李慧萍，徐海鵬，金 寧，金小煜，?？e，馬暉玲

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 草業(yè)學(xué)院/草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省草業(yè)工程實(shí)驗(yàn)室/中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州 730070； 2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，甘肅 蘭州 730070)

草甘膦對(duì)草地早熟禾愈傷組織生長及生理指標(biāo)的影響

李慧萍1，徐海鵬1，金 寧2，金小煜1，牛奎舉1，馬暉玲1

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 草業(yè)學(xué)院/草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省草業(yè)工程實(shí)驗(yàn)室/中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州 730070； 2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，甘肅 蘭州 730070)

以草地早熟禾午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織為試驗(yàn)材料，采用間接接種的方法在草甘膦濃度為0、0.02、0.04、0.06、0.08和0.10 mmol/L的MS培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。20 d后對(duì)愈傷組織進(jìn)行存活率、相對(duì)生長率、褐化情況、電導(dǎo)率、丙二醛、可溶性蛋白、游離脯氨酸含量和抗氧化酶(SOD，POD和CAT)活性的測定。結(jié)果表明：愈傷組織的存活率隨草甘膦濃度的增大而逐漸下降，相對(duì)生長率呈先上升后下降的趨勢。電導(dǎo)率、游離脯氨酸含量及SOD，POD和CAT活性呈先上升后下降的趨勢，臨界點(diǎn)處的草甘膦濃度為0.04 mmol/L。丙二醛和可溶性蛋白的臨界點(diǎn)草甘膦濃度是0.06 mmol/L。說明草地早熟禾午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織可耐受較小濃度的草甘膦(<0.04 mmol/L)。

草甘膦；草地早熟禾；愈傷組織；生理指標(biāo)

近年來，伴隨我國經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展，草地綠化越來越受到政府和市民的關(guān)注。我國西北地區(qū)氣候冷涼，雜草眾多，草坪草在長勢、草齡、抗寒、抗除草劑等方面存在較多問題，不容樂觀[1]，所以我國西北地區(qū)的草坪壽命普遍較短。

草甘磷是由美國孟山都公司研制開發(fā)的一種廣譜性和非選擇性除草劑，其除草活性很強(qiáng)[2]，在田間使用時(shí)具有廣譜、高效，對(duì)人畜安全和無環(huán)境污染等優(yōu)點(diǎn)[3-5]，不會(huì)影響土壤的菌落結(jié)構(gòu)，能有效去除多年生雜草，對(duì)優(yōu)質(zhì)草種種苗的生長具有廣泛的使用價(jià)值。在草坪管理中使用草甘膦，具有清除雜草，增加經(jīng)濟(jì)效益，美化環(huán)境的作用。

用離體方法來篩選抗除草劑突變體的研究愈來愈受到育種工作者的重視，體細(xì)胞無性系變異及其篩選已應(yīng)用到多種農(nóng)作物[6-7]。現(xiàn)已得到了番茄、胡蘿卜、小麥[8]、油菜[9]、棉花等多種作物的抗除草劑細(xì)胞系，部分已誘導(dǎo)培養(yǎng)成再生植株[6-7,10]。在草坪草上，Heckart等[11]通過對(duì)海濱雀稗愈傷組織進(jìn)行定向篩選，獲得了具有稀禾定(Sethoxydim)抗性的再生植株。以草地早熟禾午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織為試驗(yàn)材料，通過測定其愈傷組織在不同濃度草甘膦下的生長及生理生化指標(biāo)，分析不同濃度草甘膦處理下午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織生理響應(yīng)效果，以期為抗草甘膦突變體的篩選奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 愈傷組織的誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)

以草地早熟禾(Poapratensis)午夜Ⅱ號(hào)的種子為試驗(yàn)材料，按文獻(xiàn)[12]的方法高壓滅菌后接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分為：MS+2,4-D(1 mg/L)+6-BA(0.3 mg/L)+3%蔗糖+0.7%瓊脂，50 d后將誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基，繼代培養(yǎng)基同誘導(dǎo)培養(yǎng)基，此后每隔25～30 d繼代1次，每次繼代時(shí)去掉水漬化和褐化的愈傷組織。

1.2 草甘膦處理

經(jīng)5～6次繼代培養(yǎng)后，挑選生長均勻、快速且疏松的愈傷組織接種于含不同濃度草甘膦(0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mmol/L)的MS培養(yǎng)基上，并在121℃,101.1 kPa壓力下高溫高壓滅菌26 min[13]。以草甘膦濃度0 mmol/L為空白對(duì)照，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。每皿接種25塊愈傷組織，并且稱取愈傷鮮重，處理20 d，取樣進(jìn)行相關(guān)生理指標(biāo)及生長情況的測定。

草地早熟禾午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織相對(duì)生長率=(草甘膦處理20 d后愈傷組織重量-未處理前愈傷組織重量)/未處理前愈傷組織重量×100%。

1.3 生理指標(biāo)的測定

采用電導(dǎo)儀法測定電導(dǎo)率；采用硫代巴比妥酸比色法測丙二醛含量[14]。采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法測可溶性蛋白含量[15]；采用茚三酮比色法測定游離脯氨酸含量；采用氮藍(lán)四唑(NBT)光化學(xué)還原反應(yīng)法測SOD活性；采用氧化愈創(chuàng)木酚比色測POD活性；采用紫外分光光度法測CAT活性[16]。為使所測不同生理指標(biāo)的材料所處狀態(tài)一致，將每次用過后剩余的愈傷組織及時(shí)放入液氮中冷凍保存。

1.4 數(shù)據(jù)處理

對(duì)所有數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)結(jié)果采用標(biāo)準(zhǔn)誤和平均值表示，使用Excel 2010軟件進(jìn)行處理及制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度梯度下的草甘膦對(duì)午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織生長的影響

不同濃度草甘膦處理后愈傷組織的生長情況各不相同。與對(duì)照相比，高濃度的草甘膦處理對(duì)愈傷組織生長的抑制效果比較強(qiáng)。在草甘膦濃度為0.02 mmol/L，愈傷組織的生長效果最好，但隨草甘膦濃度的繼續(xù)增大，愈傷組織的生長受到抑制作用，且程度隨草甘膦濃度的增大而增強(qiáng)。當(dāng)草甘膦濃度>0.06 mmol/L，相對(duì)生長率變小(表1)。

愈傷組織在不含草甘磷的培養(yǎng)基上長勢最好，愈傷組織明顯增殖，并且產(chǎn)生了大量新鮮的愈傷組織。而在加有草甘膦的培養(yǎng)基上隨著草甘膦濃度的逐漸增加，長勢越來越差，存活率也愈來愈低。當(dāng)草甘膦濃度達(dá)到0.08 mmol/L時(shí),愈傷組織存活率僅為草甘膦濃度為0.06 mmol/L的一半，但卻為對(duì)照組的0.14倍。試驗(yàn)結(jié)果表明，在對(duì)照及低草甘膦濃度處理下愈傷組織有新愈傷長出，但隨著草甘膦濃度的增大，愈傷組織長出新愈傷的能力越來越低(表2)。

表1 不同濃度草甘膦處理下愈傷組織的相對(duì)生長率Table 1 Effect of different concentrations of glyphosate on relative growth rate of callus

表2 不同濃度草甘膦處理下愈傷組織生長Table 2 Effect of different concentrations of glyphosate on callus growth

草地早熟禾午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織接種到不同濃度的草甘膦培養(yǎng)基上，統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)1、2周其愈傷組織的褐化狀況。隨著草甘膦濃度的增加和培養(yǎng)時(shí)間的增加，愈傷組織的褐化情況也越來越嚴(yán)重。當(dāng)草甘膦濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mmol/L時(shí)，培養(yǎng)1周愈傷組織的褐化情況分別為對(duì)照組的2.5倍、4.5倍、5.5倍、7倍、8倍，培養(yǎng)2周愈傷組織的褐化情況分別為對(duì)照組的3.7倍、6.3倍、7.3倍、8倍、8倍(表3)。

表3 不同濃度草甘膦愈傷組織的褐化Table 3 Effect of different concentrations of glyphosate on callus browning rate

2.2 不同濃度梯度下的草甘膦對(duì)午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織細(xì)胞膜相對(duì)透性的影響

電解質(zhì)外滲反映了逆境脅迫下細(xì)胞膜透性增強(qiáng)的程度。并反映了愈傷組織在不同濃度的草甘膦處理下所對(duì)應(yīng)電導(dǎo)率的大小。隨著草甘膦濃度的逐漸增加，愈傷組織的電導(dǎo)率值呈先上升后下降的趨勢，最后低于對(duì)照。當(dāng)草甘膦濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mmol/L時(shí)，愈傷組織的電導(dǎo)率值分別為對(duì)照組的1.11倍、1.23倍、1.07倍、0.97倍、0.93倍。且與對(duì)照相比均具有顯著性差異(P<0.05)。當(dāng)草甘膦濃度>0.08 mmol/L時(shí)，電導(dǎo)率值基本趨于穩(wěn)定(圖1)。

圖1 不同濃度草甘膦處理下愈傷組織細(xì)胞膜 相對(duì)透性Fig.1 Effect of different concentrations of glyphosate on the conductivity of callus

2.3 不同濃度梯度下的草甘膦對(duì)午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織丙二醛含量的影響

丙二醛含量的變化隨草甘膦濃度的增加呈先上升后下降的趨勢。當(dāng)草甘膦濃度為0.06 mmol/L時(shí)，其丙二醛含量達(dá)到了峰值，為1.16 μmol/g FW。與對(duì)照相比，丙二醛含量在草甘膦濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mmol/L時(shí)分別為對(duì)照的1.02倍、1.04倍、1.03倍、1.00倍、0.99倍。當(dāng)草甘膦濃度高于0.08 mmol/L時(shí)，丙二醛含量低于對(duì)照組(圖2)。

2.4 不同濃度梯度下的草甘膦對(duì)午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織游離脯氨酸的影響

隨著草甘膦濃度的逐漸增加，所測愈傷組織中游離脯氨酸的含量呈先上升后下降的趨勢，但都高于對(duì)照組。當(dāng)草甘膦濃度<0.04 mmol/L時(shí)，其游離脯氨酸的含量上升趨勢較快(圖3)。當(dāng)草甘膦濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mmol/L時(shí)，愈傷組織游離脯氨酸含量分別為對(duì)照組的1.26倍、3.79倍、3.43倍、2.74倍、1.95倍。

圖2 不同濃度草甘膦處理下愈傷組織丙二醛的含量Fig.2 Effect of different concentrations of glyphosate on malondialdehyde content of callus

圖3 不同濃度草甘膦處理下愈傷組織 游離脯氨酸的含量Fig.3 Effect of different concentrations of glyphosate on free proline content of callus

2.5 不同濃度梯度下的草甘膦對(duì)午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織可溶性蛋白的影響

隨草甘膦濃度的逐漸增加，不同濃度的草甘磷對(duì)愈傷組織合成可溶性蛋白的影響不同。不同濃度草甘膦處理下愈傷組織可溶性蛋白含量呈先上升后下降的趨勢，且分別為對(duì)照組的1.06倍、 1.19倍、1.20倍、1.14倍、1.11倍(圖4)，與對(duì)照相比可溶性蛋白含量的變化基本趨于穩(wěn)定。

2.6 不同濃度梯度下的草甘膦對(duì)午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織抗氧化酶活性的影響

隨著草甘膦濃度的逐漸增加，不同濃度處理下愈傷組織SOD的活性各不相同。當(dāng)草甘膦濃度<0.04 mmol/L時(shí)，其愈傷組織SOD的活性隨草甘膦濃度的增加上升趨勢較明顯(圖5)。當(dāng)草甘膦濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mmol/L時(shí)，愈傷組織的SOD活性分別為對(duì)照組的1.01倍、1.04倍、1.01倍、1.01倍、0.99倍。當(dāng)草甘膦濃度為0.10 mmol/L時(shí)，愈傷組織SOD的活性變化與對(duì)照差異不顯著(P>0.05)。

圖4 不同濃度草甘膦處理下愈傷組織的 可溶性蛋白含量Fig.4 Effect of different concentrations of glyphosate on soluble protein content of callus

圖5 不同濃度草甘膦處理下愈傷組織的SOD活性Fig.5 Effect of different concentrations of glyphosate on SOD activity of callus

與對(duì)照相比，不同濃度的草甘膦處理后愈傷組織的POD活性均高于對(duì)照組(圖6)。愈傷組織的POD活性在草甘膦濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mmol/L時(shí)，分別為對(duì)照的1.36倍、1.72倍、1.45倍、1.14倍、1.12倍。當(dāng)草甘膦濃度0.04 mmol/L時(shí)，其POD活性最高。

隨著草甘膦濃度逐漸增加，不同濃度處理下愈傷組織CAT活性高低各不相同。草甘膦濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mmol/L時(shí)，愈傷組織CAT活性分別為對(duì)照組的1.05倍、1.13倍、1.04倍、0.47倍、0.44倍。當(dāng)草甘膦濃度>0.08 mmol/L時(shí)，愈傷組織CAT活性都低于對(duì)照組，與對(duì)照相比其CAT活性維持在一定的水平，其活性變化基本趨于穩(wěn)定(圖7)。

圖6 不同濃度草甘膦處理下愈傷組織的POD活性Fig.6 Effect of different concentrations of glyphosate on POD activity of callus

圖7 不同濃度草甘膦處理下愈傷組織 的CAT活性Fig.7 Effect of different concentrations of glyphosate on CAT activity of callus

3 討論

3.1 不同濃度梯度下草甘膦對(duì)愈傷組織的生長的影響

通過對(duì)愈傷組織相對(duì)生長率的測定，發(fā)現(xiàn)不同濃度草甘膦對(duì)愈傷組織細(xì)胞的分裂生長有不同程度的抑制作用[10]。試驗(yàn)研究表明，低濃度草甘膦(<0.04 mmol/L)對(duì)愈傷組織的生長有促進(jìn)作用，0.04 mmol/L草甘膦處理對(duì)愈傷組織的增重效果最顯著。高濃度(>0.06 mmol/L)對(duì)愈傷組織的生長有明顯的抑制作用，并且隨著篩選濃度和繼代時(shí)間的逐漸增加，愈傷組織的生長減緩，水漬化現(xiàn)象和褐化現(xiàn)象也愈來愈嚴(yán)重，在高濃度0.10 mmol/L下繼代2周后，愈傷組織甚至部分變成黑色。說明了午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織對(duì)低濃度的草甘膦(0.04 mmol/L)有一定的抵抗能力和耐受能力，在高濃度的草甘膦脅迫下，其生理活性喪失。

3.2 不同濃度梯度下的草甘膦對(duì)愈傷組織膜系統(tǒng)的損壞程度的影響

受細(xì)胞膜保護(hù)，隔離在細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)在細(xì)胞膜受到傷害時(shí)會(huì)外泄，電解質(zhì)激增會(huì)破壞細(xì)胞膜保護(hù)，植物受到逆境脅迫時(shí)細(xì)胞內(nèi)代謝平衡被破壞，有利于自由基產(chǎn)生，過量自由基會(huì)引發(fā)或加劇膜質(zhì)過氧化作用，植物膜質(zhì)過氧化的產(chǎn)物造成生物膜系統(tǒng)的損傷，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致植物細(xì)胞的死亡[17-18]。丙二醛是膜脂過氧化的最終產(chǎn)物，能夠抑制細(xì)胞保護(hù)酶的活性并降低抗氧化物的含量[19]。因此，常把電導(dǎo)率及丙二醛作為反映膜脂過氧化程度的指標(biāo)。研究表明，隨著草甘膦濃度的增大，愈傷組織電導(dǎo)率及丙二醛含量呈先上升后下降的趨勢，說明愈傷組織可適應(yīng)低濃度的草甘膦脅迫，在高濃度處理下，隨著脅迫濃度的增加，愈傷組織的生理活性逐漸衰退甚至喪失，因而愈傷組織膜系統(tǒng)的受損程度沒有繼續(xù)增加。

3.3 不同濃度梯度的草甘膦對(duì)愈傷組織滲透調(diào)解物質(zhì)的影響

脯氨酸、可溶性蛋白是植物體內(nèi)的主要滲透調(diào)解物，能增加膜脂濃度，降低細(xì)胞冰點(diǎn)，防止細(xì)胞過度脫水，維持蛋白質(zhì)水合度，從而減輕滲透脅迫對(duì)細(xì)胞的傷害[19]。蛋白質(zhì)是植物體內(nèi)重要的有機(jī)物質(zhì)，通過蛋白質(zhì)含量的測定，可反映出植物體生長代謝的強(qiáng)弱，也可通過蛋白質(zhì)含量的多少反映植物光合作用能力的大小[20]。不同濃度的草甘膦對(duì)愈傷組織的滲透調(diào)解能力也有影響，其趨勢是先上升后下降。上升是因?yàn)橛鷤M織能耐受較低濃度的草甘膦脅迫，所以其生長代謝能力也逐漸增強(qiáng)，愈傷組織通過增強(qiáng)滲透能力來保持水勢力。高濃度草甘膦處理下其滲透調(diào)解能力及生長代謝能力減弱，說明高濃度的草甘膦會(huì)使愈傷組織的生理活性降低甚至喪失。

3.4 不同濃度梯度的草甘膦對(duì)愈傷組織抗氧化酶活性的影響

SOD是膜脂過氧化防御系統(tǒng)的主要保護(hù)酶，其活性強(qiáng)弱與植物的抗氧化能力密切相關(guān)，該酶能夠清除超氧陰離子自由基，同時(shí)也是植物抗氧化系統(tǒng)的第一道防線[21]。測定植物內(nèi)SOD活性可以判斷植物器官組織細(xì)胞的損傷程度，預(yù)防生物體免受超氧陰離子自由基損傷。過氧化氫酶也是植物體內(nèi)一種重要的活性氧，通過其活性的變化情況也可以推測活性氧產(chǎn)生的情況。作為植物對(duì)不良環(huán)境脅迫相應(yīng)的敏感指標(biāo)之一，POD對(duì)多種生理功能起到保護(hù)作用，它可以清除植物體內(nèi)大量活性氧并阻止植物體內(nèi)自由基對(duì)生物大分子的質(zhì)膜的破壞，能減輕細(xì)胞由于質(zhì)膜過氧化作用而引起的傷害[17]。其值高低決定了植物對(duì)干旱，鹽堿，重金屬，低溫，紫外線等逆境脅迫的抵抗能力。不同草甘膦濃度處理下，SOD，POD和CAT活性總體呈先上升后下降的趨勢。酶活性上升可能是愈傷組織在低濃度草甘膦處理下增加酶活性以此來適應(yīng)不良環(huán)境。當(dāng)草甘膦濃度超過0.06 mmol/L時(shí)，其酶活性呈下降趨勢，可能是酶合成速率低于其分解速率，也可能是高濃度脅迫使愈傷組織喪失了其生理活性。

4 結(jié)論

通過對(duì)草甘膦脅迫下草地早熟禾午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織的生長、抗氧化和滲透性調(diào)節(jié)能力的分析，發(fā)現(xiàn)0.04 mmol/L草甘膦脅迫可顯著提高草地早熟禾午夜Ⅱ號(hào)愈傷的電導(dǎo)率、丙二醛、可溶性蛋白、游離脯氨酸含量和抗氧化酶SOD,POD和CAT的活性，而當(dāng)草甘膦濃度>0.06 mmol/L時(shí)，其電導(dǎo)率、丙二醛、可溶性蛋白、游離脯氨酸含量以及SOD，POD和CAT活性均呈現(xiàn)降低趨勢。說明午夜Ⅱ號(hào)愈傷組織可以耐受0.04 mmol/L草甘膦脅迫。因此，在篩選抗草甘膦除草劑突變體時(shí)，其草甘膦濃度應(yīng)不低于0.04 mmol/L。此條件可為離體篩選草地早熟禾抗草甘膦突變體和草地早熟禾抗草甘膦新品種提供科學(xué)理論依據(jù)。

[1] 孫賓成.東北高寒地區(qū)抗草甘膦大豆栽培技術(shù)研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2012.

[2] 迪林飛達(dá).草甘膦可溶性固體劑型應(yīng)用技術(shù)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2005.

[3] 張恩讓,程智慧.大蒜抗草甘磷愈傷組織變異系的選擇研究[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2003,31(3):69-72.

[4] Hart M M,Powell J R,Gμlden R H,etal.Separating the effect of crop from herbicide on soil microbial commol/Lμnities in glyphosate-resistant corn[J].Pedobiologia,2009,52(4):253-262.

[5] 劉媛.草甘膦廢水的除磷研究[D].杭州：浙江大學(xué),2014.

[6] 刁現(xiàn)民,孫敬三.植物體細(xì)胞無性系變異的細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J].植物學(xué)通報(bào),1999,16(4):372-377.

[7] 張磊.幾種草坪草轉(zhuǎn)基因及體細(xì)胞無性變異的研究[D].合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[8] 魏松紅,紀(jì)明山,王英姿，等.應(yīng)用誘變法篩選抗草甘膦小麥植株初步研究[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2006,5(3):42-43,46.

[9] 柳寒.油菜抗草甘膦除草劑資源的鑒定及篩選[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2011.

[10] 李衛(wèi)國.棉花抗草甘膦體細(xì)胞無性系變異篩選技術(shù)研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[11] Heckart D L,Parrott W A,Raymer P L.Obtaining sethoxydim resistance in seashore paspalmmol/L[J].Crop science,2010,50(6):2632-2640.

[12] 俞玲,馬暉玲.甘肅隴西野生草地早熟禾植株的再生體系[J].草業(yè)科學(xué),2014(6)：1063-1069.

[13] 李衛(wèi)國.棉花抗草甘膦體細(xì)胞無性系變異篩選技術(shù)研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[14] 徐煒,陳志宏,師尚禮，等.45℃貯藏對(duì)超干處理披堿草種子生理生化特性的影響[J].草原與草坪,2011,31(1):42-46.

[15] 張鎖科,馬暉玲.3個(gè)草地早熟禾品種分蘗期的生理特性變化[J].草原與草坪,2014(6):74-77.

[16] 田曉艷,劉延吉,張蕾，等.鹽脅迫對(duì)景天三七保護(hù)酶系統(tǒng)、MDA、Pro及可溶性糖的影響[J].草原與草坪,2009(6):11-14.

[17] 王連敏,王立志.苗期低溫對(duì)玉米體內(nèi)脯氨酸,電導(dǎo)率及光合作用的影響[J].中國農(nóng)業(yè)氣象,1999,20(2):28-30.

[18] 陳少裕.膜脂過氧化對(duì)植物細(xì)胞的傷害[J].植物生理學(xué)通訊,1991,27(2):84-90.

[19] 楊春祥,李憲利,高東升,等.低溫脅迫對(duì)油桃花器官膜脂過氧化和保護(hù)酶活性的影響[J].果樹學(xué)報(bào),2005,22(1):69-71.

[20] 安志裝,王校常,施衛(wèi)明,等.重金屬與營養(yǎng)元素交互作用的植物生理效應(yīng)[J].土壤與環(huán)境,2002,11(4):392-396.

[21] 陳錫蓮.二萜化合物L(fēng)eμkameninE 對(duì)擬南芥愈傷組織PLD 的調(diào)控作用研究[D].蘭州：西北師范大學(xué),2013.

Effect of glyphosate on growth and physiological index of kentucky bluegrass callus

LI Hui-ping1,XU Hai-peng1,JIN Ning2,JIN Xiao-yuv1,NIU Kui-ju1,MA Hui-ling1

(1.CollegeofPrataculturalScience,GansuAgriculturalUniversity/KeyLaboratoryofGrasslandEcosystem，MinistryofEducation/PrataculturalEngineeringLaboratoryofGansuProvince/Sino-U.S.CentersforGrazinglandEcosystemSustainability,Lanzhou730070,China;2.HorticulturalCollege,GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,China)

The callus of kentucky bluegrasses (midnight Ⅱ) was cultured on MS medium which contained different concentrations of glyphosate (0,0.02,0.04,0.06,0.08 and 0.10 mmol/L).After 20 days,the callus was exploited for measuring physiological indexes (survival rate,relative growth rate,brown case,electrical conductivity,contents of MDA,soluble protein,free proline,SOD,POD and CAT).The result showed that the survival rate of the callus gradually decreased with the increase of glyphosate,but the relative growth rate increased first and then decreased.0.04 mmol/L of glyphosate concentration was the turning point.While MDA and soluble protein of critical concentrations of glyphosate was 0.06 mmol/L.The tolerable concentration of glyphosate was 0.04 mmol/L.

glyphosate;kentucky bluegrass;callus;physiological index

2016-04-18；

2016-11-02

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生科研訓(xùn)練計(jì)劃(SRTP)項(xiàng)目(20150225)，甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)國家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201510733001)，國家自然科學(xué)基金“草地早熟禾種間體細(xì)胞雜交的研究(31160482)”資助

李慧萍(1994-)，女，甘肅武威人。 E-mail：1529711658@qq.com 馬暉玲為通訊作者。

S 688.4

A

1009-5500(2017)03-0042-06