李 珍 許 濤 程雄飛

E2F-1在肝細胞癌中的表達情況及其對患者預(yù)后的影響研究

李 珍 許 濤 程雄飛*

目的 分析E2F-1在肝細胞癌中的表達，探討E2F-1對患者預(yù)后的影響。方法 收集2006年1月至2011年12月行根治性切除術(shù)的79例肝癌患者的病理標本為研究對象。取距離癌灶>5cm的癌旁組織30例作為對照。采用免疫組化法檢測E2F-1的表達情況。對比腫瘤組織與癌旁組織E2F-1的表達差異，分析E2F-1的表達與臨床病理參數(shù)間的相關(guān)性及對術(shù)后生存時間的影響。結(jié)果 79例腫瘤組織中E2F-1陽性表達39例，陽性率為49.4%；30例癌旁組織中未見E2F-1表達。腫瘤組織與癌旁組織中的E2F-1陽性表達率具顯著性差異（P<0.05）。E2F-1的表達與AFP水平、TNM分期及腫瘤直徑相關(guān)，隨著AFP水平的下降，TNM分期的降低及腫瘤直徑的減小，E2F-1的表達越高（P<0.05）；而與患者的年齡、HBsAg感染情況、GGT及腫瘤數(shù)量等無關(guān)（P>0.05）。E2F-1陽性組總體1、3、5 年生存率分別為61.5%、59.0%、46.2%，陰性組總體1、3、5 年生存率分別為37.5%、32.5%、17.5%，組間比較E2F-1陽性組總體1、3、5 年生存率均高于E2F-1陰性組（P<0.05）。結(jié)論 E2F-1在肝癌組織中呈高表達，其表達水平與AFP水平、腫瘤直徑及臨床分期相關(guān)；E2F-1低表達是肝癌術(shù)后的總體生存率的獨立預(yù)后因素，可作為肝癌根治切除術(shù)后的獨立預(yù)后因子。

E2F-1 肝細胞癌 表達 預(yù)后

肝細胞癌惡性程度較高，盡管疾病的診治近年來已取得較大進展，但總體效果仍不理想，術(shù)后5年生存率僅為24%~50%［1］。細胞周期相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子E2F-1（transcription factor 1，E2F-1）是細胞周期相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子E2F的家族成員之一，其直接參與了遺傳物質(zhì)的合成和修復(fù)，對細胞的增殖與凋亡發(fā)揮著重要的調(diào)控作用［2］。研究發(fā)現(xiàn)E2F-1或許為癌基因或抑癌基因中的一種，與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展具有相關(guān)性［3］。本文采用免疫組織化學法檢測E2F-1在肝細胞癌中的表達，探討其在患者術(shù)后預(yù)測中的應(yīng)用價值。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集2006年1月至2011年12月于本院行根治性切除術(shù)的79例肝癌患者的病理標本為研究對象。其中男64例，女15例；年齡26~74歲，平均年齡（48.4±6.1）歲；甲胎蛋白（AFP）≤20μg/ L者21例，>20μg/L58例；谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）≤50U/L者17例，>50U/L者61例。腫瘤直徑≤5cm者29例，>5cm者50例；TNM分期Ⅰ期21例，Ⅱ期31例，Ⅲ期19例，Ⅳ期8例。取距離癌灶>5cm的癌旁組織30例作為對照。

1.2 檢測方法 采用免疫組織化學法檢測E2F-1的表達情況。一抗為E2F-1兔抗人單克隆抗體（Proteintech公司），二抗山羊抗兔/鼠IgG抗體- HRP（DATO 公司）。病理組織經(jīng)固定、石蠟包埋，連續(xù)切片厚度約5μm。采用免疫組化S-P 法染色。常規(guī)脫蠟、抗原修復(fù)、封閉后，滴加 E2F-1 兔抗人單克隆抗體（1∶200），4℃過夜，加入山羊抗兔/鼠IgG抗體- HRP（1∶50），置于37℃ 恒溫箱30min。DAB顯色，蘇木素復(fù)染后、脫水、封片。

1.3 判定標準 胞核部分出現(xiàn)淡黃色至棕黃色為陽性。光學顯微鏡下每張切片隨機選取5個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，根據(jù)陽性細胞染色強度和所占百分比進行評分。染色強度：無色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分；陽性細胞所占百分比：陰性計0分，0~10%計1分，11%~50%計2分，51%~75%計3分，>75%計4分。兩者乘積為最終陽性細胞積分：0~3分為陰（-），>3分為陽性（+）。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件。表達陽性率、相關(guān)性分析及生存率比較均采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 E2F-1在肝癌及癌旁組織中的表達對比 79例腫瘤組織中E2F-1陽性表達39例，陽性率為49.4%，30例癌旁組織中未見E2F-1表達；腫瘤組織與癌旁組織中的E2F-1陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2 E2F-1的表達與臨床病理參數(shù)間的相關(guān)性 E2F-1的表達與AFP水平、TNM分期及腫瘤直徑相關(guān)，隨著AFP水平的下降，TNM分期的降低及腫瘤直徑的減小，E2F-1的表達越高（P<0.05）；而與患者的年齡、HBsAg感染情況、GGT及腫瘤數(shù)量等無關(guān)（P>0.05）。見表1。

表1 E2F-1的表達與臨床病理參數(shù)間的相關(guān)性

2.3 E2F-1陽性組和陰性組復(fù)發(fā)情況比較 E2F-1陽性組總體1、3、5 年生存率分別為61.5%、59.0%、46.2%，陰性組總體1、3、5 年生存率分別為37.5%、32.5%、17.5%，組間比較E2F-1陽性組總體1、3、5年生存率均高于E2F-1陰性組（P<0.05）。見表2。

表2 E2F-1陽性組和陰性組復(fù)發(fā)情況比較［n（%）］

3 討論

E2F家族是一類轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在調(diào)節(jié)細胞周期方面具有重要作用。E2F-1為E2F家族的8個成員中目前研究較多的一類，其基因定位于人20號染色體的長臂，可誘導(dǎo)多種細胞周期轉(zhuǎn)換過程中DNA復(fù)制所需的關(guān)鍵性酶和蛋白質(zhì)的表達，在調(diào)控細胞由G1期向S期的過渡中發(fā)揮著關(guān)鍵作用［4］。

E2F-1雖與多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展相關(guān)，但研究發(fā)現(xiàn)在不同類型的惡性腫瘤中，E2F-1 所扮演的角色并不同，有可能發(fā)揮著癌基因和抑癌基因兩種相反的作用［5］。在非小細胞肺癌中，E2F-1過度表達可激活胸苷酸合成酶及Survivin 基因的表達，促進腫瘤增殖，增強腫瘤的耐藥性，使預(yù)后惡化［6］。Vuaroqueaux等［7］在早期乳腺癌中以檢測患者E2F-1的RNA表達水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)E2F-1低表達的乳腺癌患者預(yù)后更佳；而對胃癌患者的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，E2F-1高表達可顯著抑制癌細胞的增殖，阻止細胞進入S期［8］。本研究中，79例腫瘤組織中E2F-1陽性表達39例，陽性率為49.4%；30例癌旁組織中未見E2F-1表達。腫瘤組織與癌旁組織中的E2F-1陽性表達率具顯著性差異（P<0.05）。提示E2F-1陽性表達患者的生存期明顯高于陰性表達患者，E2F-1在肺癌中可能起到抑癌基因作用，其低表達是肝癌患者術(shù)后預(yù)后不良的獨立因素，此外APF 水平、腫瘤大小也可視為術(shù)后生存率的影響因素。但具體機制尚待于深入性研究。

本研究結(jié)果顯示，E2F-1的表達與AFP水平、TNM分期及腫瘤直徑相關(guān)，隨著AFP水平的下降，TNM分期的降低及腫瘤直徑的減小，E2F-1的表達越高（P<0.05）；E2F-1陽性組總體1、3、5年生存率分別為61.5%、59.0%、46.2%，陰性組總體1、3、5 年生存率分別為37.5%、32.5%、17.5%，組間比較E2F-1陽性組總體1、3、5 年生存率均高于E2F-1陰性組（P<0.05）。E2F-1作為重要的細胞周期調(diào)控因子參與了細胞由G0/G1期向S期的過渡。在G0/G1早期，E2F-1對于某些基因的轉(zhuǎn)錄具有正反饋調(diào)節(jié)作用，而這些基因的產(chǎn)物如周期素A、E和Cdc25等，都是細胞進入S期必需的酶類及蛋白質(zhì)。除此之外，E2F-1還參與調(diào)控細胞凋亡［9-10］。Sara等［11］研究發(fā)現(xiàn)E2F-1基因在人類肝癌模型能夠激活PIK3CA/Akt/ mTOR和c-Myb/COX-2信號通路，從而抑制c-Myc驅(qū)動的肝癌細胞凋亡，在肝癌中發(fā)揮著抗凋亡作用。有文獻報道通過免疫組化方法檢測肝硬化伴肝炎及肝癌肝硬化標本中的E2F-1表達，結(jié)果顯示E2F-1在肝癌中呈低表達，提示E2F-1具有抑癌基因作用［13-14］，與本研究結(jié)論相一致。E2F-1轉(zhuǎn)錄因子的活化和高表達導(dǎo)致細胞周期運行和腫瘤細胞增殖加快，最終導(dǎo)致細胞的惡性轉(zhuǎn)化和無節(jié)制增殖。Zhang等［15］發(fā)現(xiàn)，E2F-1的過度表達與乳腺癌的分級和預(yù)后差密切相關(guān)，表明E2F-1在一定程度上可以反映腫瘤的生物學特征。隨著乳腺癌分級和分期的升高，E2F-1的表達也隨之增加，提示E2F-1高表達的乳腺癌具有惡性度更高、更易發(fā)生浸潤等特征。

綜上所述，E2F-1在肝癌組織中呈高表達，其表達水平與AFP水平、腫瘤直徑及臨床分期相關(guān)；E2F-1低表達是肝癌術(shù)后的總體生存率的獨立預(yù)后因素，可作為肝癌根治切除術(shù)后的獨立預(yù)后因子。

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Objective To investigate the expression of E2F-1 in hepatocellular carcinoma and its effect on prognosis. Methods The pathological specimens from 79 cases of patients with liver cancer underwent radical resection in our hospital from January 2006 to December 2011 were collected. 30 cases of para-carcinoma tissues that were more than 5 cm away from neoplastic foci were compared. The expression of E2F-1 was detected by immunohistochemistry. The expression difference of tumor tissue and para-carcinoma tissue was compared to analyze the expression of E2F-1，the correlation between clinicopathological parameters and its effect on postoperative survival time. Results Among 79 cases of patients with tumor tissues，E2F-1 positive expression could be found among 39 cases with the positive rate of 49.4%；E2F-1 expression could not be found among 30 cases of patients with para-carcinoma tissue. The positive expression rates of E2F-1 in tumor tissues and adjacent tissues were signif i cantly different（P<0.05）. The expression of E2F-1 was related to AFP level，TNM staging and tumor diameter decrease. With the decrease of AFP level，TNM staging and tumor diameter，the expression of E2F-1 was higher（P<0.05）but it was not related to age，HBsAg infection，GGT and tumor number（P>0.05）. The total survival rates of E2F-1 positive group were 61.5%，59%，46.2% respectively in one，three and fi ve years. The total survival rates of E2F-1 negative group were 37.5%、32.5%、17.5% respectively in one，three and fi ve years. For the comparison among groups，the total survival rates of E2F-1 positive group were all higher than those of the E2F-1 negative group（P<0.05）in one，three and fi ve years. Conclusions E2F-1 shows high expression in hepatocellular carcinoma tissues，the expression level is related to AFP level，tumor diameter and clinical staging.The E2F-e low expression is an independent prognostic factor of overall survival rate after liver cancer operation so that it can be used as an independent prognostic factor after liver cancer resection.

E2F-1 Hepatocellular carcinoma Expression Prognosis

湖北省十堰市科學技術(shù)研究與開發(fā)項目（16Y46）

442000湖北省十堰市太和醫(yī)院（李珍）442000湖北醫(yī)藥學院附屬人民醫(yī)院（許濤 程雄飛）

*通信作者