郁宏偉,張德寶,朱秀同,劉濤,石勇,何平有,趙玉龍

（1.瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司河北保定071000; 2.河北省獸醫(yī)生物技術(shù)工程技術(shù)研究中心河北保定071000）

犬狂犬病病毒ELISA抗體檢測試劑盒概述

郁宏偉1,2,張德寶1,2,朱秀同1,2,劉濤1,2,石勇1,2,何平有1,2,趙玉龍1,2

（1.瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司河北保定071000; 2.河北省獸醫(yī)生物技術(shù)工程技術(shù)研究中心河北保定071000）

在研究與分析我國近年來犬狂犬病流行情況、疫苗使用現(xiàn)狀和市場需求等諸多因素的基礎(chǔ)上，瑞普生物與浙江大學(xué)再次合作，成功研制出犬狂犬病病毒ELISA抗體檢測試劑盒-“銳清”。該產(chǎn)品是農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的三類新獸藥【《新獸藥注冊證書》證號：（2016）新獸藥證字71號】，已獲得農(nóng)業(yè)部核發(fā)的獸藥生產(chǎn)批準(zhǔn)文號【獸藥生字030388829】，目前已成功上市。本文對犬狂犬病病毒ELISA抗體檢測試劑盒-“銳清”的特點(diǎn)進(jìn)行概述，以期使人們對該產(chǎn)品具有更加清楚的認(rèn)識。

1 “銳清”特點(diǎn)

1.1 特異性強(qiáng)

近年來的研究表明，狂犬病毒疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的免疫應(yīng)答反應(yīng)主要與N蛋白和G蛋白有關(guān)。本試劑盒采用基因工程技術(shù)表達(dá)狂犬病毒N蛋白，制備抗N蛋白單克隆抗體對國內(nèi)流行毒株SRV-9株純化抗原進(jìn)行鑒定，以鑒定正確的狂犬病毒蛋白作為包被抗原建立ELISA檢測方法，用于檢測犬血清中的狂犬病毒IgG抗體?！颁J清”特異性試驗(yàn)結(jié)果表明，該試劑盒不與犬瘟熱病毒（CDV）抗體陽性血清、犬細(xì)小病毒（CPV）抗體陽性血清發(fā)生反應(yīng)，特異性強(qiáng)（見表1）。

1.2 重復(fù)性好

用5個連續(xù)生產(chǎn)批次（151101、151102、151203、151204和160101批）的“銳清”試劑盒對15份質(zhì)控血清分別進(jìn)行重復(fù)檢測，檢測結(jié)果見表2。檢測結(jié)果顯示，批間變異系數(shù)在2.01%~10.40%之間，表明該方法具有高度的可重復(fù)性和穩(wěn)定性，可用于常規(guī)檢測。

表1 “銳清”特異性試驗(yàn)

1.3 符合率高

1.3.1 “銳清”與熒光抗體病毒中和試驗(yàn)（FAVN）比較

同時用本試劑盒與FAVN檢測226份臨床分離犬血清，試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可知，本試劑盒與FAVN法相比陽性符合率為98.74%（157/159），陰性符合率為83.58%（56/67），總符合率為94.25%（213/226），二者符合率較高，表明試劑盒可用于狂犬病毒中和抗體的檢測。

表3 “銳清”與FAVN符合率試驗(yàn)

表2 “銳清”穩(wěn)定性試驗(yàn)

1.3.2 “銳清”與進(jìn)口試劑盒比較同時用本試劑盒與進(jìn)口試劑盒（法國某公司）檢測244份臨床分離犬血清，試驗(yàn)結(jié)果見表4。由表4可知，兩者陽性符合率為91.35%（95/104），陰性符合率為90.00%（126/140），總符合率90.57%（221/244）。表明本試劑盒與進(jìn)口試劑盒符合率較高，可用于臨床樣品的大規(guī)模檢測。

表4 “銳清”與進(jìn)口試劑盒符合率試驗(yàn)

1.4 檢出限低

分別用5批試劑盒檢測6份陽性參考血清的抗體滴度，檢測結(jié)果分別為1:800、1:200、1:3200、1: 1600、1:1600、1:3200。由此可知該試劑盒對于犬血清中的狂犬病毒IgG抗體的檢出下限可達(dá)到1: 3200，能夠顯著的檢測犬血清中抗體的水平（表5）。

表5 “銳清”敏感性試驗(yàn)

2 小結(jié)

“銳清”是瑞普生物繼“銳捷”（豬圓環(huán)病毒2-dCap-ELISA抗體檢測試劑盒）后的又一全新產(chǎn)品，大量實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用表明，該試劑盒具有特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、符合率高、檢出限低等優(yōu)點(diǎn)，適宜臨床樣品的大規(guī)模檢測，對及時發(fā)現(xiàn)狂犬病、清楚疫苗免疫效果、提高畜產(chǎn)品質(zhì)量具有重大的經(jīng)濟(jì)、社會和公共衛(wèi)生意義?！?/p>

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.04.052

郁宏偉（1979-04-06），男，河北唐山人，博士，主要從事獸用生物制品方面研究。E-mail:yuhongwei2005@126.com

河北省科技計(jì)劃項(xiàng)目（15222907D）