陳龍琴，于帥，樂(lè)家新，肖征

(中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院海南分院檢驗(yàn)中心海南三亞572013)

冷凝集對(duì)XS-4000i自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的影響及處理

陳龍琴，于帥，樂(lè)家新，肖征

(中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院海南分院檢驗(yàn)中心海南三亞572013)

目的探討冷凝集對(duì)XS-4000i自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢查結(jié)果的影響及處理方法。方法同一冷凝集標(biāo)本分別采用手握標(biāo)本10 min，手握20 min，37℃水浴標(biāo)本30 min，血漿置換和置換血漿加手握10 min，進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)，比較五種方法的效果差異。結(jié)果手握10 min、手握20 min和置換血漿加手握10 min均獲得滿(mǎn)意的血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果，MCHC值由540 g/L降至361～376 g/L，血漿置換和37℃水浴標(biāo)本30 min效果較差，MCHC降至426～455 g/L。結(jié)論手握10 min、手握20 min和置換血漿加手握均可以用于冷凝集標(biāo)本血常規(guī)檢測(cè)的前處理。

冷凝集；XS-4000i；血細(xì)胞分析儀

血液冷凝集素綜合征是一種當(dāng)血液溫度低于某一特定溫度時(shí)，循環(huán)中自身抗體就會(huì)與紅細(xì)胞抗原相結(jié)合的自身免疫性疾病。冷凝集閾值溫度很少高于30℃，通常低于25℃，無(wú)癥狀患者尤其如此[1]。而若室溫條件發(fā)生凝集即會(huì)影響血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果。由于冷凝集素主要為IgM，少部分是IgG和IgA，而IgM抗體對(duì)紅細(xì)胞I類(lèi)抗原具有特異性，除直接對(duì)紅細(xì)胞有作用外，也可影響淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)，使白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)的結(jié)果假性減低?，F(xiàn)已有冷凝素對(duì)德國(guó)BAYER公司生產(chǎn)的ADVIA-120，日本Sysmex公司生產(chǎn)的SF-3000和中國(guó)邁瑞公司生產(chǎn)BC3000三類(lèi)不同儀器檢測(cè)影響的報(bào)道，此三種設(shè)備采用的細(xì)胞化學(xué)染色加光散射法和電阻抗法，而對(duì)于細(xì)胞熒光染色法加電阻抗法的Sysmex XS-4000i檢測(cè)影響暫未見(jiàn)報(bào)道，尤其海南地區(qū)氣溫較高，冷凝集發(fā)生較少，容易被忽視。

1 資料與方法

1.1 患者及標(biāo)本情況患者以頭痛、嘔吐入急診科，總膽紅素26.6 μmol/L，直接膽紅素8.8 μmol/L，室溫處于細(xì)沙樣凝集狀態(tài)，管壁可見(jiàn)細(xì)小顆粒，MCHC 540 g/L高于正常值上限的360 g/L，且在紅細(xì)胞直方圖中發(fā)現(xiàn)異常波峰，見(jiàn)圖1，離心后標(biāo)本血漿未見(jiàn)乳糜、溶血等可引起血清濁度增大的因素。

1.2 儀器與試劑日本Sysmex公司生產(chǎn)的XS-4000i自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套原裝試劑，該儀器利用電阻抗原理檢測(cè)紅細(xì)胞和血小板，用十二磺基硫酸鈉法測(cè)量血紅蛋白濃度，半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞原理結(jié)合化學(xué)熒光染色技術(shù)進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(lèi)[2]。

圖1 標(biāo)本側(cè)壁可見(jiàn)凝集顆粒，血常規(guī)結(jié)果可見(jiàn)MCV 102.7 fL，MCH55.5 ng，MCHC 540 g/L。Flag標(biāo)記紅細(xì)胞凝集？渾濁/HB干擾？；RBC直方圖可見(jiàn)雙凸特征。

1.3標(biāo)本處理方法及流程對(duì)同一標(biāo)本在五種不同處理?xiàng)l件下進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)，分別為手握標(biāo)本10 min，手握標(biāo)本20 min，37℃水浴標(biāo)本30 min，使用生理鹽水置換離心后標(biāo)本上層70%血漿，置換血漿+手握10 min，每次檢測(cè)后室溫放置半小時(shí)。MCHC最低值且涂片時(shí)紅細(xì)胞為游離狀態(tài)為最終結(jié)果，同時(shí)對(duì)冷凝集標(biāo)本進(jìn)行涂片檢查以發(fā)現(xiàn)血常規(guī)改變?cè)颉?shí)驗(yàn)室溫度20℃。

2 結(jié)果

血常規(guī)檢測(cè)中，手握10 min、手握20 min和置換血漿+手握均可使MCHC轉(zhuǎn)為正常，而水浴和置換血漿暫未改善冷凝集對(duì)血常規(guī)結(jié)果的影響，其中置換血漿+手握MCHC效果最好，可將MCHC值降至最低，見(jiàn)表1。在保溫處理中手握法和置換血漿+手握相對(duì)于冷凝集的影響中可觀察到保溫WBC、RBC、MCV、HCT、MCH、MCHC變化明顯，而Hb、MCV、PLT、白細(xì)胞分類(lèi)比例變化不明顯。同時(shí)冷凝集在涂片和鏡檢可觀察到明顯的紅細(xì)胞凝集團(tuán)，其中紅細(xì)胞凝集團(tuán)中可見(jiàn)白細(xì)胞和血小板。在紅細(xì)胞直方圖中可觀察到處理?xiàng)l件有效的手握10 min、手握20 min和置換血漿+手握方法，均可見(jiàn)異常波峰減低至正常，見(jiàn)圖2和圖3。

表1 不同處理?xiàng)l件的紅細(xì)胞冷凝集標(biāo)本在Sysmex XS-4000i儀器的血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果

圖2 (左圖)保溫處理前可見(jiàn)RBC聚集，部分WBC包裹于紅細(xì)胞凝集團(tuán)中，且涂片可見(jiàn)顆粒(×1 000)；(右圖)置換血漿+手握后在37℃孵箱進(jìn)行涂片可見(jiàn)涂片和鏡下細(xì)胞分布轉(zhuǎn)為正常(×1 000)。

圖3 手握10 min、手握20 min、置換血漿+手握均使得異常紅細(xì)胞峰降低，而水浴處理和置換血不能有效降低異常紅細(xì)胞峰。

3 討論

XT 4000i的Hb檢測(cè)采用光電比色法，利用溶血?jiǎng)┝呀饧t細(xì)胞釋放出Hb，后者與溶血?jiǎng)┲械挠嘘P(guān)成分結(jié)合形成Hb衍生物，采用特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度變化換算出HBG含量。本研究中Hb未受冷凝集影響，表明凝集的紅細(xì)胞已全部被溶血?jiǎng)┢茐?。但有?bào)道顯示，嚴(yán)重冷凝集標(biāo)本會(huì)形成不均勻的凝集塊，造成紅細(xì)胞吸樣不均勻或者凝集塊不能被完全溶解而使Hb假性偏高或假性偏低，需要結(jié)合標(biāo)本狀態(tài)綜合判斷[3]。

XT 4000i的RBC計(jì)數(shù)、PLT計(jì)數(shù)、HCT、MCV、MCH和MCHC均采用電阻抗方法測(cè)定，其中受冷凝集影響RBC和HCT假性減低，MCH和MCHC假性增高，PLT和MCV未見(jiàn)明顯改變。電阻抗法檢測(cè)紅細(xì)胞和血小板時(shí)，細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí)，形成相應(yīng)大小的脈沖，脈沖的多少即紅細(xì)胞和血小板的數(shù)目，高度代表單個(gè)脈沖細(xì)胞的體積，當(dāng)聚集的紅細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí)，不能作為有效體積紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，進(jìn)入紅細(xì)胞分布區(qū)域，導(dǎo)致紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)細(xì)胞數(shù)量減少，但正常體積范圍的紅細(xì)胞被計(jì)數(shù)并計(jì)算MCV值，因此MCV受影響較小。因HCT=MCV×RBC，RBC減低則HCT減低[4]。血小板體積較小且數(shù)量較多不易受紅細(xì)胞包裹影響，PLT計(jì)數(shù)未受明顯影響，同沙超敏等[5]和梁培松等[3]報(bào)道一致。另外對(duì)于冷抗體自身免疫性溶血貧血和陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿的患者還需要注意保溫室出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，大量紅細(xì)胞碎片使PLT計(jì)數(shù)假性增高[6]。

XS-4000i中的WBC和白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)采用的是細(xì)胞化學(xué)熒光染色加散色法檢測(cè)，其中WBC受冷凝集影響發(fā)生假性減低，白細(xì)胞分類(lèi)未受冷凝集影響。當(dāng)紅細(xì)胞凝集時(shí)不能短時(shí)間內(nèi)被溶血?jiǎng)┤芙?，光散射法雖能通過(guò)高角度檢測(cè)WBC內(nèi)部結(jié)構(gòu)，通過(guò)低角度檢測(cè)WBC體積來(lái)識(shí)別WBC，但對(duì)包裹于未被溶解紅細(xì)胞團(tuán)中的WBC無(wú)法檢測(cè)，致使WBC計(jì)數(shù)假性偏低，也只會(huì)出現(xiàn)假性偏低的可能[7]。另外通過(guò)血涂片結(jié)果和白細(xì)胞分類(lèi)未受冷凝集影響可推測(cè)，冷凝集所致的紅細(xì)胞聚集形成的白細(xì)胞包裹是沒(méi)有選擇性，即冷凝集狀態(tài)下白細(xì)胞分類(lèi)占比仍然是可信的。

相對(duì)于手握10 min、手握20 min和置換血漿，置換血漿+手握顯示出最佳MCHC效果，然而置換血漿需把握好血漿置換量，操作中避免震蕩，且最多僅能吸取上清的70%，否則容易吸取到PLT和WBC，導(dǎo)致PLT和WBC假性減低[3]。本研究中手握20 min同置換血漿+手握的血常規(guī)結(jié)果較接近，手握20 min的結(jié)果可作為真實(shí)結(jié)果，但如果對(duì)于冷凝集效價(jià)高，閾值溫度也高的標(biāo)本單純通過(guò)保溫難以獲得效果，仍需要通過(guò)置換血漿降低冷凝集效價(jià)，同時(shí)聯(lián)合保溫措施才能得到真實(shí)可靠的結(jié)果。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中水浴30 min和置換血漿處理方法，對(duì)冷凝集未見(jiàn)改善，原因分析為水浴箱距離血細(xì)胞分析儀距離遠(yuǎn)，在運(yùn)輸過(guò)程中標(biāo)本表面水分蒸發(fā)，溫度下所致。而血漿置換法因處理過(guò)程中未對(duì)鹽水進(jìn)行溫浴處理，且置換后缺少保溫措施，使得冷凝集素活化。置換血漿+手握10 min剛好彌補(bǔ)了置換血漿時(shí)未保溫的問(wèn)題，使得結(jié)果轉(zhuǎn)為正常。如果有條件實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)在血細(xì)胞分析儀旁邊放置一小型血液加溫器，效果將更加明顯。

冷凝集素綜合征可見(jiàn)于支原體肺炎、淋巴瘤、自身免疫性溶血性貧血、傳染性單核細(xì)胞增多癥、上呼吸道感染、乙肝、肺癌、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)等疾病[1]。在一項(xiàng)回顧性?xún)和гw肺炎中發(fā)現(xiàn)，在疾病發(fā)展的中間一段時(shí)間可以出現(xiàn)冷凝集實(shí)驗(yàn)百分之百陽(yáng)性，而受檢測(cè)時(shí)間的限制首次發(fā)現(xiàn)冷凝集的陽(yáng)性率在38.3%～67.5%[8]。三亞地區(qū)氣溫較高，出現(xiàn)冷凝集患者多為冷凝集素閾值溫度寬或效價(jià)較高，具有一定的臨床意義，有待進(jìn)一步為臨床提供冷凝集信息。尤其對(duì)于外科手術(shù)患者，室溫冷凝集將極大增加術(shù)中意外風(fēng)險(xiǎn)。

總之，對(duì)于冷凝集標(biāo)本需要慎重對(duì)待，對(duì)于有意義的冷凝集素抗體應(yīng)及時(shí)同臨床溝通獲得雙方的知情，而對(duì)于實(shí)驗(yàn)室檢查應(yīng)注意紅細(xì)胞直方圖是否有異常波峰，是否有異常紅細(xì)胞凝集報(bào)警，是否有標(biāo)本凝集現(xiàn)象，是否有MCHC＞360 g/L，并及時(shí)同科室值班人員交接班，避免漏檢漏診。

[1]樂(lè)家新,馬駿龍,徐菡,等.紅細(xì)胞冷凝集對(duì)不同類(lèi)型血細(xì)胞分析儀檢測(cè)結(jié)果的影響探討[J].醫(yī)療衛(wèi)生裝備,2009,30(2):69-71.

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R446.11+3

B

1003—6350（2017）12—2041—03

2017-01-11)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.12.051

于帥。E-mail：18210508221@163.com