李新宇 張海云 何榮琦 張萬飛 許榮譽

(福建醫(yī)科大學附屬泉州第一醫(yī)院胸部腫瘤外科，福建 泉州 362000)

胸腺瘤組織中表皮生長因子受體和胰島素樣生長因子-1受體的表達及其與臨床特征的關系

李新宇 張海云 何榮琦 張萬飛 許榮譽

(福建醫(yī)科大學附屬泉州第一醫(yī)院胸部腫瘤外科，福建 泉州 362000)

目的 探討表皮生長因子受體(EGFR)、胰島素樣生長因子-1受體(IGF-1R)在胸腺瘤組織中的表達及其與臨床病理特征及預后的關系。方法 60例胸腺瘤患者及60例胸腺濾泡性增生患者，應用免疫組化法測定胸腺瘤患者及胸腺濾泡性增生患者組織中EGFR、IGF-1R陽性表達情況，分析胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R的表達及與臨床特征及預后的關系。結果 胸腺瘤患者組織中EGFR、IGF-1R陽性表達率明顯高于胸腺濾泡性增生患者(P<0.05)。EGFR陽性表達與Masaoka分期、淋巴結轉(zhuǎn)移有關(P<0.05)，IGF-1R陽性表達與Masaoka分期有關(P<0.05)。EGFR陽性表達者5年生存率低于EGFR陰性表達者(χ2=5.040,P=0.025)；IGF-1R陽性表達者5年生存率低于IGF-1R陰性表達者(χ2=5.367,P=0.020)。結論 胸腺瘤患者組織中EGFR、IGF-1R高表達，其陽性表達可能與胸腺瘤發(fā)生及進展相關，EGFR、IGF-1R高表達可影響胸腺瘤患者生存率，可提示患者預后不良。

表皮生長因子受體；胰島素樣生長因子-1受體；胸腺瘤

胸腺瘤是縱隔腫瘤中較常見的一種，其臨床病理特征表現(xiàn)為腫瘤細胞內(nèi)伴有非腫瘤性淋巴細胞浸潤〔1〕。胸腺瘤患者由于免疫系統(tǒng)失衡會產(chǎn)生多種免疫疾病(如常見的重癥肌無力等)〔2〕。關于胸腺瘤的發(fā)病機制目前尚不完全清楚，但相關細胞因子的異常表達與胸腺瘤的發(fā)生有密切的關系。上皮生長因子(EGF)是機體中具有多種生物活性的細胞因子，可通過上調(diào)胸腺組織中上皮生長因子受體(EGFR)而促進上皮細胞分化、增生、遷移及浸潤〔3〕。研究指出〔4〕，胸腺組織中EGFR異常表達與胸腺瘤發(fā)生、進展有密切的關系。胰島素樣生長因子-1受體(IGF-1R)屬于糖蛋白跨膜受體，可促進細胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移、抑制細胞凋亡，且與腫瘤發(fā)生、生長及新生血管形成有密切的關系〔5〕。本研究將旨在探討EGFR、IGF-1R在胸腺瘤組織中的表達及其與臨床病理特征及預后的關系。

1 資料及方法

1.1 臨床資料 2011年1月至2016年1月選取福建醫(yī)科大學附屬泉州第一醫(yī)院外科收治的60例胸腺瘤患者，均經(jīng)病理組織確診，術前均未接受過放化療治療。其中男35例，女 25例，年齡 40～78〔平均(61.2±2.4)〕歲，腫瘤直徑：<5 cm 20例，≥5 cm 40例；WHO分型：A型8例，AB型12例，B1型15例，B2型 15例，B3型10例；Masaoka分期：Ⅰ+Ⅱ 29例，Ⅲ+Ⅳ 31例；合并重癥肌無力 22例，合并淋巴結轉(zhuǎn)移 25例。另選取同期收治的60例胸腺濾泡性增生患者為對照，男 32例，女 28例，年齡 28～80〔平均(60.8±3.2)〕歲，兩組性別、年齡比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 免疫組織化學法

1.2.1 試劑及儀器 EGFR鼠抗人單克隆抗體(美國Sigma公司)；EGFR試劑盒(上海酶聯(lián)實業(yè)有限公司)；IGF-1R鼠抗人單克隆抗體(美國NeoMarkers公司)；IGF-1R試劑盒(上海酶聯(lián)實業(yè)有限公司)；電子顯微鏡(深圳超眼科技有限公司)。

1.2.2 測定方法 應用免疫組化法測定胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R蛋白表達，染色步驟：將胃癌組織及正常胃黏膜組織標本蠟塊切成4 μm厚切片，常溫下乙醇梯度脫水，二甲苯脫蠟，應用3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶，采用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗標本2次，常溫下應用正常羊血清工作液封閉樣本10 min，依次加入EGFR鼠抗人單克隆抗體及IGF-1R鼠抗人單克隆抗體，采用PBS沖洗標本2次，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉素工作液，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中(型號：DNP-9022；上海精宏實驗設備有限公司)孵育25min，經(jīng)PBS沖洗后，經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，蘇木素復染，采用中性樹膠封固。

1.3 結果判定 由病理科2名高年資醫(yī)生在雙盲情況下閱片，EGFR、IGF-1R陽性表達均以細胞質(zhì)或細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為標準，采用半定量評分法對染色效果進行評價，以高倍視野下500個細胞著色情況進行積分，根據(jù)著色強度(深淺)分別計為0分(無色)～3分(棕褐色)；根據(jù)陽性細胞所占百分比計分：陽性細胞陰性為0分，≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。染色強度積分=著色強度計分×陽性細胞數(shù)，0～2分為陰性(-)，3～5分為弱陽性(+)，6～9分為陽性()，10～12分為強陽性()。陽性率=(弱陽性+陽性+強陽性)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS19.0軟件進行χ2檢驗、Kaplan-Meier曲線分析。

2 結 果

2.1 EGFR、IGF-1R陽性表達 胸腺瘤患者組織中EGFR、IGF-1R陽性表達率〔54例(90.00%)，50例(83.33%)〕明顯高于胸腺濾泡性增生患者〔2例(3.33%)，3例(5.00%)；χ2=90.536，74.649，均P=0.000〕，見圖1。

2.2 EGFR、IGF-1R陽性表達及其與臨床特征的關系 EGFR陽性表達與Masaoka分期、淋巴結轉(zhuǎn)移有關(P<0.05)，IGF-1R陽性表達與Masaoka分期有關(P<0.05)。見表1。

2.3 EGFR、IGF-1R陽性表達與胸腺瘤預后的關系 2011年1月至2016年1月對患者進行隨訪，隨訪時間12～60個月，平均35個月，共56例患者獲得隨訪，其中4例失訪，共32例(57.14%)患者生存。采用單因素Kaplan-Meier曲線分析數(shù)據(jù)顯示，EGFR陽性表達者5年生存率為52.00%(26/50)，低于EGFR陰性表達者100.00%(6/6)(χ2=5.040,P=0.025)。IGF-1R陽性表達者5年生存率為50.00%(23/46)，低于IGF-1R陰性表達者90.00%(9/10)(χ2=5.367,P=0.020)。

圖1 半定量評分法評價EGFR、IGF-1R表達(×400)

表1 EGFR、IGF-1R陽性表達及其與臨床特征的關系〔n(%)〕

3 討 論

EGFR是具有酪氨酸激酶活性的細胞膜表面糖蛋白受體，廣泛存在于哺乳動物上皮細胞膜表面，并在上皮惡性腫瘤中陽性表達〔6〕。EGFR與相關配體在胞內(nèi)發(fā)生磷酸化作用而激活細胞內(nèi)一系列信號傳導通路，從而啟動機體多種生命活動〔7〕。EGFR自身突變會導致配體表達增多，非配體持續(xù)活動，從而導致細胞生長失去調(diào)控性，使得細胞無限增生〔8〕。研究指出〔9〕，EGFR過表達與惡性腫瘤發(fā)生、增殖、浸潤性、活動性、黏連性、新生血管形成及細胞凋亡抑制有密切的關系。在腦膠質(zhì)細胞癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、結腸癌等多種癌癥組織中均發(fā)生EGFR過表達的情況〔10〕。本研究結果提示在胸腺瘤患者中存在EGFR高表達的情況，且EGFR在胸腺瘤的發(fā)展中起到重要的作用，可促進胸腺瘤從包膜完整性進展到浸潤周圍組織器官。Kaplan-Meier曲線分析提示EGFR陽性表達與胸腺瘤患者不良預后有密切關系。EGFR在胸腺瘤中的作用機制可能與其異常激活PI3K-AKT信號通路及RAS-RAD-MAPK信號通路、誘導細胞增生、抑制細胞凋亡有關。

IGF-1R屬于糖蛋白跨膜受體，廣泛存在于人胞質(zhì)區(qū)、跨膜區(qū)及胞外區(qū)。研究顯示〔11〕，IGF-1R在多種惡性腫瘤中均存在過表達，如前列腺癌、胃腸道惡性腫瘤、卵巢癌、乳腺癌、肺癌等。Zucali等〔12〕研究指出，IGF-1R可促進腫瘤細胞增殖、分化及抑制細胞凋亡，與腫瘤增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移有密切關系。Girard等〔13〕對56例胸腺惡性腫瘤及7例胸腺良性病變患者應用免疫組化法測定IGF-1R，結果表明惡性病變組IGF-1R陽性表達率為86%，而良性病變組為43%，且IGF-1R表達水平與胸腺組織惡性病變患者臨床病理特征有關。本研究結果提示在胸腺瘤患者中存在IGF-1R過表達的情況，且IGF-1R可能參與胸腺瘤病理浸潤、分化過程。另外IGR-1R過表達可影響胸腺瘤患者生存率，通過測定胸腺瘤組織IGF-1R表達情況可預測胸腺瘤患者遠期預后情況。IGF-1R在胸腺瘤中的作用機制可能由于IGF-1R異常表達可促使血管內(nèi)皮生長因子表達上調(diào)，促使腫瘤血管形成及生長。此外，IGR-1R信號轉(zhuǎn)導可改變腫瘤細胞黏附性，誘導腫瘤細胞向惡性方向發(fā)展，促進腫瘤細胞生長、浸潤及轉(zhuǎn)移。

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3 馬遇慶,師 藝,崔文麗,等.EGFR異常表達與胸腺上皮性腫瘤組織學分型關系研究〔J〕.新疆醫(yī)科大學學報,2014;37(9):1144-7.

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7 Amaro A,Mirisola V,Angelini G,etal.Evidence of epidermal growth factor receptor expression in uveal melanoma:inhibition of epidermal growth factor-mediated signalling by Gefitinib and Cetuximab triggered antibody-dependent cellular cytotoxicity〔J〕.Eur J Cancer,2013;49(15):3353-65.

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12 Zucali PA,Petrini I,Lorenzi E,etal.Insulin-like growth factor-1 receptor and phosphorylated AKT-serine 473 expression in 132 resected thymomas and thymic carcinomas〔J〕.Cancer,2010;116(20):4686-95.

13 Girard N,Teruya Feldstein J,Payabyab EC,etal.Insulin-like growth factor-1 receptor expression in thymic malignancies〔J〕.Thorac Oncol,2010;5(9):1439-46.

〔2017-04-07修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

泉州市科技計劃項目(No.2012Z6)

許榮譽(1964-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事胸部腫瘤外科研究。

李新宇(1979-)，男，主治醫(yī)師，主要從事胸部腫瘤外科研究。

R73

A

1005-9202(2017)13-3240-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.054