蔣秋香柳州食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 柳州 545006

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文獻(xiàn)綜述

丹七片的研究進(jìn)展

蔣秋香
柳州食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 柳州 545006

丹七片具有活血化瘀、通脈止痛的功效，是活血化瘀類藥物的代表藥，臨床應(yīng)用廣泛，其質(zhì)量關(guān)系到用藥的安全性和有效性。筆者通過查閱中國知網(wǎng)、萬方及維普等數(shù)據(jù)庫，對(duì)2001～2015年涉及丹七片的制備工藝、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、含量測(cè)定、指紋圖譜、藥理作用及臨床應(yīng)用等方面的36篇文獻(xiàn)進(jìn)行分析、歸納和整理，以期為丹七片的質(zhì)量評(píng)價(jià)及開發(fā)應(yīng)用提供參考和依據(jù)。

丹七片；鑒別；含量測(cè)定；指紋圖譜；藥理作用；研究進(jìn)展

丹七片由丹參和三七兩味中藥組成，具有活血化瘀、通脈止痛的功效，用于瘀血閉阻所致的胸痹心痛、眩暈頭痛、經(jīng)期腹痛。其制法是將三七粉碎成細(xì)粉，丹參經(jīng)水煮、濾過、濃縮、加入三七細(xì)粉及淀粉、糊精，壓片，包衣即得?，F(xiàn)行版質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是《中國藥典》2015年版一部[1]，其中規(guī)定了丹七片的處方、制法、性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定、功能與主治、用法與用量、注意、規(guī)格和貯藏。目前國內(nèi)有41個(gè)不同的廠家生產(chǎn)丹七片，涉及的地域?qū)拸V，原料藥材來源和品種多樣化。為了更好地控制丹七片的質(zhì)量，為臨床合理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，筆者對(duì)丹七片的質(zhì)量研究、藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)行綜述，為丹七片質(zhì)量評(píng)價(jià)研究及臨床用藥安全提供參考。

1 制備工藝

《中國藥典》收載的丹七片由丹參和三七組成：丹參通過水煎煮，濾液濃縮，再加入三七細(xì)粉，混勻，干燥，壓片。丹參的主要活性成分有水溶性的丹酚酸類化合物及脂溶性的丹參酮類化合物，其中丹酚酸B在丹參根中含量最高[2]，水提轉(zhuǎn)化率較高，但是脂溶性成分提取不充分。岳國超等[3]將丹七片的工藝進(jìn)行了改進(jìn)：將丹參分別用90%乙醇6倍量提取1h、4倍量提取0.5h，濃縮之后加三七細(xì)粉，混勻，干燥，壓片。按高效液相色譜法，對(duì)原工藝和改進(jìn)后工藝生產(chǎn)的各3批丹七片進(jìn)行丹參酮IIA含量的測(cè)定，結(jié)果顯示，改進(jìn)工藝后，丹參酮IIA的含量較原工藝提高了4.1～5.2倍。制粒過程在片劑的制備工藝中是非常關(guān)鍵的步驟，因中藥成分非常復(fù)雜，浸膏中除有效成分外，還有淀粉、糖類、黏液質(zhì)、蛋白質(zhì)等，這些物質(zhì)多具有一定的粘性，給制粒帶來影響。韓超等[4]應(yīng)用流化床制粒技術(shù)，改善顆粒的溶解度、孔隙率、比表面積，降低能耗、減少物料損失，提高處方中不穩(wěn)定成分的穩(wěn)定性，并通過正交試驗(yàn)法，篩選丹七片流化床制粒工藝參數(shù)，形成最佳制粒工藝。丹七片壓片后，可包糖衣或薄膜衣，按照傳統(tǒng)的包糖衣技術(shù)，各個(gè)批次之間的包衣厚度、色澤等差異較大。肖晏嬰等[5]改進(jìn)包糖衣工藝，使包衣工序的每個(gè)操作環(huán)節(jié)都有量化標(biāo)準(zhǔn)：粉衣層包15層，糖衣層8層，有色糖衣層8層，從而保證該制劑質(zhì)量均一，外形美觀。

2 定性鑒別

2.1 顯微鑒別 根據(jù)《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》[6]規(guī)定，鑒別丹七片中三七的方法為顯微鑒別，其鑒別主要對(duì)象為淀粉粒。2010年版藥典[7]將顯微特征鑒別對(duì)象定為含黃色分泌物的三七樹脂道碎片。現(xiàn)行版藥典[1]規(guī)定的顯微鑒別也是三七樹脂道碎片。

2.2 薄層色譜鑒別 在已有的研究丹七片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)報(bào)道中[8-12]，薄層色譜鑒別法作為主要的鑒別方法被采用。其中三七的有效成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1作為主要的鑒別對(duì)象，通過“取樣品，加水1mL，攪勻，再加以水飽和的正丁醇8mL，密塞，振搖10min，放置2h，離心，取上清液，加正丁醇飽和的水25mL，搖勻，取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液”等步驟提取，薄層板為硅膠G板，展開劑有正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)的上層溶液[9]、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶23∶10)在10℃以下放置的下層溶液[10]、1,2-二氯甲烷-正丁醇-甲醇-水(6∶8∶3∶5)的下層溶液(薄層色譜圖見圖1)[11]等。也有研究者[12]通過“取樣品，加甲醇30mL，超聲處理45min，濾過，濾液蒸干， 殘?jiān)铀?0mL溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值約為2，用醋酸乙酯20mL振搖提取，棄去醋酸乙酯液，水層以水飽和正丁醇萃取2次，每次30mL，合并正丁醇液，再用氨試液40mL洗滌，分取正丁醇液，以水40mL洗滌2次，棄去水液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液”提取，展開劑為氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置12h的下層溶液。顯色劑為10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈下檢視，在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)和熒光斑點(diǎn)。對(duì)于丹參的鑒別方法相對(duì)較少，馮彬彬等[10]用以下方法提取：取樣品，加水20mL，超聲處理20min，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3～4，用乙醚提取3次，每次20mL，合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，揮干，殘?jiān)訜o水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液，丹參對(duì)照藥材做同樣處理。薄層板使用硅膠GF254板，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)為展開劑，于紫外光254nm下檢視，在與丹參對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。另有鑒別丹參水溶性成分丹酚酸B的報(bào)道[11]，用70%乙醇超聲處理提取之后，濾過，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙?，跟丹酚酸B對(duì)照品點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-水-甲酸(14∶2∶3)的上層溶液展開，噴以1%三氯化鐵溶液與1%鐵氰化鉀溶液的等量混合溶液，在與丹酚酸B相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的藍(lán)色斑點(diǎn)(薄層色譜圖見圖2)。2015年版藥典[1]鑒別(2)項(xiàng)下規(guī)定，鑒別丹酚酸B的提取方法為70%乙醇超聲提取之后，濾過，濃縮，作為供試品溶液，其薄層板、展開系統(tǒng)和顯色劑與上述鑒別丹參水溶性成分丹酚酸B的報(bào)道相同。

3 含量測(cè)定

3.1 三七 三七為五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen 的干燥根和根莖[1]，其成分復(fù)雜多樣，目前已確定的成分有百余種，其中有效成分以皂苷類和三七素類為主[13]。三七作為丹七片的一味主藥，現(xiàn)行版質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]規(guī)定，將丹七片樣品用50%甲醇超聲提取30min，按高效液相色譜法試驗(yàn)，在203nm波長下，以乙腈-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，測(cè)定三七的有效成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的總量，每片不得少于12.0mg。梁少強(qiáng)等[11]進(jìn)行的丹七片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中，三七的主要成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1作為研究的目標(biāo)成分，用50%甲醇超聲提取，使用高效液相色譜法，檢測(cè)波長為203nm，以乙腈-水為流動(dòng)相梯度洗脫分離，測(cè)定(高效液相色譜圖見圖3)。孫英英等[14]也采用50%甲醇超聲提取的方法，以乙腈-水為流動(dòng)相，使用超高效液相色譜法分離測(cè)定丹七片中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1，此方法能在6分鐘內(nèi)將三種待測(cè)成分完全分離。蔡向陽等[15]采用“取樣品，精密加入水飽和的正丁醇50mL,密塞,稱定重量,超聲處理30min,放冷,稱定重量,用水飽和的正丁醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液10mL,置分液漏斗中,加氨試液洗滌2次,每次10mL,取正丁醇液,蒸干,殘?jiān)蛹状际谷芙?轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得?！碧崛〉て咂械娜咴碥誖1和人參皂苷Rg1，以乙腈-水-磷酸為流動(dòng)相，對(duì)三七皂苷R1和人參皂苷Rg1進(jìn)行分離測(cè)定。也有進(jìn)行單獨(dú)的人參皂苷Rg1含量的測(cè)定[16-17]，以甲醇-水為流動(dòng)相，將檢測(cè)波長設(shè)為280nm，進(jìn)行測(cè)定。殷召軍[18]采用HPLC-ELSD檢測(cè)丹七片中人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量，用乙腈-水為流動(dòng)相梯度洗脫，漂移管溫度110℃，載氣流速3.0mL/min，也能將人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1進(jìn)行較好的分離檢測(cè)。

3.2 丹參 丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根莖[1]。其化學(xué)成分主要有脂溶性和水溶性成分兩大類。丹七片的現(xiàn)行版質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有丹參的水溶性成分丹酚酸B的薄層色譜鑒別要求，無含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。但是丹酚酸B的含量測(cè)定方法已有文獻(xiàn)報(bào)道，其提取方法多樣：(1)取樣品0.25g，加水10mL溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至1～2，乙酸乙酯萃取3次，每次20mL，合并萃取液并蒸干，殘?jiān)?5%甲醇溶解至10mL，再吸取1mL至10mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度[19]。(2)取樣品0.3g，加50%乙醇25mL，超聲處理30min，過濾，即得[12，20，21]。(3)取樣品0.15g，置25mL量瓶中，加水適量，超聲處理20min，用水定容至刻度，即得[9]。(4)取樣品0.1g，加75%甲醇50mL，加熱回流1h，過濾，即得[10]。但高效液相色譜條件基本一致：流動(dòng)相組成為甲醇-乙腈-甲酸-水，檢測(cè)波長286nm。丹參的水溶性成分除了丹酚酸B外，目前已知的還有丹參素和原兒茶醛[22]，駱秀平等[23]將丹七片樣品經(jīng)過甲醇超聲提取，使用高效液相色譜法，檢測(cè)波長280nm，以甲醇-1.5%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相，分離測(cè)定原兒茶醛。但是梁民琦[24]使用的提取方法跟原兒茶醛的水溶性性質(zhì)更相符：取樣品5g，加水50mL，超聲處理30min，濾過，取濾液25mL，用稀鹽酸調(diào)pH至2.2，用水飽和的醋酸乙酯提取4次(20、20、15、10mL)，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，即得，其使用的流?dòng)相為甲醇-0.2mol·L-1醋酸銨(用HCl調(diào)pH至2.2)，檢測(cè)波長313nm。對(duì)于丹參素的測(cè)定，魏淑萍[25]將樣品用50%乙醇超聲提取30min，使用高效液相色譜法，在280nm波長下，以乙腈-水-磷酸將丹參素分離測(cè)定。而潘鋒[26]將丹七片樣品用10%甲醇溶液超聲提取30min，在高效液相色譜條件下，檢測(cè)波長為281nm，使用甲醇-1%醋酸溶液能將丹參素與原兒茶醛同時(shí)分離檢測(cè)。

4 指紋圖譜研究

鄭文忠等[27]將丹七片樣品經(jīng)75%甲醇超聲處理30min提取后，使用高效液相色譜法，在210nm的波長下檢測(cè)，以乙腈-0.06%磷酸溶液進(jìn)行梯度洗脫，對(duì)10批次的丹七片樣品進(jìn)樣分析，采集色譜圖，建立指紋圖譜，得到10個(gè)共有峰，以“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A)”進(jìn)行相似度計(jì)算，結(jié)果發(fā)現(xiàn)10批次的丹七片相似度均在0.90以上(見圖4)。

5 藥理作用和臨床應(yīng)用

徐懿喬等[28]以家兔和大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，發(fā)現(xiàn)丹七片可明顯抑制由凝血酶和膠原蛋白誘導(dǎo)的血小板聚集，可升高凝血酶作用下的血小板內(nèi)cAMP含量。丹七片作為活血化瘀類藥物的代表在臨床心腦血管疾病治療中應(yīng)用廣泛，郭淑貞等[29]采用心血管系統(tǒng)與人類最為接近的小型豬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，為丹七片干預(yù)心肌缺血的作用機(jī)制闡釋了新的線索與證據(jù)。在有效控制冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展、減輕或消除冠心病病人的臨床癥狀和降低血脂方面，丹七片是一種理想的藥品選擇[30-33]。王玉龍等[34]根據(jù)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和正常WKY大鼠尿液的代謝組學(xué)差異，研究丹七片對(duì)SHR血壓及尿液中差異性代謝物的影響，發(fā)現(xiàn)丹七片可降低SHR血壓，且可通過干預(yù)SHR尿液中與高血壓發(fā)生相關(guān)的差異性代謝物分布狀態(tài)來達(dá)到治療高血壓的作用。此外，在與復(fù)明片聯(lián)合用藥后，對(duì)原發(fā)性開角型青光眼的治療具有更佳的臨床療效，值得臨床推廣應(yīng)用[35-36]。

6 結(jié)語

丹七片具有活血化瘀、通脈止痛的功效，常用于冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、高脂血癥的治療。丹七片中的三七和丹參皆為常用中藥，方中丹參味苦性微寒，善于活血祛瘀、涼血消腫、清心除煩，三七味甘微苦、性溫，功擅活血祛瘀、消腫定痛。藥典收載的丹七片規(guī)定了三七的顯微鑒別，丹酚酸B、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的薄層色譜鑒別，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量測(cè)定，但是，因三七、丹參種質(zhì)資源復(fù)雜，不同地區(qū)采收時(shí)間各異，其他成分的含量也各有不同，僅憑現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制，并不能較好的反映藥材和制劑的品質(zhì)與療效。另外，藥典上規(guī)定的制法工藝要求丹參水煎煮3次，煎液濾過，濃縮之后入藥，與三七細(xì)粉直接入藥相比，其工藝相對(duì)復(fù)雜，這給一些不法廠家有機(jī)可乘，若將丹參直接以細(xì)粉入藥，以現(xiàn)有的定性定量質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，無法判定其制作工藝的合法性。因此，筆者考慮是否能將“異性有機(jī)物”的檢查也納入丹七片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制項(xiàng)目，即除三七原藥材組織外，不得檢出其它植物組織，這也是筆者下一步將繼續(xù)探索的課題。

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蔣秋香(1983-)，女，漢族，本科，在職研究生，主管中藥師，研究方向?yàn)樗幤?、食品、化妝品、保健食品的檢驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：67370082@qq.com

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1007-8517(2017)12-0037-04

2017-04-10 編輯：陶希睿)