(fù)效果和水域生態(tài)系統(tǒng)的影響還不能做出科學(xué)的回答.本研究采用SrCl2溶液標(biāo)記鳙的幼魚耳石，探索不同標(biāo)記濃度和暫養(yǎng)時間下的標(biāo)記效果，建立適用于大規(guī)模標(biāo)記早期魚苗的耳石微化學(xué)標(biāo)記實驗條件，通過鳙的耳石Sr／Ca比值分析以期準(zhǔn)確識別放流個體和增殖放流效果評價提供技術(shù)手段.

1 材料與方法

1.1 實驗魚來源及標(biāo)記實驗

采集育苗場培育的放流魚類鳙的1齡魚（體長為10.78±1.48 cm，體重27.13±14.02 g）作為實驗魚.取水族箱（125 cm×52 cm×50 cm）18個，注入曝氣2 d以上的室外養(yǎng)殖池塘用水，保持水溫18℃，根據(jù)水的體積及放養(yǎng)密度，隨機挑取飽滿健壯、規(guī)格基本一致的幼魚放入水族箱中，每箱30尾，放魚時隨機抽樣測量魚的體長和體重.

按劑量向相應(yīng)箱中加入SrCl2母液，至浸染質(zhì)量濃度分別達到1、2、4、8、16 mg／L，共5個梯度，每個濃度設(shè)置3個平行，3個空白對照，共計18個養(yǎng)殖實驗組，對應(yīng)魚缸編號為CK、A、B、C、D、E組.實驗于2015年5月12日開始，至6月11日結(jié)束，期間定時投喂人工顆粒飼料，每天早晨吸污，每3 d換水1次，換水量為箱內(nèi)水量（182m3）的1／3，水溫保持在19.5～24.0℃，及時清除死亡個體并計數(shù)，標(biāo)記暫養(yǎng)實驗28 d后全部結(jié)束.

1.2 耳石摘取與前處理

用剪刀和鑷子解剖幼魚的頭骨，在聽囊內(nèi)取出微耳石，剔除有機質(zhì)，用蒸餾水清洗后晾干，置于離心管中干燥備用.

將耳石用AB膠水黏于小塊樹脂上，待凝固后以橫截面平行于底面的方向?qū)в卸臉渲瑝K黏貼于磨具底座進行環(huán)氧樹脂（Epofix，丹麥Struers公司）包埋；樹脂凝固后并取出，使用AB膠將其黏貼于載玻片上，使用500目砂輪和1200目砂紙打磨至核心即將暴露后，切下樹脂塊將其翻轉(zhuǎn)后黏貼于另一塊載玻片上并打磨至核心完全暴露；使用磨拋機（Roto Pol-35，丹麥Struers公司）裝備機織布拋光盤配合拋光液拋光，至耳石表面無明顯劃痕；樣品放入Millo-Q水中超聲清洗5 min后，自然條件下晾干24 h；完全干燥后，使用真空鍍膜機（JEE-420，日本電子株式會社）蒸鍍碳膜（36 A，25 s）.

1.3 耳石的EPMA分析

利用電子微探針分析儀（JXA-8100型EPMA，日本電子株式會社）進行線分析和面分析［16-17］.以碳酸鈣（CaCO3）和鈦酸鍶（SrTiO3）為標(biāo)準(zhǔn)樣品，線分布分析的加速電壓和電子束電流分別為15 kV和2.0×10-8A，束斑直徑5μm，每點駐留15 s，以2μm為間隔，連續(xù)測定Sr和Ca元素含量.面分布分析的加速電壓和電子束電流分別為15 kV和5.0×10-7A，束斑直徑3μm，像素為3μm×3μm，每點駐留30ms，測定Sr元素含量的面分布狀況.

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)分析采用Excel 2010軟件進行線分布分析中的平均值和倍數(shù)計算以及Sr／Ca比值變化作圖，采用SPSS 17.0軟件進行不同階段及與對照組的Sr／Ca比值差異進行非參數(shù)檢驗（P＜0.05，Mann-Whitney U-test），顯著性水平設(shè)定為P＜0.05.

由于耳石中Sr含量遠小于Ca含量，將Sr／Ca比值標(biāo)準(zhǔn)化，即統(tǒng)一用Sr含量除以Ca含量并乘以103，簡稱Sr／Ca比值.耳石不同Sr／Ca比值水平以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示［20］.

2 結(jié)果與分析

2.1 不同鍶標(biāo)記濃度和暫養(yǎng)期間鳙的存活情況

耳石鍶標(biāo)記實驗鳙的1齡魚經(jīng)暫養(yǎng)28 d后，體長增加為14.78±2.33 cm，體重為43.00±14.31 g.各標(biāo)記組和對照組在暫養(yǎng)期間均出現(xiàn)不同程度的死亡情況，尤其在暫養(yǎng)第1周和第2周死亡率均較高，但標(biāo)記組死亡的平均數(shù)和對照組經(jīng)t-檢驗整體無顯著差異（P＞0.05），實驗結(jié)束實驗魚的體長和體重增加，與對照組差異不顯著（P＞0.05）（圖1）.在本實驗設(shè)計的劑量范圍內(nèi)，Sr對實驗魚未表現(xiàn)急性毒性，16mg／L濃度的SrCl2溶液對幼魚沒有致死作用.

圖1 不同浸染濃度和暫養(yǎng)時間鳙的死亡數(shù)Fig.1 The death number of Aristichthys nobilis in differentmarking concentrations and breeding times

2.2 外源Sr在鳙耳石的面分布特征

電子微探針分析結(jié)果（圖2）顯示，所有個體耳石核心區(qū)及其周邊均為Sr濃度較低的藍色，不同Sr濃度標(biāo)記的耳石邊緣包圍著黃綠色和紅色區(qū)域.當(dāng)SrCl2溶液濃度為1、2mg／L時，能在耳石邊緣上檢測到較為明顯的黃綠色標(biāo)記（圖2A，2B）；當(dāng)SrCl2溶液濃度為4mg／L時，在耳石的邊緣形成較為明顯的橘紅色高鍶環(huán)帶（圖2C）；當(dāng)外源Sr的浸染濃度達到8、16 mg／L，圖2中D-1、D-2、E-1和E-2耳石邊緣的紅色環(huán)帶不斷加深.與之相比，對照組（CK）外圍無變化，其面分布顯示較為均一的藍色.

2.3 外源Sr在鳙耳石上Sr／Ca比值變化特征

對照組的Sr／Ca比值沒有出現(xiàn)較大波動，而不同濃度的實驗組在耳石邊緣Sr／Ca比值均有1個明顯的峰值出現(xiàn)（圖3）.低濃度組Sr／Ca比值差異不顯著（P＞0.05），相同浸染濃度的平行組之間Sr／Ca比值的平均值差異較為顯著（P＜0.05），高濃度間Sr／Ca峰值差異顯著（P＜0.01）.

圖2 鳙耳石鍶沉積狀況面分布（CK、A、B、C、D和E分別為0、1、2、4、8和16mg／L Sr標(biāo)記）Fig.2 Concentrations ofmapping analysis of the Sr in otoliths of Aristichthys nobilis

表1 鳙耳石Sr／Ca比值微化學(xué)變化Tab.1 Fluctuation of Sr／Camicrochemistry in the edge in otoliths of Aristichthys nobilis

鳙的耳石Sr／Ca比值分為2個階段，分別是未經(jīng)外源Sr標(biāo)記前階段和外源Sr標(biāo)記后階段（表1）.其中，標(biāo)記前階段，對照組和實驗組耳石從核心向邊緣的不同徑長（0～248μm，518μm）Sr／Ca比值變化比較穩(wěn)定，Sr／Ca比值為2.14±0.39；且二者差異不顯著（P＞0.05）；標(biāo)記后階段，實驗組耳石邊緣（280～520μm）均出現(xiàn)較為明顯的峰值，不同標(biāo)記濃度（1、2、4、8和16 mg／L）的耳石Sr／Ca比值對應(yīng)為5.04±0.87、5.98±1.04、10.87± 0.44、17.72±0.77和32.32±4.75.

圖3 鳙耳石鍶沉積狀況線分析Fig.3 Sr concentrations of line analysis of otoliths of Aristichthys nobilis

與面分析不同濃度標(biāo)記效果的結(jié)果相印證，隨著浸染濃度的增加，Sr／Ca比值峰值也越來越大.外源Sr濃度與耳石邊緣的Sr／Ca比值之間有較為明顯的線性關(guān)系：y＝1.8617x+2.726（R2＝0.9979）.說明Sr在耳石上的沉積速率和沉積量不同，受外源Sr濃度的影響較為明顯（圖4）.

3 討論

3.1 鳙耳石鍶標(biāo)記可靠性分析

水體中Sr沉積在耳石上的過程與水環(huán)境條件（如Sr背景濃度、水溫、鹽度）和魚類生理發(fā)育狀態(tài)有關(guān)［18-19］.Sr主要存在于水域中，由于地理差異和河流過程的不同，Sr在淡水、河口和海水中濃度差別很大.我國長江下游水體中元素濃度背景值Sr濃度為0.24 mg／L［20］.河口表層水溶解Sr濃度水平表現(xiàn)為從長江（平均0.22 mg／L，范圍：0.02～0.30 mg／L）向北至黃河（平均0.74mg／L，范圍：0.05～0.95 mg／L）逐漸升高［21-23］.海水中Sr濃度大致為8.5 mg／L，且在海洋中濃度基本不變［24］.通常三類水體中Sr／Ca比值平均為淡水區(qū)（2.7±1.5）、河口區(qū)（5.6±1.1）和海水區(qū)（8.3±4.5）［25］. Brown等［26］統(tǒng)計分析美國淡水、河口及海水中Sr／Ca比值發(fā)現(xiàn)，海水的Sr／Ca比值（8.17～8.87）相對穩(wěn)定，而河流（0.27～19.18）和淡水湖泊（0.20～5.02）則波動較大.

圖4 耳石邊緣Sr／Ca比值與外源Sr濃度的線性關(guān)系Fig.4 Linear relation between Sr／Ca ratio of otolith edge and exogenous Sr concentration

本實驗元素定量線分析和面分布分析結(jié)果直觀而鮮明地顯示：1、2、4、8、16 mg／L共5個濃度梯度的SrCl2溶液在鳙的幼魚耳石上均能產(chǎn)生明顯的標(biāo)記環(huán)，顏色由黃綠色逐漸變化為深紅色.通過比較不同濃度的標(biāo)記特征，外源Sr濃度在4 mg／L可以很明顯地被電子微探針技術(shù)所檢測.據(jù)王臣等［13］對大麻哈魚發(fā)眼卵后期胚胎浸染實驗的結(jié)果，經(jīng)48 h外源Sr浸染（50、100、200、400mg／L）后暫養(yǎng)至12 d在耳石上形成了較為明顯的“高鍶環(huán)帶”；再經(jīng)100 d暫養(yǎng)后，實驗魚仍能正常生長，已形成的“高鍶環(huán)帶”沒有減退現(xiàn)象，而且“高鍶環(huán)帶”后的耳石部分又逐漸恢復(fù)到正常的藍綠色.同時，考慮到本研究中標(biāo)記組與對照組間個體死亡率并沒有顯著差異，說明Sr浸染濃度對鳙魚幼魚影響較小.因此，對鳙而言較為合適的耳石標(biāo)記濃度應(yīng)在4mg／L以上.

3.2 鳙耳石Sr標(biāo)記的最佳浸染時間

外源Sr沉積在耳石內(nèi)濃度變化并非立即被響應(yīng)，而是存在著一定時間的時滯.Milton等［27］在水體中添加Sr對120條澳洲肺魚barramundi（Lates calcarifer）的幼魚進行養(yǎng)殖實驗，對1～2和7～11 d生長間隔的耳石輪紋進行原位元素檢測，結(jié)果表明魚體對水體元素變化的適應(yīng)期為2周，在此期間元素濃度變化幅度較大，一旦魚體與水體達到平衡后，耳石中與水體中的Sr／Ca比值亦具有正相關(guān)關(guān)系.

郭弘藝等［28］對日本鰻鱺（Anguilla japonica）幼體的耳石微化學(xué)分析表明：幼鰻自海洋至淡水的遷徙過程中，以Sr元素為代表的環(huán)境強響應(yīng)元素存在明顯的時滯效應(yīng)，其含量從變態(tài)起始的2915.5±449.41μg／g，至變態(tài)完成的2244.7±383.73μg／g，最后降低至1053.9±450.90μg／g，前后降低了63.9%.研究表明Sr含量呈持續(xù)平緩的下降，并非立即響應(yīng)了所棲息的水環(huán)境變化.長江口口門處九段沙采集的玻璃鰻平均日齡為141 d，與上游靖江段采集的日本鰻鱺幼體日齡相差12～19 d，即從九段沙遷徙至上游的靖江段可能需要15 d左右［29］.在受控條件下養(yǎng)殖實驗也顯示，幼鰻耳石內(nèi)Sr／Ca比值對水體鹽度變化的適應(yīng)期為10 d或者以上［30］.王臣等［13］對大麻哈魚胚胎標(biāo)記研究結(jié)果表明：在大麻哈魚耳石上從浸染開始到Sr在耳石上沉積有延時過程，浸染時間為48 h，而Sr峰值卻持續(xù)12 d以上，表明鍶元素在水體-魚體-耳石遷移富集過程是漸進的.

上述研究結(jié)果表明，環(huán)境強響應(yīng)元素（Sr）濃度需要機體較長時間的生理調(diào)節(jié)，才能達到平衡狀態(tài).本研究實驗魚為鳙的1齡幼魚，暫養(yǎng)28 d后檢測僅在耳石邊緣部分發(fā)現(xiàn)較細弱的“高鍶環(huán)帶”，由于實驗未能繼續(xù)下去，其峰值持續(xù)天數(shù)無法確定.為保證有良好的標(biāo)記效果，根據(jù)日輪沉積規(guī)律在對鳙群體的幼魚耳石進行外源Sr標(biāo)記時，可適當(dāng)延長浸染的時間在28 d以上.

3.3 鳙耳石Sr標(biāo)記的安全限量

Sr作為生物體的必須微量元素，不僅具有促進成骨細胞生長和抑制破骨細胞形成的作用［31-32］，而且還有促進骨髓間質(zhì)干細胞增殖并向成骨細胞分化、促進血管形成、改善骨質(zhì)強度等作用［33］.在一定范圍內(nèi)，體內(nèi)高Sr高Ca對機體非常有益，若體內(nèi)出現(xiàn)高Sr低Ca，則對機體生理代謝產(chǎn)生不利影響，甚至產(chǎn)生多種病理變化.已經(jīng)證實在魚的早期發(fā)育階段，魚體Sr能夠明顯地抑制Ca的吸收［34］，過高的外源Sr濃度會使耳石Sr／Ca比值不穩(wěn)定［13］.Birge等［35］在28 d的實驗觀察到水體中的Sr對虹鱒（Oncorhynchusmykiss）從胚胎發(fā)育到孵化后第3 d早期生命階段的影響，在Sr濃度49 mg／L的水平下可導(dǎo)致虹鱒仔稚魚10%的畸形率和死亡率.Pyle等［36］證實了水中的Sr與卵孵化率降低具有顯著相關(guān)性，但與幼苗的生長和死亡率沒有相關(guān)性.

宋鴻建等［37］對大麻哈魚的研究發(fā)現(xiàn)，Sr濃度為10mg／L時大麻哈魚的各生長指標(biāo)和存活率最高，說明此濃度對大麻哈魚的生長有促進作用，但是隨著Sr濃度的增加，大麻哈魚稚魚的存活率出現(xiàn)降低的現(xiàn)象，推測較高濃度的Sr抑制稚魚的生長.建議在對大麻哈魚稚魚長期的暴露實驗中Sr的安全質(zhì)量濃度應(yīng)控制在10 mg／L之內(nèi).王臣等在大麻哈魚實驗使用的Sr濃度為50 mg／L，耳石上形成50倍于正常值以上的Sr沉積高峰，產(chǎn)生極強的標(biāo)記輪，實驗魚都能保持正常生長和攝食，浸染過程中也未產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，說明50～400 mg／L、48 h的浸染條件是安全的；同時發(fā)現(xiàn)高濃度的外源Sr可能影響了耳石元素的正常沉積［13］.本研究所有被標(biāo)記個體均未出現(xiàn)Sr、Ca沉積異?，F(xiàn)象，并保持良好的正線性相關(guān)，同時養(yǎng)殖的結(jié)果也并未發(fā)現(xiàn)標(biāo)記組的死亡率與對照組有顯著差異.說明對于鳙的幼魚而言，外源Sr濃度在16 mg／L以下并未產(chǎn)生任何影響.

Sr作為一種生物必須元素，急性毒性風(fēng)險較小，利用Sr作為標(biāo)記物其安全性是非常高的.國際上尚未頒布Sr的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，美國和加拿大一些州省采用40（短期）和21 mg／L（長期）標(biāo)準(zhǔn)用于保護淡水生物［38-39］.美國環(huán)境保護局（EPA）規(guī)定公共飲用水的穩(wěn)定Sr的濃度上限為4 mg／L［40］.我國國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：Sr濃度大于0.2 mg／L為鍶礦泉水，其限量指標(biāo)為小于5 mg／L.因此，綜合考慮水質(zhì)安全以及標(biāo)記效果，對于鳙而言，4 mg／L的外源Sr標(biāo)記濃度既能達到顯著的標(biāo)記效果，又能在安全的飲用水范圍內(nèi)，因此為最佳的標(biāo)記濃度.

4 結(jié)論

本研究首次對淡水魚類鳙的幼魚進行了外源Sr標(biāo)記的研究，探討相關(guān)的標(biāo)記濃度和浸染持續(xù)時間.從操作性角度考慮，鳙等鯉科魚類微耳石較大易于摘取，Sr和Ca等元素以類質(zhì)同象的方式沉淀在耳石晶格內(nèi)部空位和晶格間隙中，且日輪輪紋較易觀察，因此，首選以沉積率較大的微耳石進行元素微化學(xué)分析的材料.利用EPMA技術(shù)檢測耳石中Sr元素的沉積雖具有一定的時滯效應(yīng)，但由于濃度較高而穩(wěn)定，日間變化趨勢明顯，Sr／Ca比值非常穩(wěn)定，明顯的標(biāo)記效果可以較好地指示棲息地水環(huán)境狀況.耳石Sr標(biāo)記可在同一環(huán)境下的魚類進行大批量標(biāo)記，成本低，對魚無傷害，安全性好，不存在標(biāo)志丟失問題，而且還能確保魚類成活率和水產(chǎn)品質(zhì)量安全.上述分析表明外源Sr標(biāo)記在淡水魚類的放流群體識別上具有很高的可行性.

根據(jù)實驗結(jié)果和Sr標(biāo)記安全限量分析，建立鳙的幼魚群體標(biāo)記技術(shù)體系：對放流前育苗場幼魚進行外源Sr標(biāo)記，以4mg／L為外源Sr的最適浸染濃度，以28 d作為標(biāo)記持續(xù)時間，利用電子顯微探針技術(shù)（EPMA）分析隨機取樣個體耳石上的Sr和Sr／Ca比值，可以準(zhǔn)確識別放流個體和開展后續(xù)的放流效果評價.

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Feasibility analysis of releasing individuals of Aristichthys nobilis identification based on otolith Srmarkers

LIXiuqi1，CONG Xuri1，SHIJihua1，GAO Yunfang1，JIANG Tao2＆YANG Jian2
（1：Shandong Freshwater Fisheries Research Institute，Shandong Provincial Key Laboratory ofFreshwater Aquaculture Genetic Breeding，Jinan 250013，P.R.China）
（2：Key Laboratory ofEcological Environmentand Resources of Inland Fisheries，F(xiàn)reshwater Fisheries Research Center，Chinese Academy of Fishery Sciences，Wuxi 214081，P.R.China）

To explore the method of microchemistry marking on the otolith of Aristichthys nobilis，the 1-year-old juveniles were reared at five different concentrations（1，2，4，8，16mg／L）for 28 days，and the exogenous Sr sedimentation in otolithswere detected with electron probemicroanalyzer（EPMA）.Themapping analysis showed thatobvious strontium signatures in the edge of otoliths of juvenileswere produced at different concentrations of Sr.The yellow-green strontium bandappeared in low level，the deep red zone shown as the concentration gradually increased.Line analysis indicated that the Sr／Ca ratio of control group was stable at 2.14±0.39，butwhich in the experimental groups of the different concentrations all appeared quite dramatically peak strontium value（5.04-32.32）.Significant linear relationship was found between exogenous Sr and the Sr／Ca ratio in the edge of otoliths.There was also no significant difference in death rate between control and experimentalgroups.Allof these suggested that themethod of Sr marking confirmed the feasibility in recognizing the releasing individuals of A.nobilis.We suggest thatstock discrimination of A.nobilis weremarked in larval and juvenile and the concentration of exogenous Sr should be 4 mg／L，lasting formore than 28 days.

Aristichthys nobilis；otolith；strontium marking；electron probemicroanalyzer；stock mark

DOI 10.18307／2017.0415

?2017 by Journal of Lake Sciences

?公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項經(jīng)費（201303050）和山東省2016年度農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新課題聯(lián)合資助.2016-06-07收稿；2016-09-27收修改稿.李秀啟（1968～），男，博士，副研究員；E-mail：xiuqili＠sina.cn.