李波 朱繼孝 鐘國(guó)躍

摘要 [目的]對(duì)藏藥小大黃總提物、乙酸乙酯部位和水部位進(jìn)行降尿酸活性的研究，確定其降尿酸有效部位。[方法]稱(chēng)取藏藥小大黃干燥的根500.0 g，用70%乙醇提取濃縮，加入乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部位和水部位，研究小大黃總提物、乙酸乙酯部位和水部位對(duì)高尿酸血癥小鼠的血清尿酸（UA）、肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）、腺苷脫氨酶（ADA）、肌酐（Cre）以及血尿素氮（Bun）的影響。[結(jié)果]藏藥小大黃總提物和水部位具有一定的降尿酸和抑制XOD、ADA、Cre以及Bun活性。[結(jié)論]水部位是藏藥小大黃降尿酸有效部位，其降尿酸作用的機(jī)制之一是抑制 XOD 活性。

關(guān)鍵詞 小大黃；高尿酸血癥；降尿酸；有效部位

中圖分類(lèi)號(hào) S567.23 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2017）34-0117-03

Abstract [Objective] The research aimed to study the effect of total extract of Rheum pumilum （TER）， ethyl acetate extract， as well as water extract on the level of uric acid and define its active fraction.[Method]The root of the dried rhubarb was weighed 500.0 g， extracted with 70% ethanol， concentrated to a small amount of volume and extracted with ethyl acetate to obtain ethyl acetate and water.The level of uric acid （UA）， xanthine oxidase （XOD）， adenosine deaminase （ADA）， creatinine （Cre） and blood usea nitrogen （Bun） on TER， ethyl acetate extract and water extract were analyzed.[Result]The TER and water extract had a certain effect on reducing the level of UA， XOD， ADA， Cre and Bun.[Conclusion]Water part of Rheum pumilum was the target area for antihyperuricemia， and the effect was related to its inhibition of XOD.

Key words Rheum pumilum；Hyperuricemia；Antihypertension；Effective part

痛風(fēng)屬中醫(yī)“痹癥”“痛風(fēng)”“白虎歷節(jié)”的范疇，在藏醫(yī)藥中，多屬“黃水病”范疇。痛風(fēng)一病的發(fā)作，臨床癥狀主要以關(guān)節(jié)紅腫疼痛為主要表現(xiàn)，特別以下肢關(guān)節(jié)最為明顯。關(guān)節(jié)紅腫疼痛屬藏醫(yī)的“黃水病” 范疇。藏醫(yī)理論認(rèn)為，所有疾病的發(fā)生是“三大因素”（即“龍”“赤巴”“培根”）失調(diào)所致，“龍”“赤巴”“培根”的失調(diào)可導(dǎo)致黃水病的產(chǎn)生?！包S水”流著于骨，臨床上可見(jiàn)關(guān)節(jié)腫脹等。“黃水病”“惡性腹水” 是藏區(qū)多發(fā)疾病，也是藏醫(yī)學(xué)臨床具有治療優(yōu)勢(shì)的病種之一?！扒斪巍鳖?lèi)藥材為常用治療這類(lèi)疾病的藏藥材。文獻(xiàn)記載各地藏醫(yī)所用的“曲瑪孜”類(lèi)藥材的基原植物有一定差異，涉及到蓼科大黃屬多種大黃和同科蓼屬植物西伯利亞蓼根或全草，《藏藥標(biāo)準(zhǔn)》 在“曲瑪孜”條目下收載了蓼科植物小大黃（Rheum pumilum）和西伯利亞蓼（Polygonum sibiricum Laxm.），干燥全草入藥[1]。江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心研究組前期對(duì)“曲瑪孜”的基原品種進(jìn)行市場(chǎng)調(diào)研，發(fā)現(xiàn)小大黃（R.pumilum）和西伯利亞蓼（P.sibiricum）是“曲瑪孜”的主流品種，目前關(guān)于西伯利亞蓼和小大黃的化學(xué)和藥理作用研究較少[2-5]，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不清楚。王曉云等[6]研究表明藏藥西伯利亞蓼70%乙醇提取物具有降尿酸作用。王洪玲等[7]對(duì)小大黃化學(xué)成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其結(jié)構(gòu)類(lèi)型包括蒽醌類(lèi)和二苯乙醇類(lèi)化合物。基于此，該研究對(duì)藏藥小大黃總提物、乙酸乙酯部位、水部位進(jìn)行抗痛風(fēng)活性篩選，確定其活性部位及可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物。湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司體重（20±3）g的SPF級(jí)昆明種雄性小鼠120只，試驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SCXK（湘）2011-0003，動(dòng)物試驗(yàn)期間室溫（22±2） ℃。

1.1.2 藥品及試劑。藏藥小大黃采自西藏昌都，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)鐘國(guó)躍研究員鑒定為Rheum pumilum。氧嗪酸鉀鹽（STBD5759V）和別嘌呤醇（081M1112V）購(gòu)買(mǎi)于Sigma-Aldrich；尿酸測(cè)定試劑盒[YZB1JAP4561-2012（398308）]、尿素氮測(cè)定試劑盒[YZB1JAP5441-2012（332213）]和肌酐試劑盒[YZB1JAP4550-2012（252203）]購(gòu)自希森美康醫(yī)用電子（上海）有限公司；腺苷脫氨酶測(cè)試盒（20151212）、黃嘌呤氧化酶測(cè)試盒（20151209）、考馬斯亮藍(lán)測(cè)試盒（20151210）購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 儀器。 DY89-II型電動(dòng)勻漿機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士布奇公司）；電子分析天平（上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司）；超低溫冰箱（中科美菱低溫科技有限責(zé)任公司）；全自動(dòng)干式生化分析儀（日本富士公司）；高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Beckman公司）；UV-2100紫外分光光度儀（北京瑞利分析儀器公司）。

1.2 方法

1.2.1 小大黃樣品的制備。稱(chēng)取小大黃干燥的根500.0 g，粉碎后加入4.0 L 70%乙醇，超聲提取2次，每次2 h，將提取液合并濃縮，用乙酸乙酯萃取，濃縮得乙酸乙酯部位和水部位，將小大黃總提物、乙酸乙酯部位和水部位加適量的0.5%羧甲基纖維素鈉，得各個(gè)部位的低、中、高劑量組（2.0、4.0、8.0 g/kg，按生藥計(jì)），放置冰箱冷藏備用。

1.2.2 小大黃各部位小鼠高尿酸血癥的影響。昆明雄性小鼠120只隨機(jī)分為正常組、模型組、別嘌呤醇組（0.01 g/kg）、小大黃總提取物低、中、高劑量組、小大黃乙酸乙酯部位中、高劑量組以及小大黃水部位低、中、高劑量組，正常組與模型組灌以生理鹽水，別嘌呤醇組灌以別嘌呤醇 0.01 g/kg，連續(xù)給藥7 d，第7天08：00加強(qiáng)給藥一次，12：00腹腔注射氧嗪酸鉀鹽（10 min一組），13：00灌胃，14：00取血，采用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清尿酸（UA）、肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）、腺苷脫氨酶（ADA）、肌酐（Cre）以及血尿素氮（Bun）活性。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

運(yùn)用 SPSS 18.0 軟件進(jìn)行分析，用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（ ±S）表示。組間比較采用 t 檢驗(yàn)，以P < 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 小大黃各部位對(duì)高尿酸血癥小鼠UA水平作用

由表1可見(jiàn)，模型組小鼠血清尿酸水平顯著高于正常組血清尿酸水平（P<0.01）；在劑量為0.01 g/kg時(shí)，別嘌呤醇可顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平（P<0.01）；小大黃總提物和水部位低、中、高劑量組均可降低小鼠血清尿酸水平（P<0.05，P<0.01），表明小大黃總提物和水部位具有一定的降尿酸作用。

2.2 小大黃各部位對(duì)高尿酸血癥小鼠肝臟XOD及ADA 作用

由表2可知，別嘌呤醇組0.01 g/kg、小大黃總提物和水部位中、高劑量組均可降低高尿酸血癥小鼠肝XOD 水平（P<0.05，P<0.01），但其抑制程度與其相同劑量組對(duì)血清尿酸的抑制程度并不平行。別嘌呤醇組、小大黃總提物中、高劑量組和水部位中、高劑量組對(duì)模型小鼠肝臟 ADA 活性均有一定抑制活性（P<0.05）。

2.3 小大黃各部位對(duì)高尿酸血癥小鼠Cre與Bun作用

由表3可知，別嘌呤醇組可以顯著地降低高尿酸血癥小鼠Cre水平（P<0.01），但對(duì)Bun無(wú)抑制作用；小大黃總提物、乙酸乙酯部位和水部位均可降低高尿酸血癥小鼠Cre和Bun的水平。

3 討論

痛風(fēng)是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的代謝性疾病，現(xiàn)有治療痛風(fēng)藥物主要有別嘌呤醇、苯溴馬隆等[8]，但由于副作用較多，患者難以長(zhǎng)期服用和耐受[9]，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足臨床需求。因此，亟需開(kāi)發(fā)高效低毒、作用機(jī)制新穎、價(jià)格相對(duì)低廉的抗痛風(fēng)藥物。該研究采用高尿酸血癥模型對(duì)小大黃進(jìn)行降尿酸作用的研究，發(fā)現(xiàn)其總提物和水部位具有一定的降尿酸作用，提示小大黃的有效部位為水部位，但小大黃總提物對(duì)肝臟 XOD 活性的抑制水平與其降尿酸作用并不平行，推測(cè)其降尿酸的作用除抑制XOD活性外還可能存在其他機(jī)制。腎臟在尿酸排泄過(guò)程中起著重要作用，因此高尿酸癥常常伴隨著腎臟功能損害。血肌酐和尿素氮是檢驗(yàn)?zāi)I功能的重要指標(biāo)，可以反映腎小球?yàn)V過(guò)和腎小管重吸收的功能。小大黃水部位的中、高劑量（4.0、8.0 g/kg）可顯著降低高尿酸血癥小鼠肌酐和尿素氮的水平（P<0.01），表明小大黃的水部位還具有保護(hù)腎臟作用。

藏藥小大黃和西伯利亞蓼為藏藥曲瑪孜的代表性基原品種，二者都具有降尿酸的功效，那么二者的藥效物質(zhì)是否相同呢？王洪玲等[10]對(duì)二者揮發(fā)油進(jìn)行比較研究，發(fā)現(xiàn)其化學(xué)成分組成相差較大，因此二者具體藥效物質(zhì)基礎(chǔ)還有待進(jìn)一步的研究。此外，前期研究發(fā)現(xiàn)小大黃中含有蒽醌和二苯乙醇類(lèi)化合物[5，7]，而蒽醌類(lèi)（大黃酸、大黃素）[11]和二苯乙醇類(lèi)（白藜蘆醇）[12]均具有一定的抗痛風(fēng)作用，因此下一步將對(duì)其分離得到的化合物進(jìn)行XOD活性研究，找到其有效成分，為以后藏藥小大黃的開(kāi)發(fā)和利用提供一定的依據(jù)。

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