褚晶晶

高效液相色譜法測定丹參片中丹參酮ⅡA含量的方法

褚晶晶

目的 觀察采用高效液相色譜法對丹參片中的丹參酮ⅡA的含量進(jìn)行測定的效果。方法 本研究檢測供試品溶液以超聲波提取法對丹參片進(jìn)行制備, 對照品采用丹參酮ⅡA, 測定方法采用高效液相色譜法, 選擇合適的色譜柱、流動(dòng)相以及檢測波長, 并控制適宜的流速以及進(jìn)樣量, 測定溫度選擇為室溫。結(jié)果 在0.5126～4.8700 μg/ml范圍內(nèi)丹參酮ⅡA與峰面積具有良好的線性關(guān)系, 求的回歸方程為Y=1425.3X+28.75, r=0.9996, n=5；平均回收率為99.63%, RSD值為1.46%(n=9)。結(jié)論 采用高效液相色譜法對丹參片中的丹參酮ⅡA的含量進(jìn)行測定具有操作方法簡便, 測定結(jié)果穩(wěn)定的優(yōu)勢, 適用于丹參片中的丹參酮ⅡA的含量控制, 值得推廣。

高效液相色譜法；丹參片；丹參酮ⅡA；含量測定

丹參片在2015年版《中國藥典》中質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有丹酚酸B的含量測定, 本文采用高效液相色譜法對丹參片中丹參酮ⅡA的含量測定方法進(jìn)行了研究。

1 儀器與材料

本研究采用的高效液相色譜儀為美國waters E2695高效液相色譜儀。丹參片(批號分別為161011, 161012, 161013),丹參酮ⅡA對照品(中國藥品生物制品檢定所, 批號為0766-200201)。本研究所用甲醇均為色譜純, 所用水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2. 1 色譜條件 選擇規(guī)格為(4.6 mm×250 mm, 5 μm)的waters symmetry C18色譜柱, 以甲醇-水(80∶20)為流動(dòng)相, 控制流速為1.0 ml/min, 選取270 nm為檢測波長, 并控制適宜的沖柱比例以及進(jìn)樣量。

2. 2 溶液的制備 ①對照品溶液：稱取20 mg丹參酮ⅡA對照品, 將其放于100 ml棕色量瓶中, 采用甲醇溶解后稀釋至刻度。精密量取5 ml置于50 ml棕色量瓶中, 稀釋至刻度即可。②供試品溶液：取10片丹參片, 稱重后研細(xì), 精密稱取其中1.5 g, 放于25 ml量瓶中, 加入甲醇至刻度, 超聲30 min, 過濾取續(xù)濾液即為供試品溶液［1］。③陰性樣品溶液：取不含丹參酮ⅡA的輔料, 以制備供試品溶液的方法進(jìn)行制備陰性樣品溶液。

2. 3 專屬性 精密量取20 μl上述3種溶液, 注入色譜儀。丹參酮ⅡA在設(shè)定的色譜條件下保留時(shí)間為12.8 min, 分離良好, 且無干擾。見圖1。

圖1 色譜圖

2. 4 線性關(guān)系 分別準(zhǔn)確吸取0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 ml對照品溶液置于10 ml量瓶中, 并稀釋至刻度, 按設(shè)定色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣, 每次進(jìn)樣20 μl, 測峰面積［2］。根據(jù)峰面積以及濃度求得回歸方程為Y=1425.3X+28.75, r=0.9996, n=5, 在0.5126~4.8700 μg/ml范圍內(nèi)丹參酮ⅡA與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2. 5 精密度 取對照品溶液, 進(jìn)樣20 μl, 重復(fù)操作5次, 測峰面積。RSD值為1.03%(n=5), 其精密度良好。

2. 6 重復(fù)性 按照同一供試品溶液制作方法制作同一批次樣品5份, 然后進(jìn)行丹參酮ⅡA的含量測定。RSD值為1.55%(n=5), 其重現(xiàn)性良好。

2. 7 穩(wěn)定性 取同批供試品, 分別在0、2、4、6、8 h測定丹參酮ⅡA峰面積。RSD值為1.74%(n=5), 表明在8 h內(nèi)其穩(wěn)定性良好。

2. 8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量為0.550 mg/g的樣品9份, 分別加入不同濃度丹參酮ⅡA對照品溶液, 按供試品方法制備供試品溶液后進(jìn)樣測峰面積, 計(jì)算回收率［3］。平均回收率為99.63%, RSD值為1.46%(n=9)。見表1。

2. 9 樣品測定 取10片丹參片樣品, 稱定制備好供試品溶液后, 按照色譜條件對3個(gè)不同批次樣品中丹參酮ⅡA的含量進(jìn)行測定。丹參片中丹參酮ⅡA的平均含量分別為0.1590 mg/片, 0.1601 mg/片, 0.1679 mg/片。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

丹參片的主要藥理功效為理氣止痛以及活血化瘀, 其臨床常用于心絞痛等疾病的治療［4］。中藥材丹參的化學(xué)成分主要由兩部分組成, 分別為脂溶性成分以及水溶性成分。丹參酮ⅡA是中藥材丹參中的主要脂溶性成分, 在正品中藥材中,丹參酮ⅡA的含量應(yīng)該是其中最高的。采用適當(dāng)?shù)姆椒▽Φ⑵械挠行С煞值⑼駻進(jìn)行準(zhǔn)確測定對有效控制藥品的質(zhì)量具有十分重要的意義［5］。

本研究主要探究了采用高效液相色譜法對丹參片中的丹參酮ⅡA的含量進(jìn)行測定應(yīng)用效果。研究結(jié)果表明：在0.5126～4.8700 μg/ml范圍內(nèi)丹參酮ⅡA與峰面積具有良好的線性關(guān)系, 求的回歸方程為Y=1425.3X+28.75, r=0.9996, n=5；平均回收率為99.63%, RSD值為1.46%(n=9)。這就說明采用高效液相色譜法對丹參片中的丹參酮ⅡA含量進(jìn)行測定具有線性關(guān)系好, 精密度好、重復(fù)性強(qiáng)以及穩(wěn)定性好的優(yōu)勢。采用高效液相進(jìn)行含量測定時(shí), 其流動(dòng)相選擇一般為甲醇-水,有相關(guān)研究表明, 同時(shí)采用甲醇-水, 乙腈-甲醇-水以及甲醇-0.2%磷酸作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫時(shí), 甲醇-水的保留時(shí)間以及峰型是最為理想的［6］。因此在本研究中即采用了甲醇-水作為流動(dòng)相。由于在270 nm處丹參酮ⅡA的吸收峰最大, 因此, 在本研究中選取270 nm作為色譜檢測波長。有相關(guān)研究表明在分別采用超聲提取、索氏提取以及加熱回流提取三種提取方法時(shí), 以甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲提取的提取率是最高的［7］。另外, 由于丹參酮ⅡA在熱環(huán)境下不穩(wěn)定易發(fā)生降解, 因此, 應(yīng)注意控制提取所需的溫度以及時(shí)間,以避免其發(fā)生降解［8-10］。在本研究中作者選取甲醇超聲提取法, 并設(shè)定提取時(shí)間為30 min, 有效避免了丹參酮ⅡA的降解現(xiàn)象, 保證了研究結(jié)果的準(zhǔn)確可靠性。

綜上所述, 采用高效液相色譜法對丹參片中丹參酮ⅡA的含量進(jìn)行測定具有操作方法簡便, 測定結(jié)果穩(wěn)定的優(yōu)勢,適用于丹參片中的丹參酮ⅡA的含量控制, 值得推廣應(yīng)用。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.12.112

2017-04-17］

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