木艾塔爾?努爾麥麥提 夏木西努爾?艾克拜爾 太力艾提?吐爾洪 劉永剛

摘要 [目的]探討阿育魏果中總黃酮的提取方法及含量測(cè)定方法。[方法]采用正交試驗(yàn)，以提取的總黃酮的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，紫外可見分光光度法測(cè)定總黃酮含量。[結(jié)果]超聲法提取阿育魏果中總黃酮的含量為10.378%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.38%（n=3）。最優(yōu)工藝如下：時(shí)間為15 min，功率為150 W，料液比為1∶20，乙醇濃度為70%。上述4個(gè)因素對(duì)阿育魏果中總黃酮提取率的影響從大到小依次為乙醇濃度、料液比、超聲功率和超聲時(shí)間。[結(jié)論]超聲提取阿育魏果中總黃酮快速且高效；紫外外分光光度法準(zhǔn)確度較高，偏差較小。

關(guān)鍵詞 阿育魏果；總黃酮；正交試驗(yàn)；紫外可見分光光度法；超聲提取

Determination of Extraction Process of Total Flavonoids in Seed of Trachyspermum ammi （L.） Sprague of Uyghur Crude Drug

MUAITAER·Nuermaimaiti1，XIAMUXINUER·Aikebaier1，TAILIAITI·Tuerhong1，LIU Yong-gang2* （1. College of Xinjiang Uyghur Medicine，Hetian，Xinjiang 848000；2. Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102）

Abstract [Objective] The aim was to study the methods of extraction and determination of total flavonoids in seed of Trachyspermum ammi （L.） Sprague. [Method] Through orthogonal experiments and taking total flavonoids extracted as the evaluation index，UV-Vis spectrophotometry method was used to determine the optimum technological conditions of total flavonoids extraction in seed of Trachyspermum ammi （L.） Sprague. [Result] The total flavonoids content measured in seed of Trachyspermum ammi （L.） Sprague was 10.378%，and the relative standard deviation was 2.38% （n=3）. The best ultrasonic extraction technology of total flavonoids was as followed：the ultrasonic time was 15 min； the ultrasonic power was 150 W； the solid-liquid ratio was 1∶20； and the concentration of ethanol was 70%. The effects of the four factors was in order of ethanol concentration，solid-liquid ratio，ultrasonic power and ultrasonic time. [Conclusion] The ultrasonic extraction techniques of total flavonoids from seed of Trachyspermum ammi （L.） Sprague are quick and efficien. The UV-Vis spectrophotometry method is accurate and reliable.

Key words Seed of Trachyspermum ammi （L.） Sprague；Total flavonoids；Orthogonal experiments；UV-Vis spectrophotometry method；Ultrasonic extraction

阿育魏果，維吾爾語(yǔ)稱“Juwine”，音譯為“居維納”，漢語(yǔ)通用名為“阿育魏果”，為傘形科植物細(xì)葉糙果芹[Trachyspermum ammi （L.）Sprague.]的成熟果實(shí)[1-2]。阿育魏果作為維吾爾常用藥材，被收錄于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：維吾爾要分冊(cè)》[3]。阿育魏果中總黃酮具有體外抗氧化活性，因此可作為新型天然抗氧化物質(zhì)的來(lái)源[4]。阿育魏果總黃酮抗氧化活性研究已見報(bào)道[4]，但未見總黃酮含量測(cè)定的相關(guān)報(bào)道。超聲提取技術(shù)在醫(yī)藥、化學(xué)等各領(lǐng)域，尤其在藥材成分提取中作用日益重要[5]。筆者采用超聲波提取法和正交試驗(yàn)，以蘆丁為對(duì)照品，通過(guò)紫外分光光度法對(duì)阿育魏果中總黃酮提取進(jìn)行了優(yōu)化，旨在為阿育魏果的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究及開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 阿育魏果購(gòu)自新疆和田，由木艾塔爾·努爾麥麥提鑒定；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為100080-200707；無(wú)水乙醇；蒸餾水；其余試劑均為分析純。

2802型紫外可見分光光度計(jì)，上海尤尼柯儀器有限公司；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器，江蘇省昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 方法 黃酮類物質(zhì)含量測(cè)定，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度法進(jìn)行測(cè)定[6]。

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備。

稱取蘆丁50.0 mg，置于25 mL量瓶中，加適量甲醇溶解，定容。量取10 mL，置于100 mL量瓶中，加水定容，得0.2 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL對(duì)照品溶液置于25 mL容量瓶中，制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別加入5% NaNO2溶液1.0 mL，混勻，放置6 min，加入1.0 mL 10% Al（NO）3溶液，混勻，放置6 min，再加入10.0 mL 5% NaOH，用蒸餾水定容，搖勻，放置15 min。以相應(yīng)的試劑為空白，在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制曲線。

1.2.3 正交試驗(yàn)。

通過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定超聲提取法條件，按照L9（34）設(shè)計(jì)4因素3水平的正交試驗(yàn)。稱取阿育魏果樣品1.0 g若干份，置于錐形瓶中，加入提取溶劑超聲提取數(shù)分鐘，過(guò)濾，取1.0 mL提取液進(jìn)行顯色反應(yīng)，測(cè)定提取物中黃酮含量及提取率。選取時(shí)間（A）、功率（B）、料液比（C）、乙醇濃度（D）4個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)。超聲波提取法因素及水平見表1。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理。樣品中的黃酮含量 （以蘆丁計(jì)）=（C×V1×V3/W×V2）×100%，式中，C為樣液含黃酮量（mg/mL）；V1為提取總體積（mL）；V2為顯色時(shí)抽取體積（mL）；V3為顯色時(shí)定容體積（mL）；W為稱樣重量（g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系的考察 以標(biāo)準(zhǔn)蘆丁濃度（8.00～48.00 μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出線性方程（圖1）：y=12.71x+0.002 7，R2=0.999 4，線性關(guān)系良好。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 精密度考察。

量取對(duì)照溶液6份，每份1.0 mL，置于

25 mL量瓶中，按“1.2.2”顯色方法顯色并測(cè)定吸光度，通過(guò)回歸方程計(jì)算總黃酮含量。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21%，表明精密度良好。

2.2.2 穩(wěn)定性考察。

量取同一供試溶液6份，按“1.2.2”顯色方法顯色，在510 nm波長(zhǎng)處每隔5 min測(cè)定吸光度1次，測(cè)定60 min。結(jié)果顯示，供試溶液在30 min內(nèi)的吸光度穩(wěn)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.85%，而30 min后其吸光度下降明顯，表明供試溶液在30 min內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.2.3 重復(fù)性考察。

稱取樣品6份，按“1.2.2”顯色方法顯色并測(cè)定吸光度，計(jì)算其含量，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.77%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.4 加樣回收試驗(yàn)。

量取已知總黃酮含量的提取液6份，分別加入已知濃度的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按“1.2.2”項(xiàng)操作顯色，在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，得出總黃酮含量，根據(jù)回收率公式計(jì)算出加樣回收率。由表2可知，回收率在98.95%～107.09%，平均回收率為101.17%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.92%。

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果

正交試驗(yàn)結(jié)果（表3）顯示，乙醇濃度（D）對(duì)總黃酮提取效果的影響最大，料液比（C）和超聲功率（B）影響依次減小，超聲時(shí)間（A）的影響最小。最佳提取工藝組合為A2B2C3D1，即阿育魏果中總黃酮的最佳提取工藝

條件：超聲時(shí)間為15 min，功率為150 W，料液比為1∶20，乙醇濃度為70%。

2.4 阿育魏果總黃酮提取率的測(cè)定 在“2.3”確定的最佳提取工藝條件下對(duì)阿育魏果進(jìn)行超聲提取，提取液按“1.2.2”進(jìn)行總黃酮含量測(cè)定，平行試驗(yàn)3次。結(jié)果表明，總黃酮含量為10.078%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.38%。

3 結(jié)論與討論

目前，維吾爾藥國(guó)家和地方標(biāo)準(zhǔn)體系已初步建立，基本保證了維吾爾醫(yī)臨床需求和質(zhì)量，但仍有25.2%[7]的維吾爾藥材沒(méi)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，所以維吾爾藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亟需健全和完善。其中，總黃酮含量測(cè)定方法的考察一直是總黃酮研究的一個(gè)重要部分。該研究以藥典為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初步探討，根據(jù)多次試驗(yàn)結(jié)果得出維吾爾藥阿育魏果的最佳超聲提取工藝：超聲時(shí)間為15 min，功率為150 W，料液比為1∶20，乙醇濃度為70%。其操作方法簡(jiǎn)單常用，重復(fù)性、精密度、加樣回收率均較好。超聲提取法有助于節(jié)省提取溶劑并縮短提取時(shí)間。

此外，可通過(guò)石油醚脫脂脫色脫蠟、萃取等[8-9]工藝進(jìn)一步提高提取含量，達(dá)到進(jìn)一步優(yōu)化的目的。

參考文獻(xiàn)

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