王清霖 范博文 祁金威 李東 竇文鵬 王智慧

摘要：以木耳菌株“黑29”為試驗材料，制備木耳液體菌種及固化菌種（1.5%瓊脂固化菌種、2%瓊脂固化菌種）。比較液體菌種和固化菌種萌發(fā)生長速度、菌絲形態(tài)、菌種活力、現(xiàn)耳時間、出耳產(chǎn)量等。結果表明：液體菌種和固化菌種均隨菌種保存時間的延長表現(xiàn)出菌絲生長速度減緩，發(fā)滿菌袋時間加長、出耳時間延遲，產(chǎn)量略有下降。液體菌種保存15d，失活不萌發(fā)，但固化菌種仍然保持較高的活性，可以正常生長、出耳。

關鍵詞：木耳；液體菌種；固化菌種

現(xiàn)今，木耳種植大多數(shù)還停留在家庭小作坊式生產(chǎn)階段，菌種使用是傳統(tǒng)的固體菌種，其菌絲體量少、生長速度慢、活力弱。而液體菌種的特點是菌絲含量高、活力強，成本相對較低，但液體菌種容易染雜菌、難保存，不方便長途運輸，推廣到個人及家庭式木耳生產(chǎn)有一定的困難。本研究旨在對液體菌種進行固化處理，探討液體菌種和固化菌種的特性及出耳情況，為家庭小作坊種植生產(chǎn)的菇農(nóng)提供優(yōu)質(zhì)的新型的木耳菌種。

1材料和方法

1.1試驗材料

菌種：“黑29”黑木耳菌種，由黑龍江省科學院微生物研究所菌種保藏中心提供。

1.2菌種制備方法

木耳液體菌種的制備：配置木耳液體菌種培養(yǎng)基（配方：葡萄糖3%、麥麩汁8%、KH₂P0₄0.1%、MgSO₄0.15%、土豆汁20%、VB₁0.01%），按培養(yǎng)基配方稱取土豆，去皮，將土豆切成小塊放入鍋中，加水，在加熱器上加熱至沸騰，維持20～30min，待土豆酥而不爛時，可用4層紗布趁熱在量杯上過濾，棄去濾渣，得到土豆汁。將稱取好的麥麩加水，煮至沸騰狀態(tài)，持續(xù)20min，用4層紗布趁熱在量杯上過濾數(shù)次，棄去濾渣，得到麥麩汁，將土豆汁與麥麩汁混合，加入葡萄糖、KH₂P0₄、MgS0₄、VB₁，補充水分至所需量。分裝至250mL錐形瓶中，每瓶裝至1/3，用封口膜封好，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染，并保證有良好的通氣性能。再放入121℃滅菌20min后取出，冷卻后放人無菌操作臺中接菌。液體培養(yǎng)基接種完成后，將錐形瓶放置在pH值5.0～6.0，轉速140r/min，溫度25cc的搖床中進行培養(yǎng)，7d左右木耳液體菌種制備完成。

木耳固化菌種的制備：將不同含量的瓊脂粉加入到無菌水中，滅菌后制得瓊脂濃度為1.5%、2%的熱瓊脂溶液。當瓊脂溶液冷卻到38℃左右，將培養(yǎng)好的木耳液體菌種，通過過濾得到菌絲球，然后分別加入到不同比例的瓊脂溶液中，制得木耳固化菌種。

1.3試驗設計

以常規(guī)液體菌種作為對照，以制得濃度為1.5%瓊脂和2%瓊脂固化劑菌種為處理。菌種分別放置0d、7d、15d。具體處理見表1，共9個處理，每處理3次重復。栽培袋料配方為木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%。在25℃培養(yǎng)室中避光培養(yǎng)，濕度60%左右，按常規(guī)方法進行出耳管理。

1.4測定項目

觀察菌種萌發(fā)時間、菌絲生長速度、菌絲形態(tài)、菌種的活力、現(xiàn)耳時間、出耳產(chǎn)量。

2結果分析

2.1不同處理對木耳菌種發(fā)滿天數(shù)、菌絲日增長速度、菌絲形態(tài)的影響

由表1可知，液體菌種和固化菌種均隨著菌種保存時間的延長表現(xiàn)出菌絲生長速度減緩、發(fā)滿時間加長，菌絲形態(tài)減弱。這說明菌種存放時間長對菌絲的萌發(fā)及生長有一定抑制。比較存放0d和7d的菌種發(fā)現(xiàn)，液體菌種T0-1和T7-1較固化菌種T0-2、T0-3和T7-2、T7-3的萌發(fā)及菌絲生長速度慢，且T0-2

2.2不同處理對木耳現(xiàn)耳時間、耳片顏色、形態(tài)的影響

由表2可知，比較保存相同時間（0d、7d）的菌種，發(fā)現(xiàn)液體菌種的出耳時間較快。菌種保存0d，液體菌種6.07d現(xiàn)耳，較2%瓊脂固化劑菌種的出耳速度快1倍；菌種保存7d后，液體菌種7.13d現(xiàn)耳，也較固化劑菌種出耳速度快；菌種保存15d，液體菌種失活，無法出耳，但固化劑菌種仍表現(xiàn)出較好的出耳情況。隨著菌種保存時間的加長，液體菌種和固化菌種的出耳時間都延遲，這可能是由于菌種長時間存放導致活性降低，進而導致出耳較慢。比較2個固化劑菌種發(fā)現(xiàn)，1.5%瓊脂固化菌種的出耳時間早于2%瓊脂固化劑菌種出耳。

2.3不同處理對木耳現(xiàn)耳時間、耳片顏色、形態(tài)的影響

由圖1可知，隨著菌種保存時間的延長，木耳產(chǎn)量略有下降，但不明顯。木耳液體菌種保存0d時，T0-2產(chǎn)量略高；液體菌種保存7d木耳產(chǎn)量T7-1較高。這說明液體菌種和固化菌種對木耳產(chǎn)量無顯著的影響，菌種的形態(tài)對產(chǎn)量影響較弱。

3結論

研究表明，液體菌種和固化菌種均隨菌種保存時間的延長表現(xiàn)出菌絲生長速度減緩，發(fā)滿時間加長，菌絲形態(tài)減弱，出耳時間延遲，產(chǎn)量略有下降；且液體菌種保存15d，已基本失活，菌絲不再萌發(fā)出耳，但固化菌種仍然保持較高的活性，可以正常生長出耳。因此液體菌種的固化不僅可以保證菌絲的正常生長及出耳產(chǎn)量，同時可以延長菌種保存時間，方便長途運輸使用。

研究還發(fā)現(xiàn)，2%瓊脂固化菌種的萌發(fā)速度和菌絲生長情況略好于1.5%瓊脂固化劑菌種。但1.5%瓊脂固化菌種的出耳時間較2%瓊脂固化劑菌種早，且木耳產(chǎn)量高。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因及機理還有待進一步研究。