馮兆光，李小東，徐 兵

(青州市花卉高科技博覽園管理委員會(huì)，山東 青州 262500)

春蘭(Cymbidium goeringii)是國(guó)蘭種類最豐富多彩的一個(gè)種，也是栽培過(guò)程中繁殖最困難的一個(gè)種之一，其香味最佳，但繁殖系數(shù)很低，最多1年2～3倍，通過(guò)組織培養(yǎng)方法能快速滿足生產(chǎn)需要，在短時(shí)間內(nèi)提供大量種苗。目前蘭花組織培養(yǎng)在如大花蕙蘭、蝴蝶蘭、雜交蘭等工廠化生產(chǎn)技術(shù)已經(jīng)非常成熟，但國(guó)蘭由于價(jià)格昂貴、易褐化、再生過(guò)程難度高，難以實(shí)現(xiàn)工廠化快繁[1]。本研究以春蘭荷型水仙的典型代表“龍字”為研究材料，研究國(guó)蘭通過(guò)組織培養(yǎng)獲得再生苗的方法，以期為實(shí)現(xiàn)國(guó)蘭的工廠化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 取材及消毒

供試材料為春蘭“龍字”的側(cè)芽，取材前先室內(nèi)養(yǎng)護(hù)3～4個(gè)月，澆水時(shí)避免澆到新芽上。待芽長(zhǎng)到3～4 cm時(shí)取下，用洗衣粉水輕輕洗凈表面，在超凈工作臺(tái)內(nèi)用75%酒精浸泡30 s，再用0.1%的升汞浸泡8～10 min，然后用無(wú)菌水洗5次，每次5 min，剝掉外層葉片后，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。

1.2 供試培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

（1）誘導(dǎo)培養(yǎng)基:

1#MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+AC0.2g/L；

2#MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L。

（2）龍根增殖培養(yǎng)基:

3#MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L；

4#1/2 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L；

5#MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L；

6#1/2 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L。

（3）芽分化培養(yǎng)基:

分化培養(yǎng)基篩選采用3因素4水平的L16(43)正交設(shè)計(jì)（表1），每個(gè)處理接種4瓶，每瓶接種10塊龍根，重復(fù)3次。

表1 供試因素及水平

（4）生根培養(yǎng)基:

23#1/2 MS+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L；24#1/2MS+NA A0.5mg/L+AC1g/L+香蕉泥 50g/L；25#B5+BA 2 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 1 g/L+香蕉泥50 g/L。

上述培養(yǎng)基pH 5.8，瓊脂6 g/L，蔗糖30 g/L，于121℃殺菌 20 min。

（5）培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度 26±1℃，光照 14 h/d，光源由LED燈提供，光照強(qiáng)度1500 Lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 龍根誘導(dǎo)培養(yǎng)

誘導(dǎo)培養(yǎng)20 d后，部分芽體仍無(wú)生長(zhǎng)痕跡，一段時(shí)間后逐漸褐化死亡，30 d后少數(shù)芽體逐漸變綠頂端或周圍逐漸生長(zhǎng)出較細(xì)的龍根，說(shuō)明誘導(dǎo)成功。誘導(dǎo)培養(yǎng)基中需添加少許活性炭能有效防止褐化，添加BA和NAA激素濃度越高龍根生長(zhǎng)量越多。誘導(dǎo)率最高的培養(yǎng)基是2#MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L，產(chǎn)生龍根多，生長(zhǎng)快（表2）。

表2 叢生芽誘導(dǎo)結(jié)果

2.2 龍根增殖培養(yǎng)

表3 芽增殖培養(yǎng)結(jié)果

將誘導(dǎo)獲得的根狀莖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基，60 d轉(zhuǎn)接一次，最高增殖倍數(shù)為6倍。無(wú)機(jī)鹽含量的增加和激素濃度的增加均能提高龍根增殖倍數(shù)，提高BA濃度能使龍根分叉較多從而提高增殖倍數(shù)，提高NAA濃度能使龍根伸長(zhǎng)、變粗，BA/NAA比值較小的情況下龍根細(xì)長(zhǎng)，所生長(zhǎng)的芽不壯，對(duì)比之下最適宜龍根增殖的培養(yǎng)基為4#1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L（表3）。

2.3 龍根分化研究

選取2～3 cm粗壯的龍根，接種到分化培養(yǎng)基中，每瓶接種10塊龍根。暗培養(yǎng)7 d后，正常光照培養(yǎng)。正常情況20 d后形成粗壯的芽點(diǎn)，40 d左右形成芽，120 d左右芽苗可生長(zhǎng)到5 cm以上，BA/NAA比例越大分化越快，單用BA或NAA時(shí)分化較慢，分化芽數(shù)量少，添加AC可減輕褐化，但會(huì)降低芽苗分化率，并且苗瘦弱。綜合考慮芽誘導(dǎo)率和苗生長(zhǎng)情況確定18#培養(yǎng)基最佳即MS（NH4NO3 0.4 g/L）+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，龍根幾乎不增殖，苗壯，直立生長(zhǎng)（表4）。

2.4 生根培養(yǎng)

選取5 cm以上小苗接種到生根培養(yǎng)基中，20 d后開始生根，24#培養(yǎng)基生根最快，但30 d后23#、24#培養(yǎng)基中部分小苗停止生長(zhǎng)，從頂端或根部生長(zhǎng)龍根。60 d后生根率最高的是25#培養(yǎng)基，生長(zhǎng)側(cè)芽，不存在龍根生長(zhǎng)現(xiàn)象。經(jīng)篩選最佳生根培養(yǎng)基為25#B5+BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 1.0 g/L+香蕉泥50 g/L。

表4 芽分化培養(yǎng)結(jié)果

表5 生根培養(yǎng)結(jié)果

2.5 組培苗移栽

組培苗生長(zhǎng)到90 d以上、苗高10 cm以上時(shí)及時(shí)練苗，在散射光下培養(yǎng)20 d左右后，此時(shí)可開蓋移栽。洗凈根部殘留的培養(yǎng)基，用濕潤(rùn)的苔蘚包裹移栽到穴盤中。把握好干透澆透的澆水原則，20 d內(nèi)光照控制在5000 lx以下，成活率90%以上。

3 討論

近年來(lái)，春蘭由于花香、清雅、價(jià)格合適，比較受消費(fèi)者歡迎，國(guó)蘭組培成為花卉種苗公司的發(fā)展目標(biāo)[2]，尤其是具有代表性的春蘭品種:龍字、大富貴、綠云、宋梅等頗受歡迎。由于春蘭組培過(guò)程中易褐化、再生難度大，因此盡快獲得成熟的組培技術(shù)成為研究重點(diǎn)。大量生產(chǎn)中可以借鑒洋蘭組培技術(shù)添加防褐化的VC、pvp等抗氧化劑，添加有機(jī)物質(zhì)如蘋果汁、椰汁中增加分化出芽率[3]。

與其他研究者使用的生根培養(yǎng)基不同，本研究使用BA與NAA混合，達(dá)到了使苗側(cè)芽生長(zhǎng)同時(shí)生根的雙重目的。

［1］李洪林，楊波.春蘭根狀莖離體培養(yǎng)與快速繁殖（簡(jiǎn)報(bào)）.亞熱帶植物科學(xué)［J］，2012，41（4）:67-68.

［2］牛田，張林，王厚新等.春蘭‘金荷鼎’雜交后代離體快繁的研究.農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)［J］，2013（3）:44-46.

［3］孫芳，李承秀，張林等.春蘭名品雜交后代快繁與分化研究.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)［J］，2012，28（10）:189-193.