李會榮,宮玲玲

（山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所，山東濟(jì)南250022）

利用氣相色譜法同步測定飼料香味劑中麝香草酚、丁香酚和香蘭素的研究

李會榮,宮玲玲

（山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所，山東濟(jì)南250022）

本研究建立了同時測定飼料香味劑中麝香草酚、丁香酚和香蘭素含量的氣相色譜方法。飼料樣品用無水乙醇提取，以HP-5（30 m×0.25 μm）柱為分析柱，F(xiàn)ID檢測器在溫度270℃時檢測，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：在所選擇的色譜條件下，空白載體中麝香草酚、丁香酚和香蘭素能很好的分離；麝香草酚、丁香酚和香蘭素在1.0～500 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，最低定量限為50 mg/kg；添加回收率為86%～104%，變異系數(shù)為2.7%～6.7%。本方法樣品前處理簡單，簡便可靠，可用于飼料香味劑中麝香草酚、丁香酚和香蘭素的同步檢測。

飼料香味劑；麝香草酚；丁香酚；香蘭素；同步測定

麝香草酚又稱百里香酚，對口腔咽喉黏膜有殺菌作用，能刺激唾液和消化液的分泌，促進(jìn)氣管纖毛運(yùn)動，有利于氣管黏液的分泌。丁香酚可緩解腹部脹氣，增加胃液分泌，增強(qiáng)消化能力，減輕惡心嘔吐，對多種細(xì)菌有抑制作用。香蘭素具有濃烈的奶香味，能把動物吸引到飼料周圍，增加動物食欲，改善飼料的適口性。

國內(nèi)食品添加劑中百里香酚（中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，2015）、丁香酚（中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，2015）和香蘭素（中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，2008）的檢測技術(shù)，主要是以氣相色譜為主。飼料添加劑中香味物質(zhì)，大多也是以氣相色譜方法檢測為主（宮玲玲等，2014；山東省技術(shù)監(jiān)督局，2012）。本研究針對飼料香味劑添加成分復(fù)雜的特性，參照食品添加劑的檢測方法，建立了氣相色譜法同步檢測飼料香味劑中麝香草酚、丁香酚和香蘭素的方法，同時對該方法的檢出限、準(zhǔn)確度和精密度等進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑分析純無水乙醇。

1.1.2 儀器和設(shè)備分析天平（感量0.1 mg）；Agilent6890N氣相色譜儀（具有FID檢測器和可程序升溫的柱溫箱）。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)麝香草酚、丁香酚和香蘭素標(biāo)準(zhǔn)品純度大于98%。

1.1.3.1 混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液準(zhǔn)確稱取麝香草酚、丁香酚和香蘭素各0.1000 g，置于10 mL棕色容量瓶中，加5 mL無水乙醇溶解后，用無水乙醇定容。該溶液中麝香草酚、丁香酚和香蘭素的濃度均為10 mg/mL。2～8℃密封保存，保質(zhì)期1個月。

1.1.3.2 混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液準(zhǔn)確移取麝香草酚、丁香酚和香蘭素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液1 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，用無水乙醇定容。該溶液中麝香草酚、丁香酚和香蘭素的濃度均為1 mg/mL。2～8℃保存，保質(zhì)期1周。

1.1.3.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液準(zhǔn)確移取適量麝香草酚、丁香酚和香蘭素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，分別配制成濃度為1.0、5.0、10、20、50、100、500 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 方法

1.2.1 氣相色譜參考條件的確定由于香味劑的相關(guān)特性，在參照多種香味劑檢測方法（李會榮，2014）的基礎(chǔ)上，對色譜條件進(jìn)行了逐步的優(yōu)化，最終確定的條件為：色譜柱：HP-5（30 m×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：250℃；分流進(jìn)樣：分流比10∶1；載氣流速：2.0 mL/min；柱溫箱溫度：起始90℃，保持1 min，以20℃/min的速率升溫至240℃，保持0.1 min；檢測器溫度：270℃。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。結(jié)果表明，該色譜條件均能滿足色譜分析的需要。

圖1 麝香草酚、丁香酚和香蘭素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液圖譜

1.2.2 提取條件的確定由于大部分香味劑均能溶解于有機(jī)溶劑，相比其他試劑無水乙醇具有毒性和成本較低的優(yōu)點(diǎn)，因此選擇無水乙醇作為提取劑。在空白載體中添加相同濃度的香味劑，選用振蕩器振蕩、旋渦混合器混勻和手動振搖三種不同的方法提取，上機(jī)測定其回收率。結(jié)果表明，不同提取方式的回收率幾乎相同，考慮到成批量操作時簡便的因素，本實(shí)驗(yàn)采用振蕩器振蕩提取5 min的方式。最終確定的提取步驟為：準(zhǔn)確稱取適量試樣（精確至0.0002 g），置于10 mL棕色容量瓶中，加5 mL無水乙醇，振蕩器振蕩5 min后，用無水乙醇定容至刻度。混勻后靜置。取上清溶液，過0.45 μm的微孔濾膜，供上機(jī)測定。若試液中香味劑的濃度超出標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的線性范圍，進(jìn)樣前用一定體積的無水乙醇稀釋，使稀釋后上機(jī)試液中的香味劑濃度在標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的線性范圍內(nèi)。

3 結(jié)果

3.1 氣相色譜法的線性范圍將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液依次從低濃度到高濃度進(jìn)樣，每一濃度進(jìn)樣三針，以所得峰面積的平均值為縱坐標(biāo)，標(biāo)液濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出回歸方程和相關(guān)系數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，麝香草酚、丁香酚和香蘭素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度在1.0～500 μg/mL內(nèi)有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.999以上。

圖2 麝香草酚、丁香酚和香蘭素標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)性用50 μg/mL麝香草酚、丁香酚和香蘭素的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液連續(xù)進(jìn)樣6次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。結(jié)果表明，同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液有較好的重復(fù)性，其RSD均小于5.0%。

表1 混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液峰面積重復(fù)性檢測

3.3 最低定量限的確定在空白載體中分別添加麝香草酚、丁香酚和香蘭素各50 mg/kg，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3和表2。結(jié)果表明，在添加量為50 mg/kg時，其回收率為在80%以上，而添加量在100 mg/kg以上時，回收率也均在80%以上。由于該方法中采用程序升溫的色譜條件，當(dāng)添加量小于50 mg/kg時，其信噪比不能滿足定量的要求，所以，將該方法的最低定量限定為50 mg/kg。目前市場上常見的飼料香味劑中麝香草酚、丁香酚和香蘭素的配方含量為0.2～100 g/kg。所以，該定量限完全可以滿足實(shí)際生產(chǎn)中產(chǎn)品含量檢測的要求。

圖3 空白載體中添加麝香草酚、丁香酚和香蘭素50 mg/kg色譜圖

表2 方法最低定量限確定的檢測結(jié)果

3.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度的測定在空白載體中分別添加各100、1000、2000、3000 mg/kg濃度的麝香草酚、丁香酚和香蘭素，每個濃度做4次重復(fù)，分別計算其回收率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。結(jié)果表明,在添加不同濃度的麝香草酚、丁香酚和香蘭素時，其回收率為86%～104%，且相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%。

3.5 方法的適用范圍為考察方法的適用性，本文研究了5個香味劑樣品，2個樣品中三種成分均有，另3個樣品中只含有香蘭素和丁香酚。5個樣品測定結(jié)果均大于樣品添加含量的標(biāo)示量。檢測結(jié)果見表4。結(jié)果表明，不同的生產(chǎn)廠家、不同成分的香味劑均可用該方法檢測。

4 結(jié)論

本研究建立的飼料香味劑中麝香草酚、丁香酚和香蘭素同步檢測方法，色譜條件易于掌握，儀器性能穩(wěn)定，測試數(shù)據(jù)重復(fù)性好，回收率高，精密度和準(zhǔn)確度均能滿足分析要求，且具有較好的定量限。

表3 空白載體中添加回收的檢測結(jié)果

表4 方法適用范圍的驗(yàn)證

[1]宮玲玲，李會榮，氣相色譜法同步測定飼料添加劑中百里香酚、香芹酚的研究[J].中國飼料，2014，2（6）：38～40.

[2]李會榮，利用氣相色譜法同步測定飼料香味劑中四種成分的研究[J].山東畜牧獸醫(yī)，2014，2（183）：3～5.

[3]山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.DB37/T 2141-2012[S].山東省地方標(biāo)準(zhǔn)—飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的測定-氣相色譜法.濟(jì)南：山東標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012-05-14.

[4]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.GB 1886.129-2015[S].中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)—食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑丁香酚.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2015-09-22.

[5]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.GB 1886.139-2015[S].中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)—食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑百里香酚.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2015-09-22.

[6]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.GB 3861-2008[S].中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)—食品添加劑香蘭素.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008-12-03.■

This study established a gas chromatographic method for simultaneous determination of thymol，eugenol and vanillin in feed flavor.Feed samples were firstly extracted by anhydrous ethanol，after being isolated by HP-5（30 m× 0.25 μm）capillary column，eventually detected by flame ionization detector（FID）detector at 270℃，and were quantified by external standard method.The results showed that under the chosen chromatographic conditions，thymol，eugenol and vanillin were separated successfully；thymol，eugenol and vanillin were linear in the range of 1.0 to 500 μg/mL and the lowest determination limit was 50 mg/kg.The relative standard deviation（RSD）was 2.7%～6.7%when the recovery rate was 86%～104%.The method was proved to be simple，rapid and resproducible for determination of thymol，eugenol and vanillin in feed flavor.

feed flavor；thymol；eugenol；vanillin；simultaneous determination

S816.17

A

1004-3314（2017）14-0036-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171409