□ 王 薇 哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院

堆肥中蔬菜土傳病害生防菌的篩選及評價

□ 王 薇 哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院

筆者以瓜果腐霉菌、立枯絲核菌為指示病菌，通過多種不同因素篩選堆肥，對指示病菌具有抑制生長作用的微生物研究，希望為蔬菜生產(chǎn)中病害防治及堆肥的多功能應(yīng)用提供參考性意見。

堆肥；蔬菜土傳??；生防菌

在種植農(nóng)作物時，肥料的好壞直接影響農(nóng)作物最后的收成情況。在我國農(nóng)村，使用較為廣泛的肥料大多是由農(nóng)民利用各種糞便或是污泥所制作堆肥，與傳統(tǒng)肥料相比，這種肥料不僅是一種有機(jī)肥料，更是一個攜帶著眾多有特殊功能、易發(fā)揮種群優(yōu)勢的微生物資源庫。

1 材料與方法

1.1 材料

農(nóng)作物：黃瓜（由市場購買所得），未經(jīng)過特殊處理。

材料：各種糞便、經(jīng)過保濕處理的菜園土壤。

培養(yǎng)基：細(xì)菌用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌用高氏一號培養(yǎng)基；真菌分離用馬丁氏培養(yǎng)基；病原菌和拮抗菌的對峙培養(yǎng)用。

抗菌譜指示病原菌：瓜果腐霉菌；稻瘟菌；小麥赤霉菌；立枯絲核菌；辣椒疫霉菌；西瓜枯萎菌；番茄早疫菌；油菜菌核病菌[1]。

1.2 方法

在拮抗菌的篩選方面及抗菌譜的測定采用平板對峙培養(yǎng)法；重寄生菌的篩選參照對峙培養(yǎng)法。盆栽實驗：首先將從堆肥中篩選得到的放線菌接入高氏一號液體培養(yǎng)基中，溫度為27 ℃,搖床(150 r/min)培養(yǎng)6 d后。黃瓜種子用0.3%次氯酸鈉溶液處理25 min后，再由無菌水沖洗5次，在土壤中，加0.15%的有機(jī)肥料，采用間歇濕熱滅菌法滅菌5次，間歇時間為24 h，每次滅菌50 min。實驗具體處理方式：所備好的無菌土壤嚴(yán)密封閉；所備好的無菌土壤只適用接種瓜果腐霉病菌；無菌土壤只適用接種立枯絲核病菌；無菌土壤同時接種瓜果腐霉病菌與拮抗菌；無菌土壤同時接種立枯絲核病菌與拮抗菌。拮抗菌接種量為20mL，A10培養(yǎng)液(1mL含2×107cfu)；病原菌接種量為（1土100）mg菌絲。實驗進(jìn)行處理5次，每盆播20粒黃瓜種子，12 d后記錄每盆中的健康種子所成長的苗數(shù)，并且計算對成苗率[2]。

2 結(jié)果

2.1 堆肥中生防菌的篩選

經(jīng)過12 d培養(yǎng)后，將所培植的對病菌具有抑制生長作用的菌株選出30株，其中，拮抗菌占絕大多數(shù)，重寄生真菌數(shù)量較少，分別為25株、5株。在25株拮抗菌株中，瓜果腐霉病菌對18株無效，具有拮抗作用；立枯絲核病菌對17株無效，具有拮抗作用。其中，放線菌（代號A1、A3、A5、A8、A9、A10、A13、A14及細(xì)菌T12、T15）對瓜果腐霉病菌和立枯絲核病菌同時具有效果，具有拮抗作用，其中放線菌A10的拮抗效果最為顯著，對瓜果腐霉病菌的拮抗帶寬度與拮抗菌菌落直徑為7.45 mm；對立枯絲核病菌的R2/R1為9.74。另一方面，在剩余的5株重寄生菌中，發(fā)現(xiàn)木霉A11的寄生能力最為顯著。根據(jù)培養(yǎng)大家發(fā)現(xiàn)，型號為A11木霉菌株能夠與分別與立枯絲核菌、瓜果腐霉菌培養(yǎng)48 h后在平板上菌絲交接在一起，并且木霉菌絲能夠覆蓋病原菌菌絲，然后在原有病原菌菌絲產(chǎn)生一種新的菌絲，生長迅速，完全不受病原菌的影響。

計算公式為：病情指數(shù)=∑（各級病株數(shù)×相對應(yīng)級別數(shù)）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級值）×100。

防治效果（%）=[對照病情指數(shù)(或病株率)-處理病情指數(shù)(或病株率)]/對照病情指數(shù)（或病株率）×100%。

2.2 拮抗菌A10抗菌譜的測定及對黃瓜猝倒病、立枯病的防效

部分放線菌對瓜果腐霉菌的拮抗效果見表1。

通過實驗結(jié)果可發(fā)現(xiàn)：放線菌A10拮抗能力強(qiáng)大，不僅對瓜果腐霉菌和立枯絲核菌對其無效同時，對椒疫霉菌、番茄早疫病菌等病菌都有較為顯著的抑制效果，抗菌層面巨大。在后續(xù)中，通過盆栽實驗結(jié)果顯示：對其15 d的培養(yǎng)后，無菌土壤在接種A10對疾病具有很強(qiáng)的防效性，在猝倒病和立枯病的防效分別達(dá)到65%和50%，效果良好。

表1 部分放線菌對瓜果腐霉菌的拮抗效果

3 討論

農(nóng)民利用各種糞便或是污泥所制作堆肥雖然成分復(fù)雜，但是對于蔬菜中的猝倒病、立枯病具有很強(qiáng)的防效性。在堆肥過程中，通過長時間發(fā)酵，它們之間互相融合，將所產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)微生物集中起來，可以說是繼土壤之后又一個微生物資源庫[3]。

4 結(jié)語

進(jìn)入21世紀(jì)后，堆肥不再局限于農(nóng)村，學(xué)者們對其強(qiáng)大的抑菌防病能力震驚不已，并且研究效果已初見成效，隨著人們節(jié)能環(huán)保意識的不斷提升，通過廢棄物資源而所制造的堆肥符合現(xiàn)代社會發(fā)展的方向。因此，目前人們對充堆肥在作物栽培的功效還有許多需要去探索的問題，促使堆肥作用變的更為合理、科學(xué)、有針對性。

[1]孫睿.土傳病害現(xiàn)狀及防治對策[J].吉林蔬菜,2012(6):43-44.

[2]張俊奇.設(shè)施蔬菜土傳病害綜合防控措施[J].長江蔬菜,2012(10):69-70.

[3]黃向東,薛冬,王書言.牡丹土傳病害及其防治研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2012,28(28):114-118.

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項目（編號：12541213）。