王亞雯，辛中豪，蒲玲玲，高蔚娜，石塔拉，韋京豫，鄧致榮，郭長(zhǎng)江#

(1軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，天津 300050； 2火箭軍疾病預(yù)防控制中心，北京 100071)

柑橘橘絡(luò)提取物通便作用的實(shí)驗(yàn)研究

王亞雯1*，辛中豪1*，蒲玲玲1，高蔚娜1，石塔拉1，韋京豫1，鄧致榮2#，郭長(zhǎng)江1#

(1軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，天津 300050；2火箭軍疾病預(yù)防控制中心，北京 100071)

目的：研究富含柑橘多糖和黃酮的橘絡(luò)提取物的潤(rùn)腸通便作用。方法：依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)“通便作用檢驗(yàn)方法”，將小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、陰性對(duì)照組和三劑量實(shí)驗(yàn)組(低、中、高劑量組)，經(jīng)口給予柑橘橘絡(luò)提取物1w后，通過測(cè)定小腸墨汁推進(jìn)率、首粒便排出時(shí)間和6h內(nèi)排便粒數(shù)及重量，判斷柑橘橘絡(luò)提取物對(duì)小鼠腸道蠕動(dòng)和排便功能的影響。結(jié)果：與模型對(duì)照組相比，低劑量和中劑量組提高小腸墨汁推進(jìn)率分別為65.29%和62.90%；3個(gè)劑量組的小鼠排首粒便時(shí)間顯著低于模型對(duì)照組，6h內(nèi)排便數(shù)及重量明顯增多。結(jié)論：柑橘橘絡(luò)提取物具有良好的促進(jìn)腸道蠕動(dòng)功能和排便的作用，其中中劑量組效果較好。

橘絡(luò)提取物；柑橘多糖；黃酮；通便作用

便秘是臨床上常見的癥狀之一。隨著人們的工作壓力加大及不規(guī)律生活與飲食結(jié)構(gòu)的變化，經(jīng)加工精制的低纖維食品不斷增多，導(dǎo)致了腸道蠕動(dòng)減弱、直腸肌肉無力等，出現(xiàn)便秘[1-3]。長(zhǎng)期的便秘會(huì)促使腸道細(xì)菌產(chǎn)生有毒有害物質(zhì)，易導(dǎo)致腸粘膜上皮細(xì)胞變異增生，從而誘發(fā)結(jié)直腸癌等疾病[4]。

天然柑橘橘絡(luò)富含柑橘多糖和黃酮，其中柑橘多糖來源于植物細(xì)胞壁，是一種通過α- 1，4糖苷鍵連接起來的聚半乳糖醛酸的長(zhǎng)鏈多糖聚合物[5]，是一種純天然膳食纖維，不能被人體內(nèi)消化液中的酶類所分解，部分可在大腸內(nèi)被微生物發(fā)酵分解，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，從而降低pH值，抑制腸道有害菌生長(zhǎng)，促進(jìn)有益菌增殖，增強(qiáng)腸道蠕動(dòng)[6]。同時(shí)柑橘多糖具有強(qiáng)吸水性，大約吸收自身體積的2.5倍水分，使糞便變軟而易于排出，排便排毒效果快速顯著[7]。黃酮類物質(zhì)具有抗氧化、抗血栓、抗腫瘤、抗菌消炎、抗病毒和排毒等多種作用，對(duì)物質(zhì)代謝有調(diào)節(jié)作用[8-9]。本實(shí)驗(yàn)旨在探討富含柑橘多糖和黃酮的柑橘橘絡(luò)提取物改善小鼠胃腸道功能的作用，并確定其最佳灌胃劑量。為研制基于柑橘橘絡(luò)提取物的功能性潤(rùn)腸通便制劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

柑橘橘絡(luò)提取物，由杭州絡(luò)通生物科技有限公司提供。該提取物是以柑橘橘絡(luò)和內(nèi)果皮為原料，利用低溫濃縮、萃取和膜法分離技術(shù)進(jìn)行分離和提純，再經(jīng)過巴氏滅菌等過程得到。成品為褐色懸濁液。經(jīng)過化學(xué)測(cè)定，每100mL含柑橘多糖≥2 000mg、柑橘黃酮≥400mg、總固形物≥4 500mg。復(fù)方地芬諾酯片，由常州康普藥業(yè)制藥責(zé)任公司提供(批號(hào)：1604014)，用于急慢性功能性腹瀉及慢性腸炎，過量攝入可致便秘。

1.2 動(dòng)物與分組

SPF級(jí)成年昆明小白鼠150只，雄性，體重22～25g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。采用隨機(jī)數(shù)字法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組(0.2、0.4、0.8 mL/(25g·bw)，分別相當(dāng)于人體推薦量的5、10、20倍)，同時(shí)設(shè)便秘模型對(duì)照組和陰性對(duì)照組[10]，每組15只，按0.8mL/(只·d)經(jīng)口給予等量的蒸餾水，每日1次，連續(xù)7d灌胃。

1.3 方法

參考《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)中“通便功能檢驗(yàn)方法”小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和排便實(shí)驗(yàn)，具體方法如下：

1.3.1 小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn) 各實(shí)驗(yàn)組按 1 mL/(只·d)經(jīng)口給予受試物，空白和模型對(duì)照組給予等量的蒸餾水，每天灌胃 1 次連續(xù)給與受試物 7 d。末次給樣的當(dāng)天下午，各組動(dòng)物禁食不禁水16h后，對(duì)模型對(duì)照組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組給予劑量為5mg/(kg·bw)的復(fù)方地芬諾酯溶液，灌胃量為0.2mL/(10g·bw)，陰性對(duì)照組給予等量蒸餾水。經(jīng)30min后實(shí)驗(yàn)組給予用柑橘橘絡(luò)受試物替代蒸餾水配置成的含2%墨汁的溶液(取印度墨水1 mL，加入49 mL蒸餾水配制成2%墨汁，灌胃劑量為0.1mL/(10g·bw)。用墨汁與灌胃液勾兌，灌胃總量保持 1 mL)，模型對(duì)照組和陰性對(duì)照組給2%墨汁灌胃。再過25 min后頸椎脫臼處死動(dòng)物，立即取出自幽門至回盲部的腸管，輕將小腸平鋪拉成直線進(jìn)行測(cè)量。測(cè)量小腸總長(zhǎng)度及從幽門至墨汁前沿的推進(jìn)距離，即為“墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度”。按式(1)計(jì)算墨汁推進(jìn)率(P)，并進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換(Х)后再統(tǒng)計(jì)分析。

(1)

1.3.2 排便實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物給受試物方法同小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)，連續(xù)灌胃7d后，末次給樣的當(dāng)天下午，各組動(dòng)物禁食不禁水。16h后，模型對(duì)照組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組給予劑量為10mg/(kg·bw)的復(fù)方地芬諾酯溶液，灌胃量為0.2mL/(10g·bw)，陰性對(duì)照組給予等量蒸餾水。30min后實(shí)驗(yàn)組給予含相應(yīng)受試物的2%洋紅溶液(取洋紅粉末1g，加入49mL二級(jí)蒸餾水配制成2%洋紅溶液，灌胃劑量為0.1mL/(10g·bw)。用洋紅溶液與灌胃液勾兌成混合液，小鼠灌胃總量保持1mL，模型對(duì)照組和陰性對(duì)照組給予2%洋紅，同時(shí)開始計(jì)時(shí)。從灌胃洋紅開始，觀察記錄每只動(dòng)物首次排紅便所需時(shí)間、6h排便粒數(shù)并稱重。實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物單籠喂養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0進(jìn)行方差分析及兩兩t檢驗(yàn)。若實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)方差不齊，則改用秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。P<0.05，表示差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 柑橘橘絡(luò)提取物對(duì)小鼠體重的影響

從表1、表2結(jié)果可知，2個(gè)實(shí)驗(yàn)前后各劑量組小鼠的體重與陰性對(duì)照組及模型對(duì)照組相比，均不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，表明柑橘橘絡(luò)提取物對(duì)小鼠體重?zé)o明顯影響。

表1 小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)前后體重比較

注：各劑量組與陰性對(duì)照組和模型對(duì)照組比較，P>0.05。

表2 小鼠排便實(shí)驗(yàn)前后體重比較

注：各劑量組與陰性對(duì)照組和模型對(duì)照組比較，P>0.05。

2.2 柑橘橘絡(luò)提取物對(duì)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的影響

由表3結(jié)果可知，與陰性對(duì)照組相比，便秘模型對(duì)照組小鼠的墨汁推進(jìn)率明顯降低(P<0.05)，表示成功建立便秘模型。與模型對(duì)照組相比，低劑量組和中劑量組提高小腸墨汁推進(jìn)率分別為65.29%和62.90%(P<0.05)，經(jīng)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換及統(tǒng)計(jì)分析，5倍、10倍劑量組與便秘模型對(duì)照組的差異有顯著性(P<0.05)，其中10倍劑量組的轉(zhuǎn)換值X高于5倍組，以上結(jié)果表明，柑橘橘絡(luò)提取物對(duì)小鼠的小腸運(yùn)動(dòng)具有促進(jìn)作用。

表3 柑橘橘絡(luò)提取物對(duì)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的影響

注：aP<0.05，表示各組墨汁推進(jìn)率與便秘模型對(duì)照組比較有顯著性差異；bP<0.05，表示各組墨汁推進(jìn)率轉(zhuǎn)換值Х與便秘模型對(duì)照組比較有顯著性差異。

2.3 柑橘橘絡(luò)提取物對(duì)小鼠排便時(shí)間、排便頻率和排便量的影響

由表4結(jié)果可知，與陰性對(duì)照組相比，便秘模型對(duì)照組小鼠首便時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，而糞便的粒數(shù)及重量極顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.01)。與模型對(duì)照組相比，5倍、10倍劑量組首便時(shí)間極顯著性縮短(P<0.01)，20倍組也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型對(duì)照組相比，5倍、10倍組的糞便粒數(shù)有極顯著性意義(P<0.01)，20倍組的明顯增多(P<0.05)；各劑量組糞便重量均大于便秘模型對(duì)照組，并有極顯著性差異(P<0.01)。以上結(jié)果表明，3個(gè)劑量組柑橘橘絡(luò)提取物能明顯縮短便秘小鼠的首便時(shí)間，并增加其所排便數(shù)量及重量，能夠增強(qiáng)腸道蠕動(dòng)，促進(jìn)排便。

表4 受試物對(duì)小鼠排便時(shí)間、排便頻率和排便量的影響

注：其他各組的首便時(shí)間與便秘模型對(duì)照組的相比，*P<0.05、**P<0.01；其他各組的糞便粒數(shù)與便秘模型對(duì)照組的相比，ΔP<0.05、ΔΔP<0.01；其他各組的糞便重量與便秘模型對(duì)照組的相比，#P<0.05、##P<0.01。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，柑橘橘絡(luò)提取物具有較好的潤(rùn)腸通便作用，尤其是在低、中劑量水平。柑橘橘絡(luò)提取物的主要組成部分是柑橘多糖，其富含鼠李半乳糖醛酸聚糖和半乳糖醛酸聚糖等結(jié)構(gòu)元素，具有高持水和高粘度的特性[11]，可以軟化糞便增大體積，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，易于排便；另外，有研究顯示多糖可明顯增加腸道有益菌的含量，提高益生菌的生存能力，改善腸道菌群內(nèi)環(huán)境，有效的預(yù)防結(jié)腸癌[12-13]。一些黃酮類物質(zhì)也被證實(shí)具有調(diào)節(jié)腸道菌群和抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用[14-15]。雖然柑橘橘絡(luò)提取物富含柑橘多糖和黃酮類物質(zhì)，但是否也具有改善腸道菌群、預(yù)防結(jié)腸癌的作用尚有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。值得注意的是，柑橘橘絡(luò)提取物在小腸運(yùn)動(dòng)和排便實(shí)驗(yàn)中均未表現(xiàn)出明顯的劑量依賴作用，尤其是20倍劑量組在小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)中未見明顯效果。可能的原因之一是一些黃酮類提取物在高劑量水平上可能對(duì)腸道蠕動(dòng)功能具有一定抑制作用[16]，因此，柑橘橘絡(luò)提取物適宜的服用劑量尚需進(jìn)一步探討。此外，其次本次實(shí)驗(yàn)選擇小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，初步得出了有效的結(jié)果，但如需應(yīng)用于便秘人群，尚應(yīng)開展必要的人群觀察試驗(yàn)，并對(duì)提取物中的有效成分開展進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究結(jié)果提示柑橘橘絡(luò)提取物具有較好的通便作用，為研發(fā)富含柑橘橘絡(luò)提取物的保健食品提供了科學(xué)依據(jù)，也為長(zhǎng)期便秘的人群提供可行性參考。◇

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(責(zé)任編輯 李婷婷)

Experimental Study on Facilitating Bowel Movement by Citrus Net Extract

WANG Ya-wen1，XIN Zhong-hao1，PU Ling-ling1，GAO Wei-na1，SHI Ta-la1，WEI Jing-yu1，DENG Zhi-rong2，GUO Chang-jiang1

(1Institute of Health and Environmental Medicine，Tianjin 300050，China；2Centers for Disease Control and Prevention，Rocket Forces，Beijing 100071，China)

citrus net extract；pectin flavonoids；facilitating bowel movement

軍隊(duì)科技重大項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：AWS16J004)。

*共同第一作者:王亞雯(1992— )，女，碩士，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)；辛中豪(1990— )，男，碩士，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)。

#共同通信作者：郭長(zhǎng)江(1963— )，男，博士，研究員，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)；鄧致榮(1962— )，男，隊(duì)長(zhǎng)，研究方向：軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)。