曹榮安，徐秀麗，苗家尉，郭增旺，李良玉，賈 建，王長遠(yuǎn),*

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 大慶 163319；2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319；3.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)加工品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心（大慶），黑龍江 大慶 163319；4.大慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，黑龍江 大慶 163311；5.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 國家雜糧工程技術(shù)研究中心，黑龍江 大慶 163319）

龍膽多糖的結(jié)構(gòu)表征及其體外免疫活性

曹榮安1,2,3，徐秀麗4，苗家尉1，郭增旺1，李良玉5，賈 建1，王長遠(yuǎn)1,*

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 大慶 163319；2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319；3.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)加工品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心（大慶），黑龍江 大慶 163319；4.大慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，黑龍江 大慶 163311；5.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 國家雜糧工程技術(shù)研究中心，黑龍江 大慶 163319）

對龍膽多糖的結(jié)構(gòu)和生物活性進(jìn)行研究，采用甲基化分析多糖的鏈接方式。結(jié)果表明，龍膽多糖中存在（→1）末端和（1→5）-鏈接的呋喃阿拉伯糖基、（1→4）-鏈接的吡喃半乳糖基，同時也存在其他含量比較少的糖基和分支。龍膽多糖中糖醛酸是以（1→4）-鏈接的半乳糖醛酸方式存在，對龍膽多糖的生物活性起著重要的作用。龍膽多糖可以促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞增殖并產(chǎn)生NO，而且NO的產(chǎn)生是通過一氧化氮合成酶mRNA上調(diào)實(shí)現(xiàn)的，同時龍膽多糖可以上調(diào)細(xì)胞因子COX-2和TNF-α的mRNA表達(dá)水平。

龍膽；多糖；結(jié)構(gòu)；免疫活性

曹榮安, 徐秀麗, 苗家尉, 等. 龍膽多糖的結(jié)構(gòu)表征及其體外免疫活性[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(11): 168-173. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201711027. http://www.spkx.net.cn

CAO Rong’an, XU Xiuli, MIAO Jiawei, et al. Structural characterization and in vitro immunomodulatory activity of polysaccharides from Gentiana scabra Bunge[J]. Food Science, 2017, 38(11): 168-173. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201711027. http://www.spkx.net.cn

龍膽（Gentiana scabra Bunge）為龍膽科植物條葉龍膽、龍膽、三花龍膽或滇龍膽的干燥根及根莖[1]，龍膽始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品[2]，味苦、性寒，為清肝膽濕熱，瀉下焦郁火之常用中藥[3]，具有保肝護(hù)肝[4-5]、健胃[6]、降血脂[7]、抗炎[8-9]、抗甲亢[10]、升血糖[6]、抗氧化[11]、抗真菌[12]和降血壓[13]的作用。目前對于龍膽中化學(xué)功效成分的研究主要集中在三萜類、黃酮類、環(huán)烯醚萜類、口山酮類、生物堿類等[14-17]，對龍膽多糖（Gentiana scabra Bunge polysaccharide，GSP）的研究不深入。目前對于龍膽多糖的研究以提取方法為主，大多采用水提醇沉法，由于龍膽原料產(chǎn)地和提取條件的差異，不同研究者得到的最佳提取參數(shù)也不同，但大致范圍是提取溫度90～100 ℃、料液比1∶25～1∶30（m/V）、時間3 h、提取2～3 次，龍膽多糖得率為12.59%～14.00%，同時也有研究者利用超聲波和微波輔助提取龍膽多糖[18-22]。對于龍膽多糖的生物活性也有部分研究，報道稱其具有體內(nèi)降血脂[7]、抗腫瘤[23-24]、免疫調(diào)節(jié)[25]、體外抗凝血[26]、抗氧化[20]作用。從以上可知，目前對于龍膽多糖的研究集中在提取工藝和生物活性上，鮮少有對其鏈接方式的研究，更缺乏對其免疫功能和機(jī)理的深入研究。本課題組經(jīng)過前期研究提取得到了龍膽多糖，并分析了其分子特性[27]，本實(shí)驗(yàn)對其進(jìn)行鏈接方式和生物活性進(jìn)行了研究，為龍膽多糖的研究利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

龍膽購自安徽亳州茲元堂，龍膽多糖為課題組自行提?。ɑ瘜W(xué)組成為59.0%總糖、12.8%蛋白質(zhì)、6.8%硫酸根和26.7%糖醛酸）[27]。

R A W 2 6 4.7細(xì)胞 美國模式培養(yǎng)物集存庫（ATCC）；RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基、青霉素/鏈霉素、牛血白清蛋白 美國Lonza公司；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、Griess（改良型） 美國Sigma-Aldrich公司；EZ-cytox細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒（2-（4-碘苯）-3-（4-硝基苯）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四氮唑鈉鹽，WST-1） 韓國Daeillab公司；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）所用試劑 美國Invitrgen Solgent公司；引物韓國Bioneer公司。其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Excella ECO-170細(xì)胞培養(yǎng)箱 英國New Brunswick Scientific公司；EL800酶標(biāo)儀 美國Biotech公司；2720PCR擴(kuò)增儀 美國Applied Biosystems公司；MP-300V電泳儀 美國Major Science公司；6890N/MSD5973氣相色譜-質(zhì)譜（gas chromatography-mass spectrometer，GC-MS）聯(lián)用儀 美國Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 鏈接方式分析

參考Ciucanu等[28]的方法并稍作改動，樣品處理全過程需要氮?dú)獗Ｗo(hù)。3 mg龍膽多糖樣品溶解在0.5 mL二甲基亞砜中，加入碘甲烷進(jìn)行甲基化，之后加入三氟乙酸，100 ℃水解6 h，分別加入硼氘化鈉（NaBD4）和無水醋酸進(jìn)行還原和乙?；?，制得部分甲基化的糖醇乙酸酯衍生物。1 μL衍生物注入到GC-MS聯(lián)用儀中進(jìn)行分析，采用的是HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），載氣氦氣流速為1.2 mL/min，升溫程序?yàn)?60～210℃（10 min之內(nèi)），之后10 min升溫到240 ℃，速率為5 ℃/min，保持在250 ℃，進(jìn)樣口溫度也保持在250 ℃。用電子轟擊源分析，電子能量為70 eV，質(zhì)量掃描范圍為m/z 35～450，根據(jù)GC圖的出峰時間和MS的離子峰與不同鏈接方式的多糖分別進(jìn)行對比從而確定鏈接方式。

1.3.2 多糖中糖醛酸的還原

100 mg樣品溶解在10 mL蒸餾水中，加入200 mg 1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，之后加入鹽酸溶液調(diào)控pH值在4.76左右，反應(yīng)1.5 h。加入10 mL 2 mol/L硼氫化鈉溶液還原1.5 h，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH 7，室溫條件下穩(wěn)定1.5 h，3 500 D膜透析后凍干。

1.3.3 多糖對細(xì)胞毒性測定

細(xì)胞增殖采用WST-1細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒，具體方法如下：100 μL RAW264.7細(xì)胞（1×106細(xì)胞/mL）加入96微孔板中，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)24 h，棄去上清液，細(xì)胞中加入200 μL不同質(zhì)量濃度的多糖溶液（2、5、10 μg/mL），培養(yǎng)液作為空白組。培養(yǎng)24 h后棄去上清液，細(xì)胞中加入110 μL體積分?jǐn)?shù)10% WST-1溶液，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h，用酶標(biāo)儀在450 nm波長處測定吸光度，按下式計算細(xì)胞增殖率。

式中：A樣品為樣品的吸光度；A空白為空白組的吸光度。

1.3.4 多糖激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO測定

多糖激活巨噬細(xì)胞RAW264.7產(chǎn)生NO的量利用巨噬細(xì)胞的上清液進(jìn)行測定，具體方法如下：100 μL RAW264.7細(xì)胞（1×106細(xì)胞/mL）加入96微孔板中，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)24 h，棄去上清液，細(xì)胞中加入200 μL不同質(zhì)量濃度的多糖溶液（2、5、10 μg/mL），1 μg/mL LPS作為陽性對照，培養(yǎng)24 h。上清液中NO含量按照Green等[29]的方法進(jìn)行測定，即100 μL上清液加入100 μL Griess試劑，室溫條件下避光反應(yīng)10 min后在540 nm波長處用酶標(biāo)儀測定吸光度，以亞硝酸鈉溶液為標(biāo)準(zhǔn)品，將樣品吸光度帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計算出NO產(chǎn)量。

1.3.5 RT-PCR檢測細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)

參考Cao Rong’an等[30]的方法進(jìn)行，過程如下：1 mL RAW264.7細(xì)胞（1×106細(xì)胞/mL）加入到24 孔板中，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)24 h，棄去上清液，細(xì)胞中分別加入1 mL LPS（2 μg/mL）和不同質(zhì)量濃度的多糖樣品溶液（2、5、10 μg/mL）培養(yǎng)18 h。之后用Trizol試劑對細(xì)胞進(jìn)行裂解提取總RNA，調(diào)整質(zhì)量濃度后以RNA為模板經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再以cDNA為模板加入引物后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，采用的引物序列為：一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）為5’-CCCTTCCGAAGTTTCTGGCAGCAGC-3’（正）和5’-GGCTGTCAGAGCCTCGTGGCTTTGG-3’（反）；環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）為5’-CCCCCACAGTCAAAGACACT-3’（正）和5’-GAGTCCATGTTCC AGGAGGA-3’（反）；腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）為5’-A T G A G C A C A G A A A G C A T G A T C-3’（正）和5’-TACAGGCTTGTCACTCGAATT-3’（反）；β-肌動蛋白（β-a c t i n）為5’-TGGAATCCTGTGGC ATCCATGAAAC-3’（正）和5’-TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTCCG-3’（反）。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳后照相，得到的條帶利用Quantity One 1-D Analysis Software進(jìn)行分析，之后同β-肌動蛋白進(jìn)行對比得到細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的相對濃度。1.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 龍膽多糖的鏈接方式

圖1 龍膽多糖部分甲基化糖醇乙酸酯衍生物的總離子流色譜圖和質(zhì)譜圖Fig. 1 Total ion current chromatograms and mass spectra of partially methylated alditol acetates derivatives of the polysaccharides from Gentiana scabra Bunge

對龍膽多糖經(jīng)過衍生化得到了部分甲基化的糖醇乙酸酯衍生物，利用GC-MS分析其鏈接方式，龍膽多糖衍生物的總離子流色譜圖和質(zhì)譜圖見圖1，可以得到13 個主要的色譜峰，同時給出了1、4、9三個主峰的質(zhì)譜圖。各碎片的質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜NIST庫和文獻(xiàn)[31]進(jìn)行比對分析，質(zhì)譜解析結(jié)果列于表1。殘基中主要存在2,3,5-tri-O-甲基呋喃阿拉伯糖醇乙酸酯、2,3-di-O-甲基呋喃阿拉伯糖醇乙酸酯、2,3,6-tri-O-甲基吡喃半乳糖醇乙酸酯，這3 種糖醇乙酸酯的相對峰面積分別為25.24%（峰1）、17.55%（峰4）和26.32%（峰9），說明龍膽多糖殘基中存在（→1）和（1→5）-鏈接的呋喃阿拉伯糖基、（1→4）-鏈接的吡喃半乳糖基，同時也存在其他比例比較小的糖基和分支。

表1 龍膽多糖和還原后龍膽多糖的甲基化分析結(jié)果Table 1 Methylation analysis of the polysaccharides and reduced polysaccharides from Gentiana scabra Bunge

在分析龍膽多糖的化學(xué)組成時檢測到有26.72%的糖醛酸，為了確定糖醛酸的類型和鏈接方式，首先對龍膽多糖進(jìn)行糖醛酸的還原，RGSP中糖醛酸含量為9.96%，下降了16.76%，同時也對其進(jìn)行甲基化分析，質(zhì)譜解析結(jié)果見表1。還原后2,3,6-tri-O-甲基吡喃半乳糖醇乙酸酯的比例為38.34%，同還原前相比升高了12.02%，而且其他糖基的比例均降低，說明龍膽多糖中糖醛酸的類型是半乳糖醛酸，而且是（1→4）-鏈接。同時也測定了RGSP的單糖組成，同龍膽多糖相比僅半乳糖的含量升高，由43.72%升高到60.45%，其他單糖比例均降低，也證實(shí)了龍膽多糖中半乳糖醛酸的存在。

2.2 促進(jìn)巨噬細(xì)胞增殖和產(chǎn)生NO

巨噬細(xì)胞同先天性免疫反應(yīng)緊密相關(guān)，在機(jī)體抵抗外界微生物和侵入細(xì)胞方面扮演重要的作用，這種免疫調(diào)節(jié)作用是通過誘導(dǎo)NO產(chǎn)生或者細(xì)胞因子釋放而實(shí)現(xiàn)的，所以其經(jīng)常被當(dāng)作體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭衼碓u價一些物質(zhì)的免疫調(diào)節(jié)作用。

首先測定龍膽多糖對巨噬細(xì)胞RAW264.7是否有毒性，方法是將龍膽多糖溶液加入到細(xì)胞中培養(yǎng)24 h后用WST-1試劑測定吸光度，同空白組相比較得到巨噬細(xì)胞的增殖率，結(jié)果見圖2。

圖2 龍膽多糖對巨噬細(xì)胞增殖的影響Fig. 2 Effect of the polysaccharides from Gentiana scabra Bunge on the proliferation of RAW264.7 cells

由圖2可知，2、5、10 μg/mL 3 個質(zhì)量濃度的龍膽多糖溶液的細(xì)胞增殖率分別為107.39%、109.03%和113.45%，呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，說明在所測定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)龍膽多糖對于RAW264.7細(xì)胞無毒性，而且可以促進(jìn)其增殖。同時，由圖2可知，RGSP也能夠促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖，呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，同龍膽多糖相比不存在顯著性差異（P＞0.05），說明龍膽多糖中的糖醛酸對激活細(xì)胞增殖不起決定性作用。

之后進(jìn)行龍膽多糖激活RAW264.7產(chǎn)生NO的研究，NO是重要細(xì)胞信使分子，廣泛參與免疫應(yīng)答在內(nèi)的機(jī)體多系統(tǒng)的生理和病理過程，例如在生物體內(nèi)參與神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用，NO合成是巨噬細(xì)胞非特異性免疫，涉及細(xì)胞溶解/細(xì)胞生長抑制的重要機(jī)制，所以NO常被用來檢測一些化合物對于細(xì)胞的免疫情況，從而評價其生物活性。

圖3 龍膽多糖對RAW246.7細(xì)胞中NO產(chǎn)量的影響Fig. 3 The amounts of NO produced by RAW264.7 cells treated with the polysaccharides from Gentiana scabra Bunge

由圖3可知，2、5、10 μg/mL三個質(zhì)量濃度的龍膽多糖溶液均可激活RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生NO，產(chǎn)量分別為7.44、20.83、29.63 μmol/L，呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，且差異顯著（P＜0.05）。RGSP也可以激活RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生NO，產(chǎn)量分別為2.52、15.45、19.70 μmol/L，不同質(zhì)量濃度處理之間差異顯著（P＜0.05），同質(zhì)量濃度龍膽多糖的NO產(chǎn)量相比較存在顯著性差異（P＜0.05），從而可以說明糖醛酸對于龍膽多糖的生物活性起著重要的作用。Hidari等[32]從海藻（Cladosiphon okamuranus）中提取得到了含有葡萄糖醛酸的巖藻多糖，糖醛酸還原成葡萄糖之后其喪失了抵抗登革熱病毒的活性，也說明了葡萄糖醛酸的存在對于多糖發(fā)揮生物活性起著重要的作用。

2.3 調(diào)控細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)

圖4 龍膽多糖對RAW264.7細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的影響Fig. 4 Effects of the polysaccharides from Gentiana scabra Bunge on cytokines mRNA expression in RAW264.7 cells

當(dāng)巨噬細(xì)胞被多糖刺激活化后會產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞因子，所以利用RT-PCR方法來檢測細(xì)胞因子mRNA表達(dá)情況，擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳后照相得到相應(yīng)的條帶，見圖4A，同時對于各細(xì)胞因子的相對表達(dá)濃度進(jìn)行分析，見圖4B～D。圖4B為iNOS mRNA表達(dá)情況，可知隨著多糖質(zhì)量濃度的升高iNOS mRNA的相對表達(dá)濃度也顯著升高（P＜0.05），呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，這一變化趨勢同NO（圖3）的變化是一致的，說明龍膽多糖激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO是通過iNOS調(diào)控而實(shí)現(xiàn)的。由圖4C、D可知，2、5、10 μg/mL 3 個質(zhì)量濃度的龍膽多糖溶液均可提高RAW264.7中COX-2和TNF-α mRNA表達(dá)的水平，隨著質(zhì)量濃度升高mRNA相對表達(dá)濃度顯著升高（P＜0.05），呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)，通過結(jié)合相應(yīng)受體調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化和效應(yīng)，調(diào)控免疫應(yīng)答。TNF-α與COX-2都與腫瘤細(xì)胞抑制相關(guān)，可以通過直接或間接的方式抑制腫瘤細(xì)胞的生長或促進(jìn)其凋亡[33-34]。龍膽多糖可以激活巨噬細(xì)胞中TNF-α和COX-2 mRNA的表達(dá)，說明了龍膽多糖可能有抑制腫瘤細(xì)胞的作用，其抑制活性和機(jī)理需要進(jìn)一步的研究。目前國內(nèi)外也有很多關(guān)于多糖生物活性的研究報道，例如從橘梗和海藻里提取得到的多糖可通過激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子而起到免疫調(diào)節(jié)作用[35-36]。同時也有體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，龍膽多糖能增加小鼠和雛雞的胸腺和脾臟指數(shù)，提高正常小鼠的吞噬指數(shù)，促進(jìn)小鼠抗體生成，促進(jìn)小鼠抗體生成，促進(jìn)雛雞免疫器官的發(fā)育，對小鼠和雛雞的免疫功能有一定的促進(jìn)作用[24-25]，進(jìn)一步研究表明龍膽多糖可不同程度地升高化療后荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，起到抗腫瘤作用[23]。

3 結(jié) 論

龍膽多糖殘基中存在（→1）和（1→5）-鏈接的呋喃阿拉伯糖基、（1→4）-鏈接的吡喃半乳糖基，同時也存在其他糖基和分支。龍膽多糖中糖醛酸的存在形式是（1→4）-鏈接的半乳糖醛酸，其對龍膽多糖的生物活性起著重要的作用。龍膽多糖可促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖并產(chǎn)生NO，同時也能夠上調(diào)COX-2和TNF-α mRNA表達(dá)的水平。本研究獲得了龍膽多糖鏈接方式和體外生物活性的相關(guān)信息，這為龍膽多糖的進(jìn)一步研究利用提供了理論參考。

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Structural Characterization and in Vitro Immunomodulatory Activity of Polysaccharides from Gentiana scabra Bunge

CAO Rong’an1,2,3, XU Xiuli4, MIAO Jiawei1, GUO Zengwang1, LI Liangyu5, JIA Jian1, WANG Changyuan1,*
(1. College of Food Science, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China; 2. College of Animal Science and Technology, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China; 3. Postdoctoral Research Station in Agricultural Products Processing Quality Supervision, Inspection and Testing Center (Daqing), Ministry of Agriculture, Daqing 163319, China; 4. Daqing Center for Food and Drug Control, Daqing 163311, China; 5. National Coarse Cereals Engineering Research Center, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China)

As an extension of our previous work, where polysaccharides were extracted and purified from the rhizomes and roots of Gentiana scabra Bunge, this study was undertaken to investigate the structure and bioactivity of the polysaccharides. The type of glycosidic linkage was elucidated by methylation analysis. The backbones of the polysaccharides consisted of (→1) terminal and (1→5)-linked arabinofuranosyl, and (1→4)-linked galactopyranosyl residues with small amounts of other residues and branches. The uronic acid contained in the polysaccharides was composed of (1→4)-linked galacturonic acid residues, which played an important role in the bioactivity of the polysaccharides. The polysaccharides could enhance the proliferation of RAW264.7 cells to produce NO due to the increased mRNA expression of NO synthetase. The polysaccharides also could upregulate the mRNA expression of the cytokines COX-2 and TNF-α.

Gentiana scabra Bunge; polysaccharide; structure; immunomodulatory activity

10.7506/spkx1002-6630-201711027

TS201.1

A

1002-6630（2017）11-0168-06引文格式：

2016-10-31

黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)2014年度校內(nèi)培育課題（XZR2014-08）；大慶市指導(dǎo)性科技計劃項(xiàng)目（zd-2016-148）；黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)“青年創(chuàng)新人才”項(xiàng)目（XRC2016-11）

曹榮安（1980—），男，講師，博士，研究方向?yàn)樯锘钚蕴烊划a(chǎn)物。E-mail：racao@163.com

*通信作者：王長遠(yuǎn)（1976—），男，教授，博士，研究方向?yàn)榧Z食、油脂及植物蛋白工程。E-mail：byndwcy@163.com