鄧娟

干擾素治療對(duì)慢性乙肝患者外周血趨化因子CCL20、CXCL9、CXCL11的影響

鄧娟

目的探討應(yīng)用干擾素治療慢性乙型肝炎時(shí)患者外周血趨化因子CCL20、CXCL9、CXCL11表達(dá)水平的變化。方法選取2015年3月—2016年3月在我院就診的慢性乙肝患者40例作為觀察組，使用干擾素進(jìn)行治療。同時(shí)選擇同期于我院進(jìn)行健康體檢的40例健康人作為對(duì)照組。在治療的第4周、第12周、第24周和第48周，采集患者外周血，采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測患者血液中趨化因子的表達(dá)水平，觀察兩組之間的差異，同時(shí)比較觀察組患者在治療前后，外周血趨化因子的表達(dá)水平。結(jié)果入院時(shí)觀察組慢性乙肝患者血清CCL20、CXCL9、CXCL11表達(dá)水平[（142.43±36.38）pg/ml、（2 364.08±89.01）pg/ml、（221.2±41.79）pg/ml]均高于健康對(duì)照組 [（43.57±6.83）pg/ml、（673.44±36.41）pg/ml、（57.89±5.43）pg/ml）]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；經(jīng)干擾素治療后，觀察組患者第12周、第24周、第48周的外周血趨化因子CCL20 （t值分別為3.47、3.83、4.29；P分別為0.009、0.006、0.002）、CXCL9（t值分別為 2.27、3.29、4.07；P分別為 0.027、0.013、0.003）、CXCL11（t值分別為 2.05、2.87、3.94；P分別為 0.031、0.014、0.004）水平均較治療前有明顯的改善，呈現(xiàn)下降趨勢，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論干擾素治療慢性乙肝可降低患者外周血液中CCL20、CXCL9、CXCL11的表達(dá)水平，降低慢性乙肝患者血清HBV病毒水平和炎癥反應(yīng)。

慢性乙肝；CLL20；CXCL9；CXCL11；干擾素

慢性乙肝是一種傳染性疾病，由乙型肝炎病毒（HBV）感染人體引起，病變以肝細(xì)胞壞死為主，繼而引起患者體內(nèi)多種器官損害[1]。世界衛(wèi)生組織曾就全球人口乙型肝炎病毒感染情況有過相關(guān)報(bào)道，約1/3人口曾感染過或仍受HBV的感染，其中部分感染者最終發(fā)展為慢性HBV感染，我國為慢性乙型肝炎患者的大國。HBV感染后，臨床分型的不同主要決定于病毒和宿主的免疫系統(tǒng)。趨化因子是病毒感染后的炎癥反應(yīng)中具有趨化作用的小分子蛋白，是由趨化白細(xì)胞參與介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)產(chǎn)生，可通過與相應(yīng)受體結(jié)合向肝炎病毒感染后的炎癥和感染部位遷移[2]。其中趨化因子CCL20、CXCL9、CXCL11均可通過與相應(yīng)受體結(jié)合參與病毒感染的炎癥反應(yīng)，從而清除進(jìn)入并感染人體的HBV。機(jī)體的免疫功能狀態(tài)也可影響慢性乙型肝炎治療的結(jié)局，趨化因子作為病毒感染的重要免疫學(xué)指標(biāo)，可用于判斷治療療效。近年來的相關(guān)研究[3]表明，CXCR3、CCR6以及配體CCL20、CXCL9、CXCL11等在介導(dǎo)肝炎病毒免疫耐受與損傷方面具有重要的作用，參與淋巴細(xì)胞的增殖與活化，促進(jìn)其游走并影響淋巴細(xì)胞的粘附與擴(kuò)散等重要的細(xì)胞生物活性。本研究通過觀察干擾素治療對(duì)慢性乙肝患者體內(nèi)外周血中趨化因子CCL20、CXCL9、CXCL11的表達(dá)的影響，找尋HBV感染后肝臟損傷新的理論依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2015年3月—2016年3月在我院就診的慢性乙肝患者40例作為觀察組，其包括28例男性患者與12例女性患者，年齡35～69歲，平均年齡為（52.4±3.9）歲。同時(shí)選擇同期于我院進(jìn)行健康體檢的40例健康人作為對(duì)照組，其中男25例，女15例，年齡36～73歲，平均年齡為（54.1±2.3）歲。所有入選病例臨床診斷均符合2015版《慢性乙型肝炎防治指南》[4]中的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，且在近半年內(nèi)，所有患者均未使用過抗病毒藥物治療和免疫調(diào)節(jié)藥物進(jìn)行治療。與所有患者簽署知情同意書，并經(jīng)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)后進(jìn)行。各組患者性別、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 治療方法和血清標(biāo)本的收集與處理

使用聚乙二醇干擾素α-2a 180 μg，皮下注射，每周 1次，必要時(shí)進(jìn)行保肝及對(duì)癥治療，治療1年。分別于治療前、治療第4周后、第12周后、第24周后和第48周后采集患者及同期體檢正常人員全血各5 ml，將每份血液的一部分送至檢驗(yàn)中心進(jìn)行相關(guān)項(xiàng)目的檢測，剩余血液用于分離提取血清，并采用酶聯(lián)免疫吸附法測定患者外周血清中趨化因子CCL20、CXCL9、CXCL11水平。所用設(shè)備和儀器主要有：美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司生產(chǎn)的ABI-7500型PCR儀、伊萊瑞特公司生產(chǎn)的趨化因子ELISA試劑盒、深圳雷杜公司的RT-6100型酶標(biāo)儀、日本日立公司生產(chǎn)的Cobas008型全自動(dòng)生化儀、德國羅氏公司生產(chǎn)的Cobase602型電化學(xué)發(fā)光儀，進(jìn)行外周血趨化因子的檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，計(jì)量資料以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）方式表示，治療前兩組外周血趨化因子表達(dá)水平比較及觀察組治療后與治療前外周血趨化因子表達(dá)水平比較均采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血趨化因子CCL20、CXCL9、CXCL11表達(dá)水平比較

治療前觀察組慢性乙肝患者血清CCL20、CXCL9、CXCL11表 達(dá) 水 平 [（142.43±36.38）pg/ml、（2 364.08±89.01）pg/ml、（221.2±41.79）pg/ml]均高于健康對(duì)照組[（43.57±6.83）pg/ml、（673.44±36.41）pg/ml、（57.89±5.43）pg/ml）]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

表1 觀察組與對(duì)照組外周血趨化因子表達(dá)水平比較（±s）

表1 觀察組與對(duì)照組外周血趨化因子表達(dá)水平比較（±s）

組別 CCL20（pg/ml） CXCL9（pg/ml） CXCL11（pg/ml）觀察組 142.43±36.38 2 364.08±89.01 221.2±41.79對(duì)照組 43.57±6.83 673.44±36.41 57.89±5.43t值 3.801 2.710 2.931P值 0.019 0.027 0.036

2.2 干擾素治療不同時(shí)間對(duì)慢性乙肝患者外周血趨化因子檢測結(jié)果

觀察組40例慢性乙肝患者在經(jīng)干擾素治療后外周血趨化因子測定結(jié)果表明，第12周、第24周、第48周的患者外周血中CCL20（t值分別為 3.47、3.83、4.29；P分別為 0.009、0.006、0.002）、CXCL9（t值分別為2.27、3.29、4.07；P分別為0.027、0.013、0.003）、CXCL11（t值分別為2.05、2.87、3.94；P分別為0.031、0.014、0.004）水平均較治療前有明顯的改善，呈現(xiàn)下降趨勢，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但在干擾素治療的第4周，上述趨化因子的水平相較于治療前并無降低。結(jié)果見表2。

表2 干擾素治療后患者外周血中趨化因子的表達(dá)水平（±s）

表2 干擾素治療后患者外周血中趨化因子的表達(dá)水平（±s）

注：a、b、c與治療前相比P＜0.05

治療時(shí)間 CCL20（pg/m） CXCL9（pg/ml） CXCL11（pg/ml）治療前 142.43±36.38 2 364.08±89.01 221.2±41.79治療第4周 146.12±43.55 2 586.31±89.41 226.31±34.89治療第12周 114.89±33.42a 2 097.02±70.87a 182.57±30.75a治療第24周 90.01±33.49b 1 387.76±56.39b 152.3±29.47b治療第48周 73.87±25.03c 983.21±45.33c 117.33±21.87c

3 討論

慢性乙型肝炎是由HBV感染引起的以炎癥性肝細(xì)胞壞死為典型病例特征的一類感染性疾病，可由于肝細(xì)胞的過多損傷導(dǎo)致肝臟功能紊亂[5]，最終致使患者體內(nèi)多種臟器的損傷、衰竭，甚至?xí)?dǎo)致患者死亡，也可由于肝炎病毒導(dǎo)致的肝癌造成患者死亡。每年因慢性乙型肝炎引起的肝功能衰竭、肝癌造成的死亡人數(shù)超過100萬人。我國作為乙型肝炎病毒感染人數(shù)眾多的國家，因?yàn)橛?jì)劃免疫的施行，新發(fā)感染情況有所抑制，但由于人口基數(shù)龐大和既往大量感染者，每年仍會(huì)有眾多的乙型肝炎病毒感染病例，感染引起的肝硬化、包括肝臟衰竭在內(nèi)的多臟器衰竭和肝癌是我國公民死亡的重要原因。現(xiàn)有研究[6]已有一定的證據(jù)表明機(jī)體對(duì)HBV病毒感染的免疫耐受和體內(nèi)為清除病毒而發(fā)生的免疫應(yīng)答機(jī)制低下，是導(dǎo)致肝炎病毒感染發(fā)展為慢性病變的重要原因，如趨化因子及其受體可通過結(jié)合的方式向肝炎病毒感染后的炎癥和感染部位遷移，并使其在慢性乙型肝炎病毒感染的組織、器官中增殖和活化。

2015年發(fā)布的慢性乙型肝炎防治指南中指出，因干擾素可提高機(jī)體對(duì)HBV的免疫應(yīng)答和HBsAg的血清轉(zhuǎn)化，抑制HBV-DNA的擴(kuò)增，是抗病毒治療的2種主要藥物之一，應(yīng)用干擾素來治療CHB理論可行。但干擾素治療具有一定的局限性，治療過程中可能產(chǎn)生較多的副作用，如流感樣癥狀的發(fā)生、骨髓生長抑制等，治療費(fèi)用也高于常規(guī)的CHB治療，如何選用適當(dāng)?shù)母蓴_素治療CHB，達(dá)到較高的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益，是值得進(jìn)一步進(jìn)行研究探討的。因此我們通過研究采用干擾素治療后患者外周血趨化因子的變化，來探索干擾素治療與外周血趨化因子之間的關(guān)系。

本研究中治療前觀察組慢性乙肝患者血清CCL20、CXCL9、CXCL11表達(dá)水平均高于健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示肝炎病感染人體后，通過促進(jìn)患者體內(nèi)的免疫應(yīng)答反應(yīng)促進(jìn)感染患者體內(nèi)的炎癥反應(yīng)；同時(shí)發(fā)現(xiàn)，在采用干擾素治療第12周、第24周、第48周后患者外周血趨化因子CCL20、CXCL9、CXCL11水平均較治療前有明顯的改善，呈現(xiàn)下降趨勢，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但在干擾素治療的第4周，上述趨化因子指標(biāo)相較于治療前并無降低，側(cè)面提示，上述指標(biāo)不適用于干擾素治療早期療效的評(píng)價(jià)，具體發(fā)生機(jī)制尚需要進(jìn)一步的研究，這些結(jié)果與國內(nèi)外相關(guān)研究[7-8]中CCL20、CXCL9、CXCL11的外周血表達(dá)水平等研究結(jié)果相一致，提示HBV感染通過上調(diào)外周血清中趨化因子的表達(dá)水平促進(jìn)淋巴細(xì)胞活化，活化后的T細(xì)胞經(jīng)特異受體識(shí)別遷移至肝臟，實(shí)現(xiàn)減輕肝臟組織因?qū)笻BV而引起的炎癥反應(yīng)，同時(shí)清除進(jìn)入人體的HBV病毒。

總之，研究發(fā)現(xiàn)在治療前患者外周血中趨化因子CCL20、CXCL9、CXCL11的較高水平，可能反映了患者體內(nèi)的免疫應(yīng)答反應(yīng)，采用干擾素后可降低患者體內(nèi)的炎癥反應(yīng)，該結(jié)果對(duì)于進(jìn)一步研究趨化因子及其受體的調(diào)控機(jī)制及CHB的診療提供新的思路。

[1]尚鵬程，許嬌，裴曉方.慢乙肝和慢重肝患者趨化因子的表達(dá)差異及干擾素治療后的變化[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2017，44（5）：882-885.

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[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志：電子版，2015，19（3）：1-18.

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Effects of Interferon on the Expression of CCL20, CXCL9 and CXCL11 in Peripheral Blood of Patients With Chronic Hepatitis B

DENG Juan The Ninth Department of Gastroenterology, The First Affiliated Hospital of The Fourth Military Medical University, Xijing Hospital, Xi'an Shanxi 710032, China

ObjectiveTo investigate the effect of interferon therapy on the expression of chemokines CCL20, CXCL9 and CXCL11 in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B.Methods40 patients with chronic hepatitis B who were treated with interferon in our hospital from March 2015 to March 2016 were selected as the observation group, and 40 healthy people who did physical examination in the same period in our hospital were selected as the control group.At 4th week, 12th week,24th week and 48th of the treatment, the peripheral blood of patients was collected and measured by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)to detect the expression level of chemokines in the blood.ResultsWhen hospitalized, the levels of serum CCL20, CXCL9 and CXCL11 in the patients with chronic hepatitis B were (142.43 ± 36.38) pg / ml, (2 364.08± 89.01) pg / ml, (221.2 ± 41.79) pg / ml, which were significantly higher than those in the control group[(43.57±6.83)pg/ml,(673.44±36.41)pg/ml,(57.89±5.43)pg/ml)],the differences were statistically significant (P＜0.05).After the treatment with interferon, the expression of serum CCL20 (tvalues were 3.47,3.83,4.29;Pwere 0.009, 0.006, 0.002), CXCL9 (tvalues were 2.27,3.29,4.07;Pwere 0.027,0.013,0.003) and CXCL11 (tvalues were 2.05,2.87,3.94;Pwere 0.031,0.014,0.004) were significantly improved compared with those before treatment, and the differences were statistically significant (P＜0.05).ConclusionInterferon treatment of chronic hepatitis B can reduce the expression of CCL20, CXCL9 and CXCL11 in peripheral blood of patients, and decrease the levels of serum HBV and serum in patients with chronic hepatitis B.

chronic hepatitis B; CCL20; CXCL9; CXCL11; interferon

中圖分類號(hào)】R512

A

1674-9308（2017）14-0175-03

10.3969/j.issn.1674-9308.2017.14.094

第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院西京醫(yī)院消化九科，陜西 西安710032