鄧宜材+劉雯珍+陳子晗+張雅馨+鄢樹楓+鄭志凌+董芳+陳卓

[摘要] 目的 評估健脾益氣復方中藥顆粒劑聯(lián)合腸內營養(yǎng)粉劑安素治療慢性阻塞性肺疾?。–OPD）的有效性與安全性。 方法 選取雄性小鼠96只，其中24只作為正常對照組，其余72只采用煙熏小鼠法建立COPD模型，隨機分3組：COPD模型組、安素治療組（0.558 g/mL安素，0.1 mL/10 g小鼠）及中藥聯(lián)合安素治療組（0.558 g/mL安素，0.1 mL/10 g小鼠+2.5 g/mL中藥，0.06 mL/10 g小鼠）。所有小鼠在實驗全程進行體重監(jiān)測，并分別在治療前、治療后2周及5周進行血清學檢測及肺組織切片檢查。 結果 與正常對照組小鼠相比，COPD模型組小鼠體重增加明顯減緩，血清總蛋白和白蛋白含量均明顯降低（P < 0.05），血清谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶含量均明顯升高（P < 0.05）。與COPD模型組小鼠相比，中藥聯(lián)合安素治療組小鼠的體重明顯回升，治療后5周，血清總蛋白和白蛋白含量均顯著增加（P < 0.05），血清谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶含量均明顯下降（P < 0.05）。病理切片結果也證實了中藥聯(lián)合安素治療對COPD肺部病理改變具有明顯改善作用。 結論 健脾益氣復方中藥聯(lián)合腸內營養(yǎng)粉劑安素可明顯改善COPD營養(yǎng)不良狀況，并有效改善其肺組織受損情況。

[關鍵詞] 慢性阻塞性肺疾??；腸內營養(yǎng)劑；中藥復方；小鼠

[中圖分類號] R563 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）05（b）-0020-05

[Abstract] Objective To evaluate the validity and safety of a combination therapy with a compound Chinese medicine and an enteral nutrition powder ensure on chronic obstructive pulmonary diseases （COPD）. Methods Among 96 male mice， 24 mice were randomly selected as a normal control group， the other 72 mice were induced as COPD mice after 60-day smoking. These COPD mice were then randomly divided into 3 groups： COPD positive group， Ensure treatment group （0.558 g/mL Ensure， 0.1 mL/10 g mice）， combination therapy group （0.558 g/mL Ensure， 0.1 mL/10 g mice+2.5 g/mL traditional Chinese medicin， 0.06 mL/10 g mice）. The weights of all mice were monitored during the whole experimental period. The serologic tests were carried out before and at different time points （2 weeks or 5 weeks） after the treatments began. Meanwhile， histological examinations of their lungs were performed. Results Compared with the normal control group mice， COPD mice showed a lower amount of serum albumin （P < 0.05） and a higher level of serum aminotransferase activity （P < 0.05） with a much slower rate in weight gaining. After 5-week treatments with the combination therapy， compared with the COPD positive group， the amounts of serum albumin were increased gradually （P < 0.05） and the serum aminotransferase activities were returned to normal （P < 0.05）. Results from histological examinations confirmed the efficacy of the combination therapy on COPD mice. Conclusion The combination therapy with a compound Chinese medicine and an enteral nutrition Ensure is effective in improvement of poor nutrition status in COPD mice induced by smoking， and effectively improve the lung tissue damage.

[Key words] Chronic obstructive pulmonary disease； Enteral nutrition； Compound Chinese medicine； Mice

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD），簡稱慢阻肺，是一種常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，其特征是持續(xù)存在的氣流受限，可進一步發(fā)展為肺源性心臟病，甚至發(fā)生肺功能衰竭[1]。據預測，到2020年COPD將躍升為世界疾病經濟負擔第五位和第三大死因[2]。目前雖然對于COPD的確切發(fā)病機制尚不清楚，但研究發(fā)現(xiàn)COPD患者多伴有營養(yǎng)不良癥，造成病情進行性加重，反復發(fā)作，導致該病病死率逐年升高[3]。因此，營養(yǎng)狀況被公認是影響COPD患者預后的獨立危險因素[4]。據報道，腸內營養(yǎng)粉劑在一定程度上可改善COPD患者的營養(yǎng)狀況[5]。此外，傳統(tǒng)中醫(yī)藥在治療COPD上也有其獨特療效，可提高整體免疫功能達到改善癥狀、減少疾病急性發(fā)作次數(shù)等作用[6]。為進一步了解傳統(tǒng)中藥組成的健脾益氣復方中藥顆粒劑治療COPD的效果，本實驗通過煙熏法建立小鼠COPD模型，并通過不同治療方法，監(jiān)測小鼠體重、血清學檢測指標及進行肺組織切片檢查等方法，評估該復方中藥顆粒劑聯(lián)合腸內營養(yǎng)粉劑治療COPD的有效性與安全性。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級雄性健康ICR小鼠96只，6～7周齡，由福建醫(yī)科大學實驗動物中心提供，生產許可證號為SCXK（閩）2012-0001，實驗動物合格證號為0002359。實驗小鼠飼養(yǎng)于12 h光照/12 h黑暗的SPF級環(huán)境中，自由攝食和飲水，動物適應1周[體重（20±3）g]后進行實驗。

1.2 藥品與試劑

袋裝健脾益氣復方中藥顆粒劑（批號為5113541，廣東一方有限公司生產），每袋由黨參15 g、茯苓10 g、白術10 g、黃芪10 g、桔梗6 g、薏苡仁15 g、陳皮6 g、甘草3 g生藥組成。濃縮后顆粒劑克數(shù)與生藥克數(shù)的比例分別為黨參1∶3.3，茯苓1∶20，白術1∶3.3，黃芪1∶5，桔梗1∶4，陳皮1∶6，薏苡仁1∶10.7，甘草1∶6。由廈門大學附屬福州第二醫(yī)院提供。成人用量為：每日1次，每次1袋，以300 mL溫飲用水沖服。本實驗中將該復方中藥顆粒劑溶解于水配置成10倍于人單位公斤體重溶液（即2.5 g/mL），按0.06 mL/10 g小鼠體重給小鼠灌服，每日1次。腸內營養(yǎng)粉劑安素（Ensure），美國雅培公司生產，400 g/聽，每100克粉劑含蛋白質15.9 g，碳水化合物60.7 g，脂肪15.9 g，以及多種礦物質和維生素微量元素，能量1 kcal/mL。作為人體部分營養(yǎng)補充，成人用量為55.8 g粉劑溫水沖調成250 mL，口服，每日1次。配置成5倍于人單位公斤體重溶液（即0.558 g/mL），按照0.1 mL/10 g小鼠體重灌服，每日1次。

1.3 方法

1.3.1 COPD小鼠模型建立 雄性小鼠96只，其中24只作為正常對照組（以下簡稱“對照組”），其余72只進行煙熏造模：置入熏煙染毒箱（50 cm×40 cm×35 cm，54 L）內熏紅金龍牌香煙（焦油量8 mg，煙氣煙堿量0.5 mg，煙氣一氧化碳量11 mg）煙霧，30 min/次，1次/d（每次5支煙），每周休息1 d，煙熏造模60 d。小鼠體重出現(xiàn)明顯下降，呈現(xiàn)倦怠、嗜睡等癥狀；血清學檢測指標出現(xiàn)顯著異常（包括血清總蛋白、血清白蛋白含量的下降等）；肺組織切片明確顯示COPD病理特點，由此認為COPD小鼠造模成功。

1.3.2 分組與給藥 煙熏60 d后，將72只煙熏造模小鼠采用簡化分層隨機法（也稱簡化均衡隨機法，即將小鼠按照體重大小順序排列，分組時依次從隨機數(shù)字表中順序取數(shù)，把每次取得的數(shù)字除以組數(shù)，所得余數(shù)作為這一輪開始分配的組次，從該組開始順次每組分配一只，然后再取下個隨機數(shù)，除以組數(shù)，所得余數(shù)作為下一輪開始分配的組次，順次每組分配一只，直至分完所有動物為止）分為3組：COPD模型組（以下簡稱“模型組”）、安素治療組（以下簡稱“治療組”）、中藥聯(lián)合安素治療組（以下簡稱“聯(lián)合組”）。對照組和模型組小鼠均按0.1 mL/10 g小鼠體重的劑量灌服生理鹽水；治療組小鼠用5倍人單位公斤體重安素（0.558 g/mL）按0.1 mL/10 g小鼠體重劑量灌服；聯(lián)合組小鼠用10倍人單位公斤體重中藥（2.5 g/mL）按0.06 mL/10 g小鼠體重劑量灌服及5倍人單位公斤體重安素溶液按0.1 mL/10 g小鼠體重劑量灌服。上述給藥均每日1次，連續(xù)5周。每日給藥前稱重小鼠，并作為該日給藥量的計算依據。

1.3.3 指標與檢測 從煙熏造模至實驗結束期間，在對所有小鼠進行體重監(jiān)測的同時，分別在給藥前、給藥后2周及5周將各組小鼠隨機選取8只采血測血清總蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶含量，評估不同治療方案的有效性與安全性。此外，通過對COPD小鼠肺組織病理切片觀察，可進一步驗證不同治療方案對COPD肺組織病理改變的改善程度。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用GB-STAT統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據分析，符合正態(tài)分布的計量資料數(shù)據用均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析法，使用LSD-t法進行驗后多重比較。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同治療方案對COPD小鼠體重的影響

進行煙熏法建立小鼠COPD模型的早期（即煙熏4 d之內），對照組與模型組小鼠體重無明顯差異，但隨煙熏時間延長，模型組小鼠體重出現(xiàn)明顯降低（煙熏后4～10 d），煙熏10 d后小鼠體重維持在相對穩(wěn)定范圍（煙熏后10～16 d），之后逐漸適應了煙熏環(huán)境而表現(xiàn)為體重開始反彈性增加（圖1）。盡管煙熏后期小鼠的體重處于增長態(tài)勢，但這些小鼠的活躍度和活動性均明顯下降，表現(xiàn)為倦怠、嗜睡等現(xiàn)象。

通過連續(xù)5周不同給藥方案的治療，模型組小鼠體重始終保持較低水平；治療組小鼠體重與模型組無明顯差異；而聯(lián)合組小鼠在給藥10 d（即實驗天數(shù)為70 d）后，體重出現(xiàn)逐步攀升現(xiàn)象，再經過10 d的修復時間（即實驗天數(shù)為80 d），小鼠基本達到對照組小鼠的體重水平（圖2）。

2.2 不同治療方案對COPD小鼠營養(yǎng)性指標的影響

血清學指標檢測顯示：煙熏60 d后小鼠的血清總蛋白及白蛋白含量明顯降低，相關肺組織切片出現(xiàn)明顯纖維組織增生、肺泡數(shù)目顯著減少等現(xiàn)象，進一步確認了COPD小鼠模型的成功建立。在不同治療方案下，小鼠的血清總蛋白含量、血清白蛋白含量及血清球蛋白含量的檢測顯示：給藥前模型組小鼠的總蛋白及白蛋白含量處于較低水平，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。治療后2周及5周模型組小鼠總蛋白及白蛋白含量仍較低，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。治療組小鼠和聯(lián)合組小鼠，在治療后第2周其總蛋白含量和白蛋白含量基本恢復到正常水平，與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。與此同時，所有小鼠的血清球蛋白含量差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表1～3。

2.3 不同治療方案對COPD小鼠安全性指標的影響

對照組小鼠的谷丙轉氨酶活性及谷草轉氨酶活性在整個實驗過程均無明顯波動；與之相反，模型組小鼠的谷丙轉氨酶活性大幅度上升，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），且該酶的活性隨著時間的推移呈遞增趨勢。治療組小鼠谷丙轉氨酶活性基本被控制在給藥前水平，但與對照組相比，其谷丙轉氨酶活性依然顯著偏高（P < 0.05）。聯(lián)合組小鼠在用藥后谷丙轉氨酶活性逐步恢復降低，治療5周后其谷丙轉氨酶活性與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），提示其谷丙轉氨酶活性已基本恢復正常。見表4。

本研究發(fā)現(xiàn)，經煙熏60 d建立的COPD小鼠模型，其谷草轉氨酶活性與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），但2周后的血清學指標監(jiān)測發(fā)現(xiàn)其谷草轉氨酶活性顯著提高（P < 0.01），并持續(xù)到實驗結束。治療組小鼠的谷草轉氨酶活性出現(xiàn)一定回落趨勢，但治療5周后與對照組相比，差異仍有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。聯(lián)合組谷草轉氨酶活性明顯下降，治療5周后與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），提示該組小鼠谷草轉氨酶活性已基本恢復正常。見表5。

2.4 不同治療方案對COPD小鼠肺組織切片的影響

對不同治療方案持續(xù)治療5周的COPD小鼠進行肺組織病理切片檢查結果可見：對照組小鼠的呼吸道及肺泡上皮結構完整，平滑肌完整未見纖維組織增生，肺泡組織形態(tài)均勻，肺泡區(qū)炎癥細胞浸潤較少；相反地，模型組小鼠的支氣管管腔顯著增厚，出現(xiàn)纖維組織增生，各級支氣管管壁、血管黏膜下和周圍肺組織伴有大量炎性細胞浸潤，肺泡壁變薄，肺泡腔擴大，部分融合形成肺大泡，肺泡數(shù)目顯著減少。與模型組比較，治療組小鼠的支氣管管腔增厚情況明顯減輕，黏液栓形成減少，纖維組織增生減輕，各級支氣管管壁、血管黏膜下和周圍肺組織炎性細胞浸潤相對減少，肺泡破壞數(shù)目也明顯減少；聯(lián)合組小鼠的肺組織切片中無明顯支氣管管腔增厚情況，黏液栓形成也顯著減少，纖維組織增生不明顯，各級支氣管管壁、血管黏膜下和周圍肺組織炎性細胞浸潤也較少，肺泡破壞數(shù)目較少，證實了該聯(lián)合療法對COPD小鼠的治療作用。見圖3。

3 討論

COPD是病死率呈上升趨勢的少數(shù)慢性疾病之一，具有病程長、病情反復、合并癥多、病死率高等特點[7]。目前用于COPD患者病情評價的方法很多，各有其優(yōu)缺點及應用限[8]。其中，血細胞計數(shù)和血紅蛋、總蛋白、白蛋白、前白蛋白、三酰甘油、膽固醇以及各類免疫球蛋白量是常用的實驗室指標[9]。此外，體重下降是COPD患者全身炎癥的反映，是COPD進程中獨立的影響因素[10]，也是其預后的重要評判指標之一。COPD的病理學改變主要發(fā)生于中央氣道、外周氣道、肺實質和肺的血管系統(tǒng)[11]。因此，本實驗通過監(jiān)測COPD小鼠體重，比較治療前后小鼠血清總蛋白、白蛋白、球蛋白的含量差異以及觀察小鼠肺組織的病理切片作為評判COPD小鼠造模成功的標準和對各治療方案效果的評估。結果顯示：進行60 d煙熏的小鼠均出現(xiàn)了COPD的癥狀。

據報道，在并發(fā)呼吸衰竭的COPD患者中約70%存在營養(yǎng)不良[12-13]，出現(xiàn)營養(yǎng)不良的主要原因在于：①機體耗能量增加；②胃腸道消化吸收功能下降；③長期處于炎癥發(fā)生階段，機體持續(xù)發(fā)熱、感染、應激反應等加劇了能量消耗，加重患者營養(yǎng)不良[14]。毋庸置疑，對患者進行針對性的營養(yǎng)支持，實施個體化營養(yǎng)干預及時改善患者的營養(yǎng)狀況具有重要的臨床意義[15-16]。本實驗中采用的腸內營養(yǎng)粉劑安素，其主要成分為蛋白質、碳水化合物、脂肪、多種礦物質和維生素微量元素，可使患者的糖脂代謝、營養(yǎng)狀況等不同程度獲益[17]，對高齡伴有營養(yǎng)障礙的患者能明顯提高蛋白水平、降低炎性反應等[18]。

此外，中醫(yī)學認為COPD患者長期咳嗽、咳痰、氣喘，耗損肺氣，而脾與肺有土金相生的母子關系，日久致脾氣耗損，即所謂“肺病及脾，子盜母氣”。根據中醫(yī)“虛則補其母”“肺主氣，脾生氣”理論，采用益氣健脾法治療，既健脾，又益肺[19]。本研究采用的健脾益氣復方中藥，其主要成分為黨參、茯苓、白術、黃芪、桔梗、薏苡仁、陳皮、甘草。其中，黨參補中益氣，和胃生津；茯苓健脾淡滲利水；白術燥濕利水；茯苓和白術一燥一滲，燥濕與滲濕相結合，使水濕外除[20]。黃芪補氣；桔梗升清，宣肺利氣，化痰，并有載藥上行之功；薏苡仁健脾滲濕；陳皮理氣健脾；甘草和中益氣。諸藥合用，共成健脾益氣、滲濕化痰之功。實驗結果表明，采用健脾益氣復方中藥聯(lián)合安素治療方法既可有效改善體內營養(yǎng)狀況，又有助于改善脾胃功能促進營養(yǎng)吸收及緩解肺功能損傷等作用。

需要指出的是，本研究中利用煙熏法建立小鼠COPD模型后，采用健脾益氣復方中藥聯(lián)合腸內營養(yǎng)劑安素的治療方案中涉及的劑量配比屬經驗性選擇，二者是否有更佳配比方案，仍有待進一步探討。

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（收稿日期：2017-01-21 本文編輯：程 銘）