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        脂蟾毒配基PLGA-TPGS納米粒的體外細(xì)胞攝取及毒性研究Δ

        2017-07-03 14:56:39褚秋辰徐榮謙張成鴻大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院遼寧大連6044大連醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院遼寧大連6044大連醫(yī)科大學(xué)八年制06級(jí)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)遼寧大連6044
        中國(guó)藥房 2017年16期
        關(guān)鍵詞:醫(yī)科大學(xué)孵育批號(hào)

        徐 紅,高 萌,褚秋辰,董 浩,陳 雨,徐榮謙,張成鴻,田 燕#(.大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,遼寧大連 6044;.大連醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,遼寧大連 6044;.大連醫(yī)科大學(xué)八年制06級(jí)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè),遼寧大連 6044)

        脂蟾毒配基PLGA-TPGS納米粒的體外細(xì)胞攝取及毒性研究Δ

        徐 紅1*,高 萌2,褚秋辰2,董 浩2,陳 雨3,徐榮謙3,張成鴻1,田 燕2#(1.大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,遼寧大連 116044;2.大連醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,遼寧大連 116044;3.大連醫(yī)科大學(xué)八年制2016級(jí)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè),遼寧大連 116044)

        目的:研究脂蟾毒配基(RBG)乳酸羥基乙酸共聚物-水溶性維生素E(PLGA-TPGS)納米粒(RPTN)體外被人肝癌HepG2細(xì)胞、小鼠腹水型高淋巴道轉(zhuǎn)移腫瘤HCa-F細(xì)胞的攝取情況和對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性。方法:制備包載RBG和熒光標(biāo)記物香豆素6的PLGA-TPGS納米粒(RCPTN),熒光倒置顯微鏡觀察HepG2、HCa-F細(xì)胞對(duì)RCPTN的體外攝取情況。將試驗(yàn)分為陰性對(duì)照組、空白PLGA-TPGS納米粒(EPTN)組、5-氟尿嘧啶溶液(FS)組、RBG溶液(RS)組、RBG/PLGA納米粒(RPN)組、RPTN組,采用水溶性四氮唑(WST-1)法考察不同終質(zhì)量濃度(1.25、2.5、5、10、20μg/m L)的FS、RS、RPN和RPTN作用24、48、72 h后HepG2細(xì)胞在450 nm波長(zhǎng)下的光密度,計(jì)算細(xì)胞存活率(CV)和半數(shù)抑制濃度(IC50)。結(jié)果:RCPTN分布在HepG2、HCa-F細(xì)胞的細(xì)胞核周圍。RPN組和RPTN組細(xì)胞的CV隨RBG濃度增加而減小,隨作用時(shí)間延長(zhǎng)而減??;與FS組比較,RPTN組細(xì)胞的CV均減?。≒<0.05或P<0.01)。FS、RS、RPN和RPTN作用于HepG2細(xì)胞的IC50隨時(shí)間的延長(zhǎng)而減小,且IC50的大小依次為RS>FS>RPN>RPTN;RPN和RPTN作用48、72 h的IC50明顯小于FS與RS(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論:RPTN可將RBG帶入HepG2、HCa-F細(xì)胞內(nèi)部,其對(duì)HepG2細(xì)胞具有抑制作用,且作用強(qiáng)于RPN、RS和FS。

        脂蟾毒配基;乳酸羥基乙酸共聚物-水溶性維生素E;納米粒;肝癌HepG2細(xì)胞;腹水型高淋巴道轉(zhuǎn)移腫瘤HCa-F細(xì)胞;細(xì)胞攝??;體外細(xì)胞毒性

        脂蟾毒配基(Resibufogenin,RBG)是中藥蟾酥的主要成分之一[1],具有廣泛的生理、藥理活性,如強(qiáng)心、增強(qiáng)心肌收縮、升血壓、抗腫瘤等[2-5]。眾多的細(xì)胞試驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)均證明RBG是一種發(fā)展前景良好的天然抗癌藥物[6-8],能作用于腫瘤發(fā)生的不同階段,促使癌細(xì)胞凋亡。但因其本身難溶于水,并且具有較強(qiáng)的心臟毒性,口服生物利用度非常低,影響了其在臨床上的應(yīng)用。

        納米粒(Nanoparticles)是一種毒性相對(duì)較小、穩(wěn)定性好的靶向制劑,iv后能將包載的藥物靶向運(yùn)送到肝、脾、骨髓等,降低藥物在其他組織中的分布,從而提高療效、減輕毒副作用[9]。納米粒能否被腫瘤細(xì)胞直接攝取,對(duì)于納米粒給藥系統(tǒng)的研究與評(píng)價(jià)十分重要,較常用的方法是將納米粒載體材料進(jìn)行熒光標(biāo)記或?qū)晒鈽?biāo)記物包載到納米粒內(nèi)部后,在熒光顯微鏡下觀察納米粒被細(xì)胞攝取的過程。香豆素6(Coumarin-6,C6)是近年來(lái)常用于納米粒給藥系統(tǒng)體內(nèi)示蹤、體外細(xì)胞攝取等研究的脂溶性熒光標(biāo)記物[10-11],具有性能穩(wěn)定、熒光轉(zhuǎn)化率高等優(yōu)點(diǎn)。

        本研究用自制材料乳酸羥基乙酸共聚物-水溶性維生素E(PLGA-TPGS)為載體,制備同時(shí)包載模型藥物RBG和熒光標(biāo)記物C6的RBG/C6-PLGA-TPGS納米粒(RCPTN),利用C6的綠色熒光直觀地研究人肝癌細(xì)胞HepG2和小鼠腹水型高淋巴道轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞HCa-F對(duì)RCPTN的攝取情況。同時(shí)以PLGA-TPGS為載體,制備只包載RBG的RBG/PLGA-TPGS納米粒(RPTN),并以市售材料PLGA為載體制備的RBG/PLGA納米粒(RPN)為對(duì)照[12],采用水溶性四氮唑(WST-1)法考察RPTN和RPN對(duì)HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒性,以期為RPTN的體內(nèi)靶向性評(píng)價(jià)、藥效學(xué)研究等奠定基礎(chǔ)。

        1 材料

        1.1 儀器

        1200高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司);354型酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司);IX81倒置熒光顯微鏡(日本Olympus公司);Sorvall ST 16R臺(tái)式離心機(jī)(美國(guó)Thermo Fisher公司,離心半徑:13.5 cm)。

        1.2 藥品與試劑

        RBG原料藥(大連醫(yī)科大學(xué)藥物化學(xué)教研室提供,批號(hào):20121120,純度:98%);RCPTN[批號(hào):20140110,規(guī)格:RBG 92 mg/g、C6 108 mg/g,粒徑:(154.6±3.6)nm]、RPTN[批號(hào):20140109,規(guī)格:RBG 183mg/g,粒徑:(150.8±2.7)nm]、RPN[批號(hào):20140109,規(guī)格:RBG 150 mg/g,粒徑:(342.1±2.9)nm]、空白PLGA-TPGS納米粒(EPTN,批號(hào):20140110)均由大連醫(yī)科大學(xué)藥劑學(xué)教研室提供;5-氟尿嘧啶注射液(FS,上海旭東海普藥業(yè)有限公司,批號(hào):1402181,規(guī)格:25mg/m L);WST-1細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒、優(yōu)級(jí)胎牛血清(美國(guó)羅氏應(yīng)用科學(xué)公司,批號(hào):M 1680、20120906);4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI,北京索萊寶科技有限公司,批號(hào):20130110);碘化丙啶(PI,美國(guó)Sigma公司,批號(hào):SLBC3518V,純度:94.0%)。

        1.3 細(xì)胞株與動(dòng)物

        人肝癌細(xì)胞HepG2購(gòu)買于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心;小鼠腹水型高淋巴道轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞HCa-F由大連醫(yī)科大學(xué)形態(tài)學(xué)教研室提供。健康昆明種小鼠,SPF級(jí),8周齡,體質(zhì)量20~25 g,♀♂不限,由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào)為SCXK(遼)2008-0002。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 體外細(xì)胞攝取試驗(yàn)

        2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng) (1)HepG2細(xì)胞在含10%胎牛血清的H-DMEM培養(yǎng)基中,于37、飽和濕度、含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%~90%融合時(shí),用磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 7.4)洗滌,0.25%胰酶消化液分散成單細(xì)胞懸液,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。(2)常規(guī)方法復(fù)蘇凍存的HCa-F細(xì)胞,調(diào)細(xì)胞密度為3×107個(gè)/m L,取200μL的細(xì)胞懸液接種在小鼠腹腔,培養(yǎng)腹水。

        2.1.2 HepG2細(xì)胞攝取試驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[13]進(jìn)行操作,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HepG2細(xì)胞加至24孔板,細(xì)胞密度為1× 105個(gè)/孔,培養(yǎng)24 h。用含200μg/m L C6的RCPTN(RBG為170.4μg/m L,下同)在37下孵育4 h,冷PBS洗3次,75%乙醇固定10m in,吸走乙醇,冷PBS再洗3次,每次5m in。將200 ng/m L的DAPI加至樣品孔中,染色15m in,冷PBS洗3次,每次5m in,用熒光倒置顯微鏡觀察。結(jié)果顯示,RCPTN分布在HepG2細(xì)胞核周圍,顯微鏡圖見圖1。

        圖1 HepG2細(xì)胞攝取RCPTN的顯微鏡圖(×400)Fig 1 M icroscopy images of RCPTN by HepG2 cell up take(×400)

        2.1.3 HCa-F細(xì)胞攝取試驗(yàn) 取活小鼠腹水2~3m L,置于10m L滅菌離心管中,加入適量PBS,離心(1 000 r/min,5min,下同),棄上清,再加入PBS重復(fù)操作至細(xì)胞沉淀內(nèi)無(wú)血色。向沉淀中加3m LRCPTN[13],輕輕吹散,于37、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育4 h,離心,沉淀用冷PBS洗3次,75%乙醇固定10m in后再離心,沉淀用冷PBS洗3次。每孔加PI(0.5μg/m L)300μL染色15min后離心,沉淀用冷PBS洗3次,取少量細(xì)胞懸液壓片,用倒置熒光顯微鏡觀察。結(jié)果顯示,RCPTN分布在HCa-F細(xì)胞核周圍,顯微鏡圖見圖2。

        2.2 體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)

        圖2 HCa-F細(xì)胞攝取RCPTN的顯微鏡圖(×400)Fig 2 M icroscopy images RCPTN by HCa-F cell uptake(×400)

        2.2.1 分組與給藥 為了消除96孔板和加入的培養(yǎng)液在測(cè)定樣品時(shí)對(duì)光密度(OD)的影響,先用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)下只加入50μL高糖DMEM培養(yǎng)液的空白96孔板的OD空白孔(n=6)。試驗(yàn)共分為6組,每個(gè)濃度6個(gè)復(fù)孔。(1)陰性對(duì)照組:接種細(xì)胞后不加任何藥物,加入50μL高糖DMEM培養(yǎng)液;(2)EPTN組:接種細(xì)胞后加入50μLEPTN混懸液;(3)FS組:接種細(xì)胞后加入50 μL FS(5-氟尿嘧啶終質(zhì)量濃度分別為1.25、2.5、5、10、20 μg/m L);(4)RBG溶液(RS)組:接種細(xì)胞后加入50μL RS(用含0.1%二甲基亞砜的無(wú)血清高糖DMEM培養(yǎng)液配制);(5)RPN組:接種細(xì)胞后加入50μLRPN混懸液;(6)RPTN組:接種細(xì)胞后加入50μL RPTN混懸液。其中,RPTN、RPN、RS組中RBG終質(zhì)量濃度均分別為1.25、2.5、5、10、20μg/m L。試驗(yàn)中所有的納米粒在給藥前均需分散到適量無(wú)血清高糖DMEM培養(yǎng)液中,100W超聲處理60 s,形成納米粒的混懸液。

        2.2.2 細(xì)胞存活率的測(cè)定 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HepG2細(xì)胞,以1×104個(gè)/孔的細(xì)胞懸液接種于96孔板,每孔100μL。按“2.2.1”項(xiàng)下分組加入藥物,分別作用24、48、72 h后,每孔加入WST-1溶液10μL,繼續(xù)孵育4 h后終止培養(yǎng)。在酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD,參比波長(zhǎng)為600 nm,計(jì)算細(xì)胞存活率(CV)[CV(%)=(OD加藥孔-OD空白孔)/(OD陰性對(duì)照孔-OD空白孔)×100%]。

        2.2.3 數(shù)據(jù)處理與結(jié)果 用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)以±s表示,多組資料采用方差分析,兩組間比較采用t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組細(xì)胞的CV測(cè)定結(jié)果見表1。

        由表1可知,(1)HepG2細(xì)胞在EPTN組最大濃度下培養(yǎng)72 h的CV為(98.43±0.19)%,表明本研究制備納米粒所用的材料PLGA-TPGS對(duì)HepG2細(xì)胞無(wú)明顯的毒性;(2)隨RBG質(zhì)量濃度的增加、孵育時(shí)間的延長(zhǎng),RPN、RPTN組細(xì)胞的CV均降低(P<0.01),表明RPN和RPTN的體外抗腫瘤作用有RBG濃度依賴性和作用時(shí)間依賴性;(3)RS組細(xì)胞的CV與FS組比較均無(wú)明顯差別,說(shuō)明RS和FS加入細(xì)胞后能迅速達(dá)到最大藥物釋放量,從而發(fā)揮抗腫瘤作用,故不同時(shí)間點(diǎn)HepG2細(xì)胞的CV變化較?。唬?)當(dāng)納米粒中RBG濃度為20μg/m L時(shí),孵育時(shí)間為48 h、72 h時(shí),RPN、RPTN組的CV較同濃度同孵育時(shí)間點(diǎn)FS組的CV均顯著降低(P<0.01),表明RPN、RPTN具有很好的體外抗腫瘤活性和一定的緩釋作用。⑤與RPN組比較,RPTN組細(xì)胞的CV均減低,表明RPTN體外抗腫瘤細(xì)胞作用優(yōu)于RPN。

        表1 各組細(xì)胞的CV測(cè)定結(jié)果(±s,n=6)Tab 1 Determ ination resultsof CV in each group(± s,n=6)

        表1 各組細(xì)胞的CV測(cè)定結(jié)果(±s,n=6)Tab 1 Determ ination resultsof CV in each group(± s,n=6)

        注:與FS組比較,*P<0.05,**P<0.01Note:vs.FSgroup,*P<0.05,**P<0.01

        作用時(shí)間,h 24 CV,% 48 72 RPTN組75.12±0.21*72.31±0.24*68.46±0.22*61.32±0.15*45.17±0.13*58.23±0.11*52.67±0.15*45.25±0.23*38.54±0.22**18.71±0.26**50.87±0.19*45.93±0.12*41.09±0.23*31.52±0.24**14.65±0.17**質(zhì)量濃度,μg/mL 1.25 2.5 5 10 20 1.25 2.5 5 10 20 1.25 2.5 5 10 20 EPTN組99.27±0.15 99.07±0.17 98.73±0.21 98.36±0.19 98.44±0.18 99.32±0.20 99.08±0.19 98.89±0.13 98.17±0.11 98.25±0.22 99.13±0.21 99.05±0.27 98.37±0.13 98.44±0.11 98.43±0.19 FS組88.25±0.22 86.91±0.25 84.47±0.26 79.43±0.19 68.73±0.13 86.62±0.17 85.03±0.21 81.94±0.25 75.58±0.23 62.73±0.17 75.33±0.13 68.06±0.11 60.65±0.22 57.16±0.19 48.82±0.11 RS組87.63±0.23 85.71±0.21 83.12±0.15 80.15±0.13 75.33±0.21 85.54±0.16 80.22±0.11 79.17±0.14 74.92±0.19 69.91±0.21 83.34±0.11 79.81±0.17 75.25±0.12 71.14±0.14 68.92±0.18 RPN組78.55±0.17 75.51±0.14 72.73±0.12 67.85±0.11 55.38±0.23 64.97±0.21*61.74±0.20*58.13±0.25*46.32±0.21*32.67±0.17*58.85±0.12*54.98±0.11 50.22±0.17 41.24±0.19 32.37±0.21*

        2.2.4 半數(shù)抑制濃度(IC50)的測(cè)定 根據(jù)各組細(xì)胞抑制率[IR(%)=1-CV],將同一作用時(shí)間的5個(gè)藥物濃度分別與對(duì)應(yīng)的IR進(jìn)行線性回歸,得到不同作用時(shí)間的IR方程。將IR=50%代入該方程,計(jì)算IC50。各組細(xì)胞作用不同時(shí)間的IC50測(cè)定結(jié)果見表2。

        表2 各組細(xì)胞作用不同時(shí)間的IC50測(cè)定結(jié)果(±s,n=6)Tab 2 Determ ination results of IC50after cell incubated for different time in each group(±s,n=6)

        表2 各組細(xì)胞作用不同時(shí)間的IC50測(cè)定結(jié)果(±s,n=6)Tab 2 Determ ination results of IC50after cell incubated for different time in each group(±s,n=6)

        注:與RS組比較,**P<0.01;與FS組比較,#P<0.05Note:vs.RSgroup,**P<0.01;vs.FSgroup,#P<0.05

        RS組59.57±0.11 46.04±0.14 44.31±0.18作用時(shí)間,h 24 48 72 IC50,μg/mL RPTN組16.94±0.13**4.05±0.15**#0.66±0.17**#RPN組24.53±0.22**9.32±0.19**#5.92±0.21**#FS組38.10±0.27 30.01±0.29 17.44±0.17

        由表2可知,在3個(gè)不同作用時(shí)間點(diǎn),RPN組和RPTN組的IC50均比相應(yīng)濃度、作用時(shí)間點(diǎn)RS組的IC50?。≒<0.01);且在孵育24 h時(shí),RPTN組、RPN組的細(xì)胞毒性是RS組的3.52倍和2.43倍。在孵育48、72 h時(shí),RPN組和RPTN組的IC50均比相應(yīng)濃度、作用時(shí)間點(diǎn)FS組的IC50?。≒<0.05);且在孵育48 h時(shí),RPTN組、RPN組的細(xì)胞毒性是FS組的7.41倍和3.22倍。這表明RBG納米粒對(duì)HepG2的細(xì)胞毒性強(qiáng)于RS和FS。

        3 討論

        由于RBG無(wú)熒光,故無(wú)法直觀地觀察RBG納米粒被腫瘤細(xì)胞攝取的情況。本研究制備同時(shí)包載RBG和C6的RCPTN,用以考察HepG2細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取情況。結(jié)果可見,帶熒光的RCPTN分布在細(xì)胞核周圍,直觀地證明了RCPTN可通過細(xì)胞攝取作用將RBG和C6同時(shí)帶入肝癌細(xì)胞中,即RPTN也能通過細(xì)胞攝取作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,進(jìn)而發(fā)揮RBG對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性作用。

        本研究首次考察懸浮型細(xì)胞HCa-F對(duì)RCPTN的攝取情況,除HCa-F細(xì)胞形態(tài)與HepG2細(xì)胞不同外,細(xì)胞核周圍也可見RCPTN發(fā)出的熒光,證明RCPTN也能被HCa-F細(xì)胞攝取,為后續(xù)其對(duì)荷HCa-F細(xì)胞小鼠的抗腫瘤作用研究奠定了基礎(chǔ)。本課題組前期研究證實(shí)C6溶液無(wú)法被細(xì)胞攝取[13],同時(shí)由于細(xì)胞的容積是有限的,故納米粒被細(xì)胞攝取量具有飽和性[14]。2種細(xì)胞與含C6的RCPTN在37下孵育4 h后,均需用PBS洗3次,以除去尚未被攝取進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的納米粒,從而證明了熒光顯微鏡下觀察到的綠色熒光是細(xì)胞內(nèi)的RCPTN所發(fā)出的。

        體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)中,不同濃度、不同作用時(shí)間下,RPTN、RPN的CV均小于RS,表明RPTN、RPN的體外抗腫瘤活性優(yōu)于RS。與體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)合,RPTN比RS在作用24 h時(shí)具有對(duì)HepG2細(xì)胞更大的毒性是因?yàn)镽BG分子跨膜吸收要經(jīng)過被動(dòng)擴(kuò)散或主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程,進(jìn)入細(xì)胞后又可能在P糖蛋白的作用下而外排,降低了RBG的抑制作用。但RPTN不需要載體轉(zhuǎn)運(yùn)或濃度梯度擴(kuò)散,可直接被HepG2細(xì)胞吞噬而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),在細(xì)胞內(nèi)溶酶體的作用下材料降解釋放出RBG,既能將藥物聚集在細(xì)胞內(nèi),又由于材料的緩釋性而延長(zhǎng)藥物在細(xì)胞內(nèi)的作用時(shí)間;同時(shí)載體材料PLGA-TPGS中所含的TPGS還可減少腫瘤細(xì)胞內(nèi)P糖蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥性(MDR)[15],故使RBG從納米粒中釋放出來(lái)后能更好地發(fā)揮其對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制作用。此外,不同濃度、不同作用時(shí)間下,RPTN的CV小于RPN,表明RPTN的體外抗腫瘤活性優(yōu)于RPN。這是因?yàn)镽PTN的載體材料PLGA-TPGS中所含的TPGS可減少腫瘤細(xì)胞內(nèi)P糖蛋白介導(dǎo)的MDR,改善細(xì)胞膜的滲透性,從而使納米粒更易進(jìn)入細(xì)胞從而發(fā)揮高效的抗腫瘤活性。其次,TPGS與PLGA合成的高分子材料PLGA-TPGS可改善PLGA的水溶性,其在細(xì)胞中釋放更快、更完全,進(jìn)一步增強(qiáng)了RBG的抗腫瘤活性。

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        Study on the in vitro Cell Uptake and Toxicity of Resibufogenin-loaded PLGA-TPGSNanoparticles

        XU Hong1,GAO Meng2,CHU Qiuchen2,DONG Hao2,CHEN Yu3,XU Rongqian3,ZHANG Chenghong1,TIAN Yan2(1.College of Basic Medical Sciences,Dalian Medical University,Liaoning Dalian 116044,China;2.College of Pharmacy,Dalian Medical University,Liaoning Dalian 116044,China;3.Grade 2016 in Clinical Medical Eight Grade,Dalian Medical University,Liaoning Dalian 116044,China)

        OBJECTIVE:To study the in vitro uptake of Resibufogenin(RBG)lactic acid glycolic acid copolymer-water soluble vitamin E(PLGA-TPGS)in human liver cancer HepG2 cells,mouse ascites-type lymphatic metastasis of tumor HCa-F cells,and the toxicity on HepG2 cells.METHODS:RCPTN loading RBG and coumarin-6(C6)were prepared.Fluorescent inverted microscope was used to observe the in vitro uptake by RCPTN HepG2,HCa-F cells.Itwas divided into negative control group,blank PLGA-TPGS nanoparticles(EPTN)group,5-fluorouracil solution(FS)group,RBG solution(RS)group,RBG/PLGA nanoparticles(RPN)group and RPTN group.WST-1 was conducted to investigate the optical density at 450 nm wavelength of HepG2 cells after 24,48,72 h incubated by FS,RS,RPN and RPTN w ith different final concentrations(1.25,2.5,5,10,20μg/m L);the cell viability(CV)and half inhibitory concentration(IC50)were calculated.RESULTS:RCPTN distributed around the nucleus of HepG2,HCa-F cells.CV was decreased by RBG concentration increased in RPN group and RPTN group,and decreased by time prolonged;compared w ith FS group,CV in RPTN group was decreased(P<0.05 or P<0.01).IC50of HepG2 cells incubated by FS,RS,RPN and RPTN was decreased by time prolonged,ordered by RS>FS>RPN>RPTN;IC50incubated by RPN and RPTN for 48,72 h was obviously less than that of FS and RS(P<0.05 or P<0.01).CONCLUSIONS:RPTN can deliver RBG into HepG2,HCa-F cells,show ing inhibition effect on HepG2 cellswhich is stronger than RPN,RS and FS.

        Resibufogenin;Lactic acid glycolic acid copolymer-water soluble vitam in E;Nanoparticles;Liver cancer HepG2 cells;Ascites-type lymphaticmetastasis of tumor HCa-F cells;Cell uptake;in vitro cytotoxicity

        R285

        A

        1001-0408(2017)16-2252-04

        2016-09-18

        2017-01-02)

        (編輯:鄒麗娟)

        遼寧省科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015020308)

        *實(shí)驗(yàn)師。研究方向:藥物制劑、藥理學(xué)、藥效學(xué)。電話:0411-86110323。E-mail:859133790@qq.com

        #通信作者:教授,碩士。研究方向:藥物新制劑、新技術(shù)。電話:0411-86110420。E-mail:tiany2004@126.com

        DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.16.25

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