席向宇，王炳花

（1.徐州市傳染病醫(yī)院，江蘇徐州221004；2.徐州醫(yī)科大學(xué)，江蘇徐州221004）

結(jié)核病在一定程度上屬于免疫紊亂性疾病，存在多種細(xì)胞因子的異常變化。其中，腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）、人白細(xì)胞介素 12 （interleukin，IL-12）、人白細(xì)胞介素18（interleukin，IL-18）和干擾素-γ （interferon，IFN-γ）等細(xì)胞因子在結(jié)核病中起一定的作用，調(diào)節(jié)結(jié)核病的免疫反應(yīng)過程。但是，迄今為止，關(guān)于以上細(xì)胞因子在肺結(jié)核患者及正常對(duì)照血清中的表達(dá)及其作用國內(nèi)外甚少報(bào)道。因此，本研究利用酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定肺結(jié)核患者及正常對(duì)照組血清中TNF-α、IL-12、IL-18和IFN-γ等細(xì)胞因子水平的變化情況，并探討這些細(xì)胞因子在肺結(jié)核發(fā)病過程中所起的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

TNF-α、IL-12、IL-18和IFN-γ酶聯(lián)免疫分析試劑盒購于微科曼得生物工程有限公司。

1.2 血清標(biāo)本

選擇60例肺結(jié)核患者，所有患者的診斷均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)2000年制定的《肺結(jié)核診斷和治療指南》，隨機(jī)選取60例正常來本院體檢者，性別、年齡等主要因素與病例組相匹配。

1.3 方法

抽取研究對(duì)象的靜脈血2 mL，3000 r/m離心15 min，收集上層血清。按照ELISA試劑盒操作步驟檢測血清中細(xì)胞因子的水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較選擇t檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清TNF-α的比較

與對(duì)照組相比，結(jié)核組血清中TNF-α的濃度高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同研究對(duì)象血清 TNF-α、IL-12、IL-18、IFN-γ 的水平 （±s） ng/L

表1 不同研究對(duì)象血清 TNF-α、IL-12、IL-18、IFN-γ 的水平 （±s） ng/L

組別結(jié)核組（n=60）對(duì)照組（n=60）t P TNF-α 71.32±13.91 36.45±8.76 16.45 0.000 IL-12 14.26±10.78 7.28±1.74 3.09 0.005 IL-18（ng/L）17.83±5.48 9.10±2.18 10.22 0.000 IFN-γ（ng/L）59.42±14.92 30.34±7.25 13.58 0.000

2.2 兩組血清IL-12的比較

與對(duì)照組相比，結(jié)核組血清中IL-12的濃度高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.3 兩組血清IL-18的比較

與對(duì)照組相比，結(jié)核組血清中IL-18的濃度高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.4 兩組血清IFN-γ的比較

與對(duì)照組相比，結(jié)核組血清中IFN-γ的濃度高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

3 討論

TNF-α為前炎細(xì)胞因子，由單核巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生，TNF-α可上調(diào)黏附分子表達(dá)，增加同型和異型細(xì)胞間黏附作用；促進(jìn)巨噬細(xì)胞活化，增強(qiáng)其吞噬作用；參與肉芽腫形成，從而在結(jié)核分枝桿菌感染中起保護(hù)作用。然而，TNF-α也可導(dǎo)致組織壞死、空洞形成。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，空洞肺結(jié)核患者的支氣管沖洗液中TNF-α的水平明顯高于無空洞組[1]。也有研究[2]發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核患者血液中TNF-α的表達(dá)明顯高于對(duì)照組。有研究者[3]對(duì)肺結(jié)核患者抗結(jié)核治療后發(fā)現(xiàn)，治療后血清中TNF-α的含量要低于治療前。本研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核病患者血清中TNF-α的水平明顯高于對(duì)照組，和前面文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致。

IL-12是重要的免疫調(diào)節(jié)因子，其主要功能就是誘導(dǎo)早期輔助性細(xì)胞 (helper T cell，Th)向Thl分化，并促進(jìn)分泌相應(yīng)細(xì)胞因子。其免疫學(xué)特性包括增加IFN-γ的產(chǎn)生和NK細(xì)胞、T細(xì)胞的細(xì)胞毒活性等。大量研究證實(shí)，IL-12作為Thl應(yīng)答增強(qiáng)劑，在控制結(jié)核感染中具有不可替代的地位。而關(guān)于機(jī)體感染結(jié)核桿菌后，血清中IL-12水平的高低不同的研究者有各自不同的結(jié)論[4-5]。而且由于IL-12的基因多態(tài)性與結(jié)核之間有很強(qiáng)的易感性，所以目前用于疫苗研制比較多。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，結(jié)核患者血清中IL-12的含量也是明顯高于對(duì)照組，提示該細(xì)胞因子用于結(jié)核的免疫療法有一定前景。

IL-18最早是在1995年Okamurals等[6]從熱滅活的丙酸桿菌致敏后再注射脂多糖 (LPs)的裸鼠肝細(xì)胞中分離并克隆出來，由于這種細(xì)胞因子能誘導(dǎo)Th1等細(xì)胞產(chǎn)生INF-γ，故命名為IFN-γ誘導(dǎo)因子 (IGIF)。后根據(jù)其蛋白結(jié)構(gòu)和功能，改稱為IL-18。IL-8是一個(gè)多效型細(xì)胞因子，主要介導(dǎo)Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)，它能誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其產(chǎn)生IFN F-γ，具有抗炎及抗腫瘤的作用，其與IL-12一樣也是Th1反應(yīng)出現(xiàn)的早期信號(hào)。外周血單一核細(xì)胞所產(chǎn)生的IL-18和IFN-γ的產(chǎn)生密切相關(guān)，兩者均有助于增強(qiáng)對(duì)抗結(jié)核的免疫反應(yīng)，提示IL-18可以強(qiáng)化結(jié)核病患者的Th1類反應(yīng)[7]。有研究發(fā)現(xiàn)[8]，不管是初治組、復(fù)治組，Ⅲ型還是Ⅳ型患者，IL-18血清中含量與胸水中含量都沒有顯著性差異。也有研究發(fā)現(xiàn)[9]，結(jié)核性、惡性胸水患者胸水IL-18濃度顯著高于血清IL-18濃度，與惡性胸水相比較，結(jié)核性胸水所檢測到的IL-18水平顯著增高。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，結(jié)核患者血清中IL-18的水平依然是顯著升高的，故動(dòng)態(tài)監(jiān)測血清IL-18水平，可作為評(píng)估肺結(jié)核病變活動(dòng)性及抗結(jié)核藥物治療效果的敏感指標(biāo)。

IFN-γ是由Th1細(xì)胞分泌的免疫調(diào)節(jié)因子，激活單核細(xì)胞，使單核細(xì)胞在病灶周圍積聚，控制感染擴(kuò)散，有助于結(jié)核肉芽腫形成，同時(shí)增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的殺菌作用，在抗結(jié)核免疫中起著重要作用。有文獻(xiàn)報(bào)道[10]，血清IFN-γ水平在抗結(jié)核治療前后無顯著變化，也有文獻(xiàn)報(bào)道[11]，肺結(jié)核病患者血清水平高于肺癌組和健康對(duì)照組，而且與病情輕重有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，相對(duì)對(duì)照組，結(jié)核病患者血清中IFN-γ的含量明顯升高，說明機(jī)體一旦感染結(jié)核后，可刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生更多的IFN-γ來保護(hù)機(jī)體抵抗結(jié)核桿菌的侵襲。

綜上所述，細(xì)胞因子的水平一定程度上能反映患者的免疫狀態(tài)，其變化趨勢不僅可判斷患者的預(yù)后，也可作為判斷藥物療效的依據(jù)。因此，在進(jìn)行抗肺結(jié)核治療時(shí)動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞因子水平，有利于監(jiān)測肺結(jié)核病情的轉(zhuǎn)歸，利用細(xì)胞因子的變化趨勢，可以預(yù)知該治療方案有效與否。

[1]KUPELI E,KAMAK D,BEDER S,et al.Diagnostic accuracy of cytokine levels(TNF-α、IL-2 and IFN-γ)in bron-choalvcolar lavage fluid of smcar-negtive pulmanary tube-rculosispatients[J].Respiration，2008,75(1):73-78.

[2]趙英杰.肺結(jié)核患者血液中VEGF、TNF-α和IL-6的表達(dá)研究[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013,23(17):3388-3393.

[3]夏小學(xué)，陳江，盧火 ，等.抗結(jié)核治療對(duì)肺結(jié)核病患者血清TNF-α、IFN-γ、I L-10和 IL-17表達(dá)差異的影響[J].中國微生物學(xué)雜志，2013,25(3):306-308.

[4]杜娟，鄧冰，桂坤，等.肺結(jié)核患者血清白細(xì)胞介素IL-12、13D水平的臨床研究[J].臨床內(nèi)科雜志，2005,22(6):409-410.

[5]奚瑩，王莉.肺結(jié)核患者血清白細(xì)胞介素12水平檢測及臨床意義[J].中國感染控制雜志，2012,11(2):109-133.

[6]OKAMURA H,TSUTSI H,KOMATSU T,et al.Cloning of a new cytokine that induces IFN-gamma production by T cells.Nature,1995:378:58-91.

[7]VANKAYAPATI R,WIZEL B,WEIS S E,et al.Production of interleukin-18 in human tuberculosis[J].J Infect Dis,2000,182:234-239.

[8]張曼，邵燕麗.結(jié)核性胸腔積液病人IL-12、IL-18、TNF-α的水平及變化[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009,25(24):3693-3695.

[9]巫艷彬.胸腔積液白介素-18的水平及意義[D].桂林：廣西醫(yī)科大學(xué)，2004.

[10]郭淑湘，馬冬梅，劉慧芳，等.肺結(jié)核患者血清干擾素-γ、白細(xì)胞介素-18和骨橋蛋白水平的動(dòng)態(tài)變化及臨床意義 [J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2013,29(4):562-564.

[11] 李紅，唐神結(jié).肺結(jié)核患者外周血 sIL-2R、TNF-α、IFN-γ、IL-6的檢測及意義[J].中國防癆雜志，2011,33(1):57-60.