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(寧波大學(xué)食品科學(xué)與工程系,浙江寧波 315211)
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響應(yīng)面法優(yōu)化莧紅素提取工藝及其抗氧化性
熊茜,王春幸,孫朦,王凱凱,宋佳敏,許鳳*,王鴻飛
(寧波大學(xué)食品科學(xué)與工程系,浙江寧波 315211)
彩莧,莧紅素,響應(yīng)面優(yōu)化法,抗氧化性
莧菜又名米莧、赤莧、彩莧、青香莧、雁來(lái)紅等,系莧科莧屬一年生植物莧的莖葉。莧菜按其顏色分為紅莧、綠莧和彩莧三種,在我國(guó)南北各地均有栽培,是夏季的主要蔬菜之一[1]。隨著人們消費(fèi)觀念的變化,在滿足蔬菜產(chǎn)品數(shù)量的同時(shí),開(kāi)始追求產(chǎn)品的內(nèi)在營(yíng)養(yǎng)、保健食療價(jià)值,要求無(wú)污染、食用安全、方便等[2]。莧菜營(yíng)養(yǎng)豐富,是一種十分優(yōu)良的菜、糧、藥兼用作物。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究表明,莧菜含有礦物質(zhì)元素鋅、鈣、鉀、鈉等;維生素C、維生素E和維生素K以及18種氨基酸等,其中包括人體必需的8種氨基酸[3-4]。
莧菜中所含的莧紅素是一種易溶于水的含氮有機(jī)物[5],它不同于花青素,屬于甜菜素類中甜菜紅素亞型的生物色素[6]。莧紅素色澤鮮艷,安全無(wú)毒,是天然的食用色素,具有預(yù)防心血管疾病和某些癌癥、保護(hù)視力、抗氧化、抗衰老、抗?jié)?、抗炎等生理和藥理作用[7-8]。目前,合成色素莧菜紅廣泛用于食品、飲料、藥品、化妝品、煙草、飼料、食品包裝材料等的著色[9],以天然莧紅素取代合成色素,因其更符合現(xiàn)代消費(fèi)者的消費(fèi)需求,并具有廣闊的市場(chǎng)前景。劉德良[10]以2%鹽酸作為提取溶劑提取紅莧草中的莧紅素,廖芙蓉[11]等以籽粒莧花穗為原料,采用超聲波輔助提取法,以10%乙醇作為溶劑提取其色素。
生物體內(nèi)自由基種類繁多,以活性氧為主?;钚匝踝杂苫?Reactive Oxygen Species,ROS)會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)損傷、酶失活、膜脂過(guò)氧化等,從而引起機(jī)體衰老,誘發(fā)腫瘤等惡性疾病。尋找適當(dāng)?shù)耐庠葱钥寡趸瘎?清除體內(nèi)的自由基,對(duì)保持自由基穩(wěn)衡性動(dòng)態(tài),治療疾病和保護(hù)人體健康很有益處。有研究表明,野莧菜具有潛在的抗氧化活性[12-15]。本文以市售蔬菜彩莧為原料,采用響應(yīng)面法優(yōu)化莧紅素的提取工藝,并在前人研究的基礎(chǔ)上,對(duì)其抗氧化性開(kāi)展進(jìn)一步的研究,為天然莧紅素的充分利用提供理論依據(jù)。
1.1材料與儀器
彩莧 購(gòu)于寧波莊市菜市場(chǎng),選取新鮮、無(wú)病蟲(chóng)害的葉片進(jìn)行實(shí)驗(yàn);乙醇、鹽酸等 均為分析純;甜菜苷紅色素標(biāo)準(zhǔn)品(純度 ≥ 99%)、2,4,6-三吡啶基三嗪(TPTZ)、硫酸亞鐵、1,1-二硝基苦基苯肼(DPPH)、鄰菲羅啉、鄰苯三酚 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
754型紫外分光光度計(jì) 上海美譜達(dá)科技有限公司;GL-16G-Ⅱ型離心機(jī) 湖南長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司;水浴鍋、烘箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;PHS-3C型pH計(jì) 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司。
1.2實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 原料制備 將買(mǎi)來(lái)的彩莧去根,保留地上的部分,洗凈,瀝干表面水分后,50 ℃烘干,粉碎后過(guò)60目篩,保存于干燥避光處備用[16]。精確稱取1.0 g干燥的莧菜粉于燒杯中,加入蒸餾水40 mL,置于30 ℃的水浴鍋中浸提1 h后對(duì)其進(jìn)行抽濾,得到的濾液即為莧紅素提取液。
1.2.2 確定最大吸收波長(zhǎng) 將提取出的莧紅素濾液用蒸餾水定容至100 mL,倒入光徑1 cm的比色皿中,用可見(jiàn)分光光度計(jì)在400~700 nm的波長(zhǎng)下進(jìn)行波長(zhǎng)掃描,確定其最大吸收光譜[17]。
1.2.3 莧紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定及得率的計(jì)算方法 稱取甜菜苷紅色素標(biāo)準(zhǔn)樣品0.2000 g,用水溶解定容至1000 mL,搖勻得濃度為0.20 mg/mL的莧紅素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,加水配制成濃度分別為0、4、8、12、16、20 μg/mL的溶液,于最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度值。以溶液濃度為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo),繪制甜菜苷紅色素的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖[18]。莧紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.0103X-0.0011,R2=0.9996。
莧紅素得率(%)=莧紅素含量/莧菜粉的質(zhì)量×100
式(1)
其中,莧紅素含量根據(jù)莧紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到。
1.2.4 提取溶劑種類對(duì)莧紅素提取效果的影響 在提取溫度為40 ℃,提取時(shí)間為30 min,料液比為1∶30的條件下,分別采用水、無(wú)水乙醇、50%乙醇、pH 6.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、2%鹽酸作為提取劑進(jìn)行提取??疾觳煌軇?duì)莧紅素提取效果的影響,從而確定最合適的提取劑。
1.2.5 莧紅素提取的單因素實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化 實(shí)驗(yàn)選擇料液比、提取時(shí)間、提取溫度作為莧紅素提取效果的主要影響因素,以莧紅素得率為考察指標(biāo),進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。
準(zhǔn)確稱取6份1 g干燥的莧菜粉,分別加入10、20、30、40、50、60 mL提取劑進(jìn)行提取,在40 ℃水浴鍋中放置30 min后抽濾,取一定量濾液高速(10000 r/min)冷凍離心10 min,得到的上清液用水稀釋后于538 nm處測(cè)定吸光度值。
準(zhǔn)確稱取6份1 g莧菜粉,加入40 mL提取劑進(jìn)行提取,在溫度為40 ℃的水浴鍋中分別放置10、30、50、70、90、110 min后,進(jìn)行以上相同的處理,于538 nm處測(cè)定吸光度值。
準(zhǔn)確稱取6份1 g莧菜粉,加入40 mL提取劑進(jìn)行提取,分別在溫度為20、30、40、50、60、70 ℃的水浴鍋中浸提50 min后,進(jìn)行以上相同的處理,于538 nm處測(cè)定吸光度值。
1.2.6 響應(yīng)面法優(yōu)化莧紅素提取工藝 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,以提取時(shí)間(A)、提取溫度(B)、料液比(C)為實(shí)驗(yàn)因素,以莧紅素得率作為響應(yīng)值,進(jìn)行Box-Benhnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),實(shí)驗(yàn)因素水平及編碼見(jiàn)表1。
表1 Box-Benhnken響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 1 The factors and levels table of Box-Benhnken experiment
1.2.7 莧紅素抗氧化性的研究
1.2.7.1 莧紅素總抗氧化能力的測(cè)定 本實(shí)驗(yàn)參照[19-20]的方法,采用FRAP法對(duì)莧紅素的總抗氧化能力進(jìn)行測(cè)定。
還原力標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:分別取 0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mmol/L的FeSO4溶液3 mL,加入3 mL FRAP工作液,混勻后于37 ℃反應(yīng)10 min,于593 nm處測(cè)定吸光度值。以FeSO4溶液的濃度為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣品總抗氧化能力的測(cè)定:在最優(yōu)條件下提取出莧紅素溶液,并將其稀釋成濃度分別為0.07、0.08、0.09、0.10、0.12、0.15、0.20 mg/g的待測(cè)液,同時(shí)配制相同濃度VC溶液作為對(duì)照,按照繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測(cè)定吸光度值,抗氧化化活性以相同吸光度值的FeSO4溶液來(lái)表示。
1.2.7.2 莧紅素清除DPPH自由基能力的測(cè)定 莧紅素清除DPPH自由基能力的測(cè)定方法參照董迪迪等[21]的方法有所改動(dòng)。將提取出的莧紅素稀釋成濃度分別為0.10、0.14、0.18、0.27、0.34、0.45、0.55、0.68 mg/g的溶液(同時(shí)配制相同濃度的VC溶液)。向試管中加入樣品液1 mL及0.02 mmol/L DPPH溶液2 mL,混合均勻后于暗處?kù)o置30 min,乙醇做參比,在517 nm處測(cè)定吸光度值A(chǔ)2;同樣的操作,用等體積的蒸餾水代替樣品液,測(cè)定吸光度值A(chǔ)0;不加DPPH,用等體積乙醇代替,分別加入1 mL不同濃度的樣品液,同法操作測(cè)定吸光度值A(chǔ)1,按以下公式計(jì)算清除率:
式(2)
1.2.7.3 莧紅素清除羥基自由基能力的測(cè)定 本實(shí)驗(yàn)采用Feton法中的分光光度法測(cè)定莧紅素清除羥基自由基的能力[17]。將提取出的莧紅素稀釋成濃度分別為0.01、0.03、0.05、0.07、0.09、0.10 mg/g的溶液(同時(shí)配制相同濃度的VC溶液)。試管中依次加入2 mL pH7.4 PBS緩沖液、1 mL 0.75 mmol/L鄰菲羅啉溶液、1 mL 0.75 mmol/L FeSO4溶液、1.5 mL樣品液、0.5 mL 0.01%雙氧水,混合均勻后于536 nm測(cè)定吸光度值A(chǔ)2;用等體積的蒸餾水代替樣品液和雙氧水,相同的方法測(cè)定吸光度值A(chǔ)0;不加樣品液,用等體積的蒸餾水代替,測(cè)定吸光度值A(chǔ)1,按以下公式計(jì)算清除率:
式(3)
1.2.7.4 莧紅素清除超氧陰離子自由基能力的測(cè)定 本實(shí)驗(yàn)采用鄰苯三酚的自氧化作用建立超氧陰離子體系。
鄰苯三酚自氧化速率的測(cè)定[22]:在試管中加入4.5 mL 50 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH8.2,在37 ℃水浴鍋中預(yù)熱20 min)和4 mL蒸餾水,混勻后于37 ℃水浴鍋中保溫20 min后取出,立即加入0.5 mL已在37 ℃條件下預(yù)熱的3 mmol/L鄰苯三酚溶液,反應(yīng)1 min后,迅速倒入比色皿中,以10 mmol/L HCl溶液配制空白管作為對(duì)照,325 nm處每隔30 s測(cè)其吸光度。以時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo)線性回歸,其斜率為鄰苯三酚自氧化的反應(yīng)速率(V0)。
樣品清除超氧陰離子自由基能力的測(cè)定[23]:將提取出的莧紅素稀釋成不同濃度分別為0.14、0.17、0.20、0.35、0.5、0.7 mg/g的溶液(同時(shí)配制相同濃度的VC溶液),按上述步驟,在加入鄰苯三酚之前加入4 mL不同濃度的待測(cè)液代替蒸餾水。于325 nm處每隔30 s測(cè)定吸光度值,按相同的方法線性回歸,曲線斜率記為V1。按以下公式計(jì)算抑制率:
式(4)
1.3數(shù)據(jù)處理
樣品取樣3次,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。數(shù)據(jù)均取3次重復(fù)的平均值,采用IBM SPSS V 19.0軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),平均值的差異性用單因素方差分析(one-way ANOVA)中的Duncan’s檢驗(yàn),p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。使用Origin 8.0軟件作圖。
2.1提取溶劑種類對(duì)莧紅素提取效果的影響
圖1反映了不同提取溶劑對(duì)莧紅素得率的影響,從圖中可以看出,5種提取劑對(duì)莧紅素得率依次為:50%乙醇>水>pH 6.0緩沖液>無(wú)水乙醇>2%鹽酸。但由于莧菜葉片中的葉綠素能夠溶于50%的乙醇中,而且葉綠素a的最大吸收光的波長(zhǎng)在420~663 nm,葉綠素b的最大吸收波長(zhǎng)范圍在460~645 nm[24],會(huì)對(duì)莧紅素的測(cè)定產(chǎn)生一定影響,綜合考慮,選擇水作為莧紅素的提取劑。
圖1 不同提取劑對(duì)莧紅素提取效果的影響Fig.1 Effect of different solvent on extraction of amaranthin注:不同字母表示差異性顯著。
2.2單因素實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化
2.2.1 料液比對(duì)莧紅素提取效果的影響 由圖2可知,增加料液比可以顯著提高莧紅素得率,提高提取效果,當(dāng)料液比達(dá)到1∶40時(shí),莧紅素已基本溶出,繼續(xù)增大料液比,不但會(huì)增加溶劑的用量,而且會(huì)增大去除溶劑所需負(fù)荷,因此,從莧紅素得率和節(jié)約成本兩方面考慮,確定料液比為1∶40。
圖2 不同料液比對(duì)莧紅素提取效果的影響Fig.2 Effect of different solid-liquid ratio on extraction of amaranthin
2.2.2 提取時(shí)間對(duì)莧紅素提取效果的影響 由圖3可以看出,隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),莧紅素得率逐漸增多,在50 min時(shí)達(dá)到峰值,超過(guò)50 min后,莧紅素得率開(kāi)始下降,可能是因?yàn)椴糠稚卦谔崛〉倪^(guò)程中被分解,因此,莧紅素得率的提取時(shí)間應(yīng)控制在50 min左右為宜。
圖3 不同提取時(shí)間對(duì)莧紅素提取效果的影響Fig.3 Effect of different time on extraction of amaranthin
2.2.3 提取溫度對(duì)莧紅素提取效果的影響 圖4反映出提取溫度對(duì)莧紅素得率的影響,當(dāng)溫度低于30 ℃時(shí),莧紅素得率隨提取溫度的升高而平緩增大,但當(dāng)溫度超過(guò)30 ℃時(shí),隨溫度的升高莧紅素得率呈下降的趨勢(shì),溫度超過(guò)50 ℃時(shí),由于色素?zé)岱€(wěn)定性較差,在高溫下產(chǎn)生分解而導(dǎo)致莧紅素得率急劇下降。因此,莧紅素的提取溫度宜控制在30 ℃以下。
表3 回歸模型的方差及顯著性分析Table 3 Regression model of variance and significant analysis
圖4 不同提取溫度對(duì)莧紅素提取效果的影響Fig.4 Effect of different temperature on extraction of amaranthin
注:*:差異顯著,p<0.05;**:差異極顯著,p<0.01。2.3響應(yīng)面法優(yōu)化莧紅素得率提取工藝
2.3.1 響應(yīng)面分析優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 表2中實(shí)驗(yàn)共17組,其中12組為析因?qū)嶒?yàn),其余5組為中心實(shí)驗(yàn),用于實(shí)驗(yàn)誤差的估計(jì),采用Design Expert軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析,得到莧紅素得率關(guān)于提取時(shí)間(A),提取溫度(B)和料液比(C)等因素的二次多項(xiàng)回歸方程:
莧紅素得率Y=-0.32871+0.073608A+0.087521B+0.011324C-2.0712×10-4AB-3.3333×10-4AC-3.68933×10-4BC-5.72493×10-4A2-9.96441×10-4B2+2.17149×10-4C2
表2 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 Experimental design and results of optimizing test with response surface method
2.3.3 響應(yīng)面的曲面分析 將提取時(shí)間,提取溫度、料液比3個(gè)參數(shù)分別固定,莧紅素得率隨其余兩個(gè)參數(shù)變化趨勢(shì)如圖5~圖7所示。響應(yīng)面中等高圖直觀地反映出各因素交互作用對(duì)響應(yīng)值的影響,圓形表示二因素交互作用不顯著,橢圓表示二因素交互作用顯著[25]。
圖5 提取時(shí)間和提取溫度的響應(yīng)曲面圖Fig.5 Response surface plot of extraction time and extraction temperature
圖6 提取時(shí)間和料液比的響應(yīng)曲面圖 Fig.6 Response surface plot of extraction time and solid-liquid ratio
圖7 提取溫度和料液比的響應(yīng)曲面圖Fig.7 Response surface plot of extraction temperature and solid-liquid ratio
提取溫度和提取時(shí)間對(duì)提取出的莧紅素得率呈近似橢圓形(圖5),說(shuō)明兩者之間有交互作用,當(dāng)提取時(shí)間一定時(shí),莧紅素得率隨提取溫度的升高呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢(shì),在溫度為30~35 ℃的范圍內(nèi)莧紅素得率較好。當(dāng)提取溫度一定時(shí),提取出的莧紅素的量隨提取時(shí)間的變化較小。而從圖6、圖7中的等高線可以看出,提取時(shí)間和料液比之間或者提取溫度和料液比之間交互作用較小,可能是料液比在該實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)對(duì)莧紅素得率影響較小。
通過(guò)回歸模型的分析,可以確定莧紅素得率的最佳工藝條件為提取溫度為30.06 ℃、提取時(shí)間為44.34 min、料液比為1∶50。在此條件下,模型預(yù)測(cè)提取出的莧紅素得率為3.08 mg/g。為方便實(shí)際操作,將工藝條件修正為溫度為30 ℃、時(shí)間為44 min、料液比為1∶50。為檢驗(yàn)該響應(yīng)面優(yōu)化方法的可靠性,采用上述最佳條件測(cè)定莧紅素得率,實(shí)際得到的莧紅素得率為3.05 mg/g,與理論預(yù)測(cè)值相比誤差為0.98%。因此,采用響應(yīng)面優(yōu)化莧紅素得率的工藝條件闡述準(zhǔn)確可靠,具有實(shí)用價(jià)值。
2.4莧紅素抗氧化性研究
莧菜中莧紅素的抗氧化性研究結(jié)果如圖8所示。由圖8(A)可知,莧紅素和VC都具有較好的抗氧化能力,并且隨著濃度的增加,抗氧化能力越來(lái)越強(qiáng),當(dāng)濃度高于0.15 mg/g時(shí),兩者的抗氧化能力都趨于平衡,隨濃度變化不大。在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)莧紅素的抗氧化能力均高于VC。結(jié)合總抗氧化能力標(biāo)準(zhǔn)曲線可以得出0.15 mg/g莧紅素溶液的抗氧化能力相當(dāng)于0.09 mmol/L FeSO4,而相同濃度的VC溶液則相當(dāng)于0.07 mmol/L FeSO4溶液。
圖8(B)反映出莧紅素對(duì)DPPH自由基的清除能力。在0.1~0.55 mg/g的范圍內(nèi),莧紅素對(duì)DPPH自由基的清除能力隨其濃度的增加而增強(qiáng),超過(guò)0.55 mg/g后,清除能力隨濃度變化不大。而VC作為對(duì)照,在其濃度介于0.1~0.45 mg/g時(shí),其清除能力顯著低于(p<0.05)莧紅素,繼續(xù)提高其濃度,兩者清除效果相當(dāng)且變化不大。DPPH自由基清除力的大小通常用半清除率(IC50)表示,IC50是當(dāng)清除率達(dá)到50%時(shí)所需要的抗氧劑濃度[22]。因此,根據(jù)清除率擬合曲線得到莧紅素和VC的IC50分別為0.18 mg/g和0.40 mg/g。
莧紅素對(duì)羥基自由基的清除作用如圖8(C)所示。莧紅素和VC都具有良好的清除羥基自由基的能力,在低濃度時(shí),VC對(duì)羥基自由基的清除效果要優(yōu)于莧紅素,隨著濃度的增加,當(dāng)濃度大于0.06 mg/g時(shí),莧紅素的清除能力反而高于VC,但二者的清除率都趨于平衡,隨濃度的增加變化不大,與郝秀梅[26]等研究結(jié)果一致。根據(jù)清除率擬合曲線得到莧紅素和VC的IC50分別為0.06 mg/g和0.11 mg/g。
與王寧[27]等研究結(jié)果相似,在濃度低于0.6 mg/g時(shí),莧紅素對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用強(qiáng)于VC,且隨著濃度的增加,清除率也隨之增大。當(dāng)濃度高于0.6 mg/g時(shí),VC的清除能力超過(guò)莧紅素(圖8D)。根據(jù)清除率擬合曲線得到莧紅素和VC的IC50分別為0.35 mg/g和0.48 mg/g。
圖8 莧紅素抗氧化性研究結(jié)果Fig.8 Results of study of amaranthin antioxidant注:A:總抗氧化能力;B:DPPH自由基清除率;C:羥基自由基清除率;D:超氧陰離子自由基清除率; “**”和“*”分別表示相同濃度的VC與莧紅素溶液的抗氧化性在 0.01水平(雙側(cè))和0.05水平(雙側(cè))上顯著相關(guān)。
利用響應(yīng)面優(yōu)化法得到提取莧菜中莧紅素的最佳工藝條件為H2O作為提取劑、提取時(shí)間為44 min、提取溫度為30 ℃、料液比為1∶50。影響提取最顯著的因素是提取溫度,其次是提取時(shí)間,最后是料液比。在此最優(yōu)條件下,莧紅素得率為0.305%。莧紅素具有較好的抗氧化能力,其對(duì)DPPH自由基的清除率及總抗氧化能力均優(yōu)于相同濃度的VC溶液,對(duì)羥基自由基以及超氧陰離子自由基的清除率也與VC相差不大。研究得出,0.15 mg/g莧紅素提取液的總抗氧化能力相當(dāng)于0.09 mmol/L FeSO4,對(duì)DPPH自由基、羥基自由基、超氧陰離子自由基的IC50分別為0.18、0.06和0. 35 mg/g。
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Responsesurfacemethodologyforoptimizingextractionofamaranthinanditsantioxidantactivity
XIONGQian,WANGChun-xing,SUNMeng,WANGKai-kai,SONGJia-min,XUFeng*,WANGHong-fei
(College of Food Science and Engineering,Ningbo University,Ningbo 315211,China)
AmaranthustricolorL.;amaranthin;response surface methodology;antioxidant activity
2016-12-30
熊茜(1991-),女,碩士研究生,研究方向:農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工,E-mail:13646621631@163.com。
*通訊作者:許鳳(1983-),女,博士,副教授,研究方向:農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工,E-mail:xufeng1@nbu.edu.cn。
國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(31301574);浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(Y16C200011);浙江省科技廳項(xiàng)目(2014C02023);寧波市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015A610273);寧波大學(xué)人才引進(jìn)項(xiàng)目(ZX2012000031);寧波大學(xué)學(xué)科項(xiàng)目(xkl1344);寧波大學(xué)??蒲谢痦?xiàng)目(XYL14025);寧波大學(xué)學(xué)科項(xiàng)目(xkzsc1526)。
TS255.1
:B
:1002-0306(2017)12-0221-07
10.13386/j.issn1002-0306.2017.12.040