陳薇

摘 要：采用溶劑提取法提取黃藤主要成分巴馬汀，通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)并計(jì)算提取率，尋求提取黃藤主要成分巴馬汀的優(yōu)化條件，并采用薄層色譜法進(jìn)行成分分離，再用紫外—可見(jiàn)分光光度法測(cè)定鹽酸巴馬汀的相對(duì)純度。

關(guān)鍵詞：黃藤；提??；巴馬汀；鹽酸巴馬??；薄層色譜；紫外—可見(jiàn)光分光光度

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2017.13.025

0 前言

黃藤又名紅藤，為防己科叢生攀援藤本，單性花，雌雄異株，是我國(guó)熱帶和南亞熱帶森林中的主要伴生植物。黃藤所含主要成分為巴馬汀。尚含少量藥根堿、黃藤素甲、黃藤素乙、黃藤內(nèi)脂及甾醇。巴馬汀又名掌葉防已堿，為季銨生物堿，黃藤中巴馬汀含量為2.5-3%。黃藤藥用有效成分巴馬汀，有廣泛的抗菌、降壓、治療浮腫、明顯的增加白細(xì)胞吞噬能力的作用，經(jīng)氫化得四氫巴馬?。ㄑ雍饕宜兀┯墟?zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用[1]。藥根堿對(duì)中樞神經(jīng)有麻醉和降血壓的效能。本研究采用溶劑提取法提取黃藤主要成分巴馬汀，通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)并計(jì)算提取率，尋求提取黃藤主要成分巴馬汀的優(yōu)化條件，并采用薄層色譜法進(jìn)行成分分離，再用紫外—可見(jiàn)分光光度法測(cè)定鹽酸巴馬汀的相對(duì)純度。實(shí)驗(yàn)表明，其提取率對(duì)比：乙醇回流提取法（1.97%）>硫酸煎煮法（1.61%）>醋酸煎煮法（1.25%）>硫酸冷浸法（1.16%），采用乙醇回流提取法得到的產(chǎn)率最高，產(chǎn)品純度高，色澤好。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

植物黃藤（越南產(chǎn)），硫酸，草酸，乙醇（95%），鹽酸，氫氧化鈉，精制食鹽，硅膠G，羧甲基纖維素鈉（CMC-Na），三氯甲烷，甲醇，甲苯，氨水，乙酸乙酯，異丙醇，石油醚（以上均為分析純）

1.2 提取實(shí)驗(yàn)

1.2.1 提取實(shí)驗(yàn)流程圖

1.2.2 提取實(shí)驗(yàn)方法

（1）酸水提取條件：分別在常溫和加溫到60℃用5，10，15，20，25mL/L硫酸溶液，5，10，15，20，25mL/L乙酸溶液進(jìn)行提取，其他提取條件相同下，確定溶劑后，在最佳提取溶劑提取下，堿化條件pH 值為分別為 6.0，7.0，8.0，9.0，10.0，11.0，再確定堿化條件。

（2）乙醇回流提取法：取黃藤粗粉100g，用95%乙醇加熱回流提取2次，每次1小時(shí)，每次乙醇用量為200ml，抽濾，合并二次醇提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至15-20ml，轉(zhuǎn)移到50ml小燒杯中，密封放置24h，析晶，抽濾，干燥，得巴馬汀粗品。（平行實(shí)驗(yàn)5次），計(jì)算和對(duì)比提取率.

1.3 分離、成鹽、精制實(shí)驗(yàn)

酸水提取法：將酸、醇粗巴馬汀，分別加80%乙醇100ml，加熱回流使溶，用10ml水溶解后（可在水浴上加熱），乘熱抽濾，向?yàn)V液中滴加6N鹽酸溶液至pH=2放置，即有金黃色針狀結(jié)晶析出，抽濾，得鹽酸巴馬汀粗品。

精制：將鹽酸巴馬汀粗品用滴管加入95%乙醇使結(jié)晶恰溶解（可在水浴上加熱），抽濾得澄清液，密封放置析晶。在形成一批結(jié)晶后（放置約24h），立即傾出上層溶液，然后再密封放置以得到第二批結(jié)晶。母液再經(jīng)同樣方法處理又可得到第三批結(jié)晶。這些晶體純度不同不可貿(mào)然混和。

1.4 紫外分光光度法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

（1）樣品制備：a.對(duì)照品：選取自制的鹽酸巴馬汀產(chǎn)品中最好的、一份產(chǎn)品配制成0.499mg/mL鹽酸巴馬汀對(duì)照品溶液。b.供試驗(yàn)品溶液制備：氯化巴馬汀：醋酸法0.0532g、硫酸法0.0522g、乙醇法0.0501g，溶于100mL容量瓶中，定容。

（2）最大吸收波長(zhǎng)的選擇：取對(duì)照品溶液2ml置于100mL容量瓶， 定容。以水為空白，在200到490nm波長(zhǎng)范圍選擇吸光度。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別精密量取對(duì)照品溶液0.5mL，1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL，分別置于100mL容量瓶中，定容。以水為空白，以273nm波長(zhǎng)測(cè)定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以吸收度（A）對(duì)取用量（c）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。

（4）重現(xiàn)性試驗(yàn)：分別取冰醋酸法、硫酸法、乙醇法供試品溶液各5份，以水為空白測(cè)定吸收值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品含量。

（5）加樣回收率試驗(yàn)：分別量取醋酸法、硫酸法、乙醇法供試品液各6份，每份1.0ml，置于100ml容量瓶中，再分別加入對(duì)照品溶液0.25ml，0.5ml，1.0mL，1.5mL，1.25ml，1.75ml（各2份），加水至刻度，搖勻，進(jìn)行測(cè)定。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 最優(yōu)提取實(shí)驗(yàn)方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（1）分別以酸水進(jìn)行的冷浸法和加熱法作提取，巴馬汀得率的比較，見(jiàn)表1。

同一批樣品，提取方法不同，巴馬汀的得率相差很大，加熱法的巴馬汀得率較冷浸法的得率高。

（2）乙醇回流提取法得率結(jié)果（見(jiàn)表2）。

乙醇回流提取法較酸水提取法得率要高，在析晶時(shí)晶體顏色比較純正，為黃色針狀晶體。

2.2 提取條件的探索結(jié)果

（1）不同濃度硫酸溶液和乙酸溶液提取的產(chǎn)品得率的比較[4] ，見(jiàn)表3。

（2）不同pH條件下的產(chǎn)品得率比較[3]，見(jiàn)表4。

當(dāng)pH值 6.0～10.0時(shí)產(chǎn)品得率隨著pH值的增加而增加，當(dāng)pH值10.0時(shí)產(chǎn)品得率高為1.75%。

3 紫外分光光度法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)[5]

本實(shí)驗(yàn)采用提取效果最佳的氯化巴馬汀產(chǎn)品作為對(duì)照品，以水為參比，測(cè)定其在不同波長(zhǎng)下的吸光度，得出氯化巴馬汀最大吸收波長(zhǎng)，并在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，其他提取出的產(chǎn)品用同樣的方法測(cè)定吸光度，對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可以得到各提取方法提取出產(chǎn)品的相對(duì)含量。

（1）最大吸收波長(zhǎng)的選擇、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖3、4）。

結(jié)論：鹽酸巴馬汀溶液的最大吸收波長(zhǎng)為273nm。對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線公式為：

y = 60.909x + 0.0186。R2=0.9981，符合標(biāo)準(zhǔn)曲線的偏差要求。

（2）穩(wěn)定性、精密度試驗(yàn)（如圖5、6）。

結(jié)論：隨著時(shí)間的變化，吸光度值無(wú)明顯變化。精密度試驗(yàn)的SV值為0.26%，精密度比較高。

（3）重現(xiàn)性試驗(yàn)。分別進(jìn)行醋酸法重現(xiàn)性試驗(yàn)， 硫酸法重現(xiàn)性試驗(yàn)，乙醇法重現(xiàn)性試驗(yàn)，以及加樣回收率試驗(yàn)。以確定其實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性、回收率、以及變異系數(shù)。

結(jié)果討論：

1）由重現(xiàn)性試驗(yàn)表可知：醋酸法SV值為0.29%，重現(xiàn)性較好，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得冰醋酸法提取得到的鹽酸巴馬汀相對(duì)于對(duì)照品的相對(duì)含量為80.02%。

2）同樣可知由硫酸法提取的SV值為0.33%，重現(xiàn)性較好，相對(duì)含量為57.93%。

3）a）乙醇法提取的SV值為0.34%，重現(xiàn)性較好，相對(duì)含量為82.88%。

b）冰醋酸法加樣回收試驗(yàn)加樣平均回收率為100.36%，變異系數(shù)SV為0.71%。

c）硫酸法加樣回收試驗(yàn)加樣平均回收率為99.94%，變異系數(shù)SV為0.42%。

d）乙醇法加樣回收試驗(yàn)加樣平均回收率為100.88%，變異系數(shù)SV為0.73%。

4 結(jié)論

（1）黃藤中巴馬汀的提取宜采用，乙醇回流提取法，得率要高，且需快速液抽濾，慢慢結(jié)晶的方法，可得析出晶體顏色比較純正的黃色針狀晶體鹽酸巴馬汀，粗巴馬汀用水溶解分離，可得粗黃藤內(nèi)酯。黃藤內(nèi)酯粗品反復(fù)以酒精、丙酮重結(jié)晶，得光亮棱狀的黃藤內(nèi)酯精品。

（2）根據(jù)紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定，醋酸法、硫酸法和95%乙醇法提取的氯化巴馬汀相對(duì)含量分別為80.02%， 57.93%， 82.88%乙醇提取法比酸水提取法得到的氯化巴馬汀的純度較高。

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