劉丙艷+鄭越中+隋馨

摘要：目的 建立并提高肝郁調(diào)經(jīng)膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用TLC法對(duì)白芍、牡丹皮進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法測定白芍中芍藥苷的含量。結(jié)果 白芍、牡丹皮薄層色譜斑點(diǎn)清晰、重現(xiàn)性好、陰性無干擾。白芍中芍藥苷的含量測定方法專屬性良好，陰性無干擾。結(jié)論 建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)專屬性強(qiáng)、方法重復(fù)性好，可作為改進(jìn)肝郁調(diào)經(jīng)膏質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：肝郁調(diào)經(jīng)膏；薄層色譜；HPLC

中圖分類號(hào)：R283 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）13-0125-03

肝郁調(diào)經(jīng)膏是衛(wèi)生部《中藥成方》收載的品種，由白芍、佛手、特丹皮等十二味藥材組成，具有疏肝解郁，清肝瀉火、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)功效，主治肝郁所致的月經(jīng)失調(diào)、痛經(jīng)、乳房脹痛、不孕等癥[1-2]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無鑒別、含量測定鑒別方法。為提高產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用TLC分別對(duì)肝郁調(diào)經(jīng)膏中的白芍、牡丹皮進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC法測定肝郁調(diào)經(jīng)膏中芍藥苷的含量。對(duì)肝郁調(diào)經(jīng)膏進(jìn)行全面的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為控制藥品質(zhì)量，保證藥品安全提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

Waters e2695高效液相色譜儀（美國）；Waters 2998紫外檢測器（美國）；AE240型電子天平（北京賽多斯儀器有限公司）；JBT/C-YCL400T/2P（C）超聲波清洗機(jī)（濟(jì)寧金百特電子有限責(zé)任公司）瑞士卡瑪Linomat5半自動(dòng)點(diǎn)樣儀；芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：111736-201535），丹皮酚對(duì)照品（批號(hào)：110708-201506），均購自中國藥品生物制品檢定所。肝郁調(diào)經(jīng)膏（廣西華天寶藥業(yè)有限公司批號(hào)：141102、150301、151203）

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

2.1.1白芍 取本品10 g，加乙醇50 ml，經(jīng)過超聲波20 min左右的處理，通過容器濾凈、蒸干，而將濾凈之后存在的渣滓進(jìn)行溶解使之能夠通過其他液體（正丁醇）進(jìn)行提取，并將提取液分兩次進(jìn)行洗滌，再采用正丁醇蒸干。如果蒸干后存在渣滓，那么則要加入乙醇1 ml進(jìn)行溶解，以此才能作為試劑溶液進(jìn)行使用。同時(shí)，用芍藥苷作為對(duì)照品，在其中計(jì)入乙醇溶液，以此作為對(duì)照品的溶液所應(yīng)用。在照薄層色譜法試驗(yàn)過程中，分別采取上述兩種溶液制劑5 μl，同時(shí)采取三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（見圖1）。

2.1.2牡丹皮 取本品5 g，加乙醚10 ml，研勻，加石油醚（30～60）40 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)颖? ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1 ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（20∶1）為展開劑，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（見圖2）。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件 色譜柱：Agilent Extend C18；（4.6mm×250mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-醋酸-水（35：4：61）；檢驗(yàn)波長：230 nm；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量20 μl；柱溫：30 ℃。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇10 ml，密塞，稱定重量，超聲處理[3]（功率2500 W，頻率50 kHz）30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇[4]補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。進(jìn)樣前經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾。

2.2.3對(duì)照品溶液的制備 取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含35 μg的對(duì)照品溶液，即得。進(jìn)樣前經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾。

2.2.4陰性樣品溶液 在研究中根據(jù)所選定處方的比例對(duì)白芍陰性樣品進(jìn)行制作。在本文研究中以上述“溶液制備”中的程序以及溶液作為試劑，選取20μl作為實(shí)驗(yàn)溶液。按照上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖3，陰性樣品不干擾芍藥苷的測定，芍藥苷與其它成分或雜質(zhì)的分離度大于1.5，陰性供試品溶液在與對(duì)照品峰相應(yīng)處未出現(xiàn)色譜峰。

2.2.5線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液1、2、3、5、7、9 ml，分別置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20 μl，按上述色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，芍藥苷在1.402～12.614 μg內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=15014X-610.08，r=0.9999。

2.2.6精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液20 μl，按“2.2.1”色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，其峰面積RSD為0.39%。

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液20 μl（批號(hào)：091008），分別在0，4，8，12，24 h依次進(jìn)樣，測定其峰面積，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為0.47%。表明供試品溶液在24 h穩(wěn)定。

2.2.8重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為141102的樣品6份，按"2.3"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定，計(jì)算含量，結(jié)果芍藥苷平均含量為0.146 mg/g，RSD為0.95%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.9加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取0.5 g含芍藥苷0.146 mg/g的供試品6份，分別精密加入芍藥苷對(duì)照品溶液2 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備制備供試品溶液，測得芍藥苷含量，計(jì)算回收率，平均回收率為100.8%，RSD=1.22%。

2.2.10樣品含量測定 精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液與供試品溶液（批號(hào)：141102、150301、151203）20μl，按上述色譜條件測定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中芍藥苷含量分別為0.146、0.149、0.157 mg/g。

3 討論

中成藥制劑組成多復(fù)雜，每種藥均發(fā)揮著不可替代的作用，對(duì)其建立專屬性強(qiáng)的鑒別具有重要的意義[5-6]。本研究在原有質(zhì)量標(biāo)中增加白芍、牡丹皮的薄層鑒別，白芍具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)，斂陰止汗，柔肝止痛，平肝抑陽的功效，故試驗(yàn)以白芍中芍藥苷作為含量測定方法的研究對(duì)象。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/成森