紀(jì) 宏，劉 晶，王 威，祁 進(jìn)，劉清華（北京市藥品檢驗(yàn)所生命園實(shí)驗(yàn)室，北京 102206）

UPLC法同時(shí)測(cè)定纈沙坦氫氯噻嗪片中纈沙坦和氫氯噻嗪的含量

紀(jì) 宏＊，劉 晶，王 威#，祁 進(jìn)，劉清華（北京市藥品檢驗(yàn)所生命園實(shí)驗(yàn)室，北京 102206）

目的：建立同時(shí)測(cè)定纈沙坦氫氯噻嗪片中纈沙坦和氫氯噻嗪含量的方法。方法：采用超高效液相色譜法。色譜柱為Phenomenex C18，流動(dòng)相為[0.1%磷酸溶液-乙腈（95∶5，V/V）]-[0.1%磷酸溶液-乙腈（5∶95，V/V）]（梯度洗脫），流速為0.25m L/m in，檢測(cè)波長(zhǎng)為272 nm，柱溫為35℃，進(jìn)樣量為1.5μL。結(jié)果：纈沙坦和氫氯噻嗪檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為8.1～324.2μg/m L（r＝0.999 9）、1.2～50.1μg/m L（r＝0.999 9）；定量限分別為0.24、0.04 ng，檢測(cè)限分別為0.06、0.01 ng；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2.0%；加樣回收率分別為97.69%～100.35%（RSD＝1.03%，n＝9）、98.27%～100.60%（RSD＝0.83%，n＝9）。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于纈沙坦氫氯噻嗪片中纈沙坦和氫氯噻嗪含量的同時(shí)測(cè)定。

超高效液相色譜法；纈沙坦氫氯噻嗪片；纈沙坦；氫氯噻嗪；含量

纈沙坦氫氯噻嗪片（Co-Diovan）是由纈沙坦和氫氯噻嗪組成的復(fù)方制劑，為瑞士諾華公司研發(fā)。該制劑的主要成分纈沙坦屬血管緊張素Ⅱ受體拮抗藥[1-2]，輔助成分氫氯噻嗪則為利尿藥[1-3]，二者可協(xié)同治療單一藥物不能有效控制的輕、中度原發(fā)性高血壓[3-4]。該制劑在強(qiáng)效降壓的同時(shí)還具有保護(hù)心、腦、腎等靶器官的作用[1-4]。目前，2015年版《中國藥典》[5]僅收載了測(cè)定纈沙坦、氫氯噻嗪?jiǎn)我怀煞值闹苿?，未收載復(fù)方制劑；且現(xiàn)有文獻(xiàn)[6-10]測(cè)定纈沙坦氫氯噻嗪復(fù)方制劑含量的方法主要是高效液相色譜法，操作較為煩瑣、耗時(shí)。因此，為更快速、準(zhǔn)確地測(cè)定該復(fù)方制劑中纈沙坦和氫氯噻嗪的含量，筆者采用超高效液相色譜法（UPLC）建立了同時(shí)測(cè)定其中上述兩種成分含量的方法。

1 材料

1.1 儀器

Acquity型UPLC儀，包括二元高壓梯度混合系統(tǒng)、標(biāo)準(zhǔn)型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器和Empower色譜工作站（美國Waters公司）；XT105型電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；SB-25-12D型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司，功率：250W，頻率：40 kHz）；培英DZ-900型振蕩器（太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）。

1.2 藥品與試劑

纈沙坦氫氯噻嗪片（某企業(yè)，批號(hào)：T7038、T7039、T7017，規(guī)格：每片含纈沙坦80mg、氫氯噻嗪12.5mg）；纈沙坦對(duì)照品（歐洲藥典委員會(huì)，批號(hào)：H3409，純度：99.0%）；氫氯噻嗪對(duì)照品（歐洲藥典委員會(huì)，批號(hào)：H3020，純度：99.9%）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex C18（50mm×2.1mm，1.7μm）；流動(dòng)相：[0.1%磷酸溶液-乙腈（95∶5，V/V）]（A）-[0.1%磷酸溶液-乙腈（5∶95，V/V）]（B），采用梯度洗脫（洗脫程序見表1）；流速：0.25m L/m in；檢測(cè)波長(zhǎng)：272 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：1.5μL。

表1 梯度洗脫程序Tab 1 Gradientelution procedure

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱取纈沙坦和氫氯噻嗪對(duì)照品各適量，加50%乙腈溶液溶解制成纈沙坦、氫氯噻嗪質(zhì)量濃度分別為810.5、125.2μg/m L的單一對(duì)照品溶液。取上述單一對(duì)照品溶液各適量，置于同一50m L量瓶中，加50%乙腈溶液溶解制成纈沙坦、氫氯噻嗪質(zhì)量濃度分別為8.00、1.25μg/m L的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于纈沙坦80mg），置于100m L量瓶中，加50%乙腈溶液80m L，超聲處理25 m in，振搖40 min，放冷，加50%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5m L，置于50m L量瓶中，加50%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按樣品的處方比例和制備工藝制備缺纈沙坦和氫氯噻嗪的陰性樣品，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞2.0；理論板數(shù)以纈沙坦峰計(jì)為10 000，以氫氯噻嗪峰計(jì)為35 000，保留時(shí)間分別為2.11、1.12 min。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測(cè)定不干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下纈沙坦、氫氯噻嗪?jiǎn)我粚?duì)照品溶液各0.1、0.2、0.6、1.0、1.4、2.0、4.0m L，置于同一10m L量瓶中，加50%乙腈溶液定容，搖勻，制成系列混合對(duì)照品溶液。精密量取上述系列混合對(duì)照品溶液各1.5μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以纈沙坦和氫氯噻嗪質(zhì)量濃度（x，μg/m L）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得二者回歸方程分別為y＝4 537 410x+5 789.3（r＝0.999 9）、y＝ 23 498 311x－641.40（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，纈沙坦和氫氯噻嗪檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為8.1～324.2、1.2～50.1μg/m L。

圖1 超高效液相色譜圖Fig 1 UPLC chromatograms

2.5 定量限與檢測(cè)限考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得定量限（LOQ）；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得檢測(cè)限（LOD）。結(jié)果，纈沙坦和氫氯噻嗪的LOQ分別為0.24、0.04 ng，LOD分別為0.06、0.01 ng。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，纈沙坦和氫氯噻嗪峰面積的RSD分別為0.27%、0.29%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取同一供試品溶液（批號(hào)：T7038）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，纈沙坦和氫氯噻嗪峰面積的RSD分別為0.42%、0.67%（n＝5），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：T7038）適量，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，纈沙坦和氫氯噻嗪的平均含量分別為95.30%和97.69%，RSD分別為0.97%、1.06%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（批號(hào)：T7039）適量，共9份，各置于50m L量瓶中，分別加入低、中、高質(zhì)量的纈沙坦、氫氯噻嗪對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2 Resultsof recovery tests（n＝9）

2.10 樣品含量測(cè)定

取3批樣品各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算纈沙坦和氫氯噻嗪的含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3，%）Tab 3 Results of content determination of samples（n＝3，%）

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別取“2.2.1”項(xiàng)下纈沙坦、氫氯噻嗪的單一對(duì)照品溶液各適量，在210～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，纈沙坦在250 nm波長(zhǎng)處、氫氯噻嗪在272 nm和323 nm波長(zhǎng)處有較強(qiáng)吸收。因此，為使色譜基線平穩(wěn)，干擾少，吸收峰更強(qiáng)，同時(shí)兼顧兩種成分的測(cè)定，選擇272 nm作為本試驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 柱溫的選擇

本試驗(yàn)考察了不同柱溫（15、25、35℃）對(duì)色譜峰分離的影響。結(jié)果，以35℃時(shí)的分離度最好，洗脫時(shí)間最短。因此，綜合考慮色譜柱的使用情況等因素，最終本試驗(yàn)將柱溫定為35℃。

3.3 溶劑的選擇

本試驗(yàn)的溶劑先后考察了甲醇、乙腈、流動(dòng)相等，結(jié)果采用乙腈的溶解性最好，對(duì)色譜柱的損傷也較小，且相對(duì)節(jié)約成本；同時(shí)，還考察了不同體積分?jǐn)?shù)（25%、50%、75%）乙腈的溶解效果，結(jié)果采用50%乙腈溶液為溶劑時(shí)樣品可以溶解完全。因此，本試驗(yàn)最終選擇50%乙腈溶液為溶劑。

綜上所述，本方法操作簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于纈沙坦氫氯噻嗪片中纈沙坦和氫氯噻嗪含量的同時(shí)測(cè)定。

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（編輯：劉 柳）

Simultaneous Determ ination of Valsartan and Hydrochlorothiazide in Valsartan Hydrochlorothiazide Tablets by UPLC

JIHong，LIU Jing，WANGWei，QIJin，LIU Qinghua（Shengm ingyuan Laboratory，Beijing Institute for Drug Control，Beijing 102206，China）

OBJECTIVE：To establish amethod for simultaneous determ ination of valsartan and hydrochlorothiazide in Valsartan hydrochlorothiazide tablets.METHODS：UPLC was adopted.The determ ination was performed on Phenomenex C18column w ith mobile phase consisted of[0.1%phosphoric acid solution-acetonitrile（95∶5，V/V）]-[0.1%phosphoric acid solution-acetonitrile（5∶95，V/V）]（gradient elution）at the flow rate of 0.25m L/min.The detection wavelength was set at 272 nm，and the column temperature was 35℃.The sample size was 1.5μL.RESULTS：The linear range were 8.1-324.2μg/m L for valsartan（r＝0.999 9）and 1.2-50.1μg/m L for hydrochlorothiazide（r＝0.999 9）.The limits of quantitation were 0.24，0.04 ng，and the limits of detection were 0.06，0.01 ng.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were less than 2.0%；recoveries were 97.69%-100.35%for valsartan（RSD＝1.03%，n＝9）and 98.27%-100.60%for hydrochlorothiazide（RSD＝0.83%，n＝9）.CONCLUSIONS：Themethod is simple，rapid and accurate，and can be used for the simultaneous determination of valsartan and hydrochlorothiazide in Valsartan hydrochlorothiazide tablets.

UPLC；Valsartan hydrochlorothiazide tablet；Valsartan；Hydrochlorothiazide；Content

R927.2

A

1001-0408（2017）15-2131-03

2016-05-31

2017-03-01）

＊副主任藥師，碩士。研究方向：藥物質(zhì)量控制分析。電話：010-51159668。E-mail：jihong@bidc.org.cn

#通信作者：副主任藥師，碩士。研究方向：藥物質(zhì)量控制分析。電話：010-51159668。E-mail：wangwei@bidc.org.cn

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.15.32