張如，朱建華，李強

(濉溪縣醫(yī)院檢驗科，安徽濉溪235100)

TRUST、TPPA試驗對TRFIA法檢測梅毒陽性的對比性分析

張如，朱建華，李強

(濉溪縣醫(yī)院檢驗科，安徽濉溪235100)

目的分別應(yīng)用TRUST、TPPA試驗對TRFIA法檢測的梅毒陽性標本進行一一檢測并評價檢測結(jié)果。方法使用上海榮盛TRUST試劑盒、日本富士瑞必歐株式會社TPPA試劑盒對177例經(jīng)廣州達瑞TRFIA試劑盒檢測為梅毒陽性的標本進行梅毒抗體檢測。結(jié)果177份血清標本中用TRUST法檢測98例陽性，陽性符合率55.4%；用TPPA法檢測陽性134例，陽性符合率75.7%；TRUST陰性TPPA陽性的38例；TRUST陽性TPPA陰性的2例。運用Kappa檢驗方法判斷TRUST和TPPA兩種檢測方法對TP檢測符合一致性極強；McNemar檢驗，P值為0，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論雖然TPPA和TRFIA陽性檢出率明顯高于TRUST法，但3種檢測方法在梅毒感染的不同階段各有其優(yōu)缺點，可以互為補充驗證。

TRUST；TPPA；TRFIA；梅毒；陽性

梅毒是一種性傳播疾病。梅毒螺旋體的傳播途徑主要為性接觸直接傳播，也可以為接吻、手術(shù)、哺乳、輸血也皆有可能[1]。梅毒患者的皮膚、黏膜中含梅毒螺旋體，未患病者在與梅毒患者的性接觸中，皮膚或黏膜若有細微破損則可得病。獲得性梅毒早期梅毒病人是傳染源，95%以上是通過危險的或無保護的性行為傳染，少數(shù)通過接親吻、輸血、污染的衣物等傳染。胎傳梅毒由患梅毒的孕婦傳染，如果一、二期和早期潛伏梅毒的孕婦，傳染給胎兒的幾率相當高。早期可致胎兒流產(chǎn)、早產(chǎn)，晚期感染的成活胎兒可患先天梅毒[2]。梅毒在全世界流行，據(jù)WHO估計，全球每年約有1200萬新發(fā)病例，主要集中在南亞、東南亞和次撒哈拉非洲。近年來梅毒在我國增長迅速，已成為報告病例數(shù)最多的性病。所報告的梅毒中，潛伏梅毒占多數(shù)，一、二期梅毒也較為常見，先天梅毒報告病例數(shù)也在增加。本病可以侵害全身多種器官，成為危害人類健康的主要疾病之一，且其臨床表現(xiàn)極其復(fù)雜，易被誤診或者是漏診。因此，梅毒的診斷結(jié)果對病情的判斷就顯得至關(guān)重要[3]。本臨床實驗室同時TPPA法、TRUST法對177份采用TRFIA法檢測為梅毒螺旋體抗體陽性標本進行檢測，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源2014年-2015年門診、住院患者梅毒螺旋體抗體檢測（時間分辨熒光免疫法）檢測陽性177例，陽性血清標本同時使用TRUST、TPPA聯(lián)合檢測。

1.2 儀器使用艾康全自動時間分辨熒光免疫分析儀進行TRFIA法檢測梅毒螺旋體抗體，該儀器從加樣、孵育、加試劑、洗滌、酶標讀值和結(jié)果處理等一機體全自動進行，避免了手工操作中的交叉感染、操作誤差等。TPPA法和TRUST法屬手工操作，目測結(jié)果，無需特殊儀器。

1.3 試劑TRFIA試劑盒(廣州市達瑞抗體工程股份有限公司)，TRUST(上海榮盛科技有限公司)，TPPA(富士瑞必歐株式會社)。嚴格按照試劑盒說明書進行操作，均在有效期內(nèi)使用。

1.4 方法患者空腹抽取靜脈血3ml左右，3500r/ min離心10min分離血清使用，嚴格按照TRFIA、TRUST、TPPA試劑操作說明書檢測。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法計數(shù)資料采用配對卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TPPA與TRUST檢測梅毒螺旋體結(jié)果運用Kappa檢驗方法判斷兩種檢測方法對TP檢測符合一致性指標，Kappa值0.522，表示符合一致性極強；McNemar檢驗，P值為0，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 TPPA與TRUST檢測梅毒螺旋體結(jié)果

2.2 三種檢測方法的對比分析結(jié)果TPPA的陽性符合率75.7%；TRUST的陽性符合率55.4%。見表2。

表2 三種檢測方法的對比分析結(jié)果

3 討論

梅毒是由蒼白螺旋體引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病，可造成人體多器官損害，產(chǎn)生多種癥狀與體征[4]。我國在20世紀60年代已基本消滅梅毒，但近年來發(fā)病率有逐年上升趨勢[2]。梅毒病癥表現(xiàn)復(fù)雜不一，可以侵害全身多種器官，成為危害人類健康的主要疾病之一，也能通過孕婦胎盤傳給后代，其危害性巨大，因此，要做到早發(fā)現(xiàn)，早治療，這樣不僅能使患者獲得良好積極的治療，并且也能防止由于性接觸造成他人感染；臨床上對于梅毒的診斷必須依據(jù)既往史以及臨床的表現(xiàn)和實驗室診斷的結(jié)果進行綜合系統(tǒng)的分析。在正常情況下，人體感染梅毒螺旋體后大約2～3周即可檢測出梅毒抗體，包括非特異性抗體和特異性抗體，因而，血清學(xué)試驗分為非梅毒螺旋體抗原試驗和梅毒螺旋體抗原試驗兩大類[5]。目前臨床上檢測梅毒的方法有非特異性抗體和特異性抗體講的兩種方法[6]，非特異性抗體檢測有TRUSR及RPR，特異性抗體檢測有TRFIA及TPPA法等[7]。大量臨床研究證實，梅毒血清學(xué)檢測會受到其他有損機體的反應(yīng)的影響，合理選擇檢測方法對于檢測結(jié)果的準確性以及可靠性至關(guān)重要[8]。

臨床上，TRUST試驗是梅毒診斷的初篩試驗，它主要檢測梅毒患者血液中非特異性抗體，該抗體一般在一期或者二期梅毒時才出現(xiàn)，3～4周后才能檢出，經(jīng)對癥治療一段時間后，梅毒抗體的滴度逐漸下降，在梅毒病癥的非活動期以及治療后就能消失，對二期和三期梅毒在對癥治療后梅毒抗體的檢測率一般都較低[9]。本次調(diào)查中，177例陽性標本中，TRUST法篩查陽性98例，該方法易產(chǎn)生漏檢。本實驗在室溫中手工操作，待測標本須新鮮、無污染，在規(guī)定時間內(nèi)及時觀察結(jié)果，且用目測法判定結(jié)果，陰性結(jié)果不能排除梅毒感染，陽性結(jié)果還需進一步做抗梅毒螺旋體抗體實驗。在梅毒感染初期，及梅毒潛伏期患者，極易漏檢而出現(xiàn)假陰性的結(jié)果[10]。并且所用梅毒抗原特異性差，有時會和其它非特異性抗體有交叉反應(yīng)，如自身免疫性疾病（風(fēng)疹、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡），以及瘧疾、猩紅熱、結(jié)核病、肺炎等疾病的診斷均可造成假陽性結(jié)果[11]，故不能單憑此法診斷是否梅毒感染。但該法操作簡便而價廉，抗體滴度的變化與梅毒病癥治療的情況成正相關(guān)，適用于療效觀察、隨訪和復(fù)發(fā)的輔助診斷。TPPA是目前臨床檢測梅毒公認的較好的確認方法，具有很高的敏感性和特異性。人體被梅毒螺旋體感染后，IgG抗體可終生隨患者存在，但一般抗體濃度比較低，且不能預(yù)防患者再度感染。所以TPPA可以檢測到低濃度的IgG抗體，并且IgG抗體的濃度的高低不隨病情發(fā)展而產(chǎn)生變化，且對各期梅毒的檢測都具有較好的檢測穩(wěn)定性，一般不會出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。所以現(xiàn)在臨床上都采用TPPA檢測方法作為梅毒檢測的確診試驗。但由于TPPA檢測是一種抗原抗體的凝集實驗，一般都是用肉眼判斷檢測出的結(jié)果，卻無法保存原始數(shù)據(jù)，且實驗操作復(fù)雜，不能用于科室大批量樣本篩檢，有其一定的局限性。177例陽性標本中，盡管TPPA法只檢測出陽性134例，但這與初選樣本時有很大的關(guān)系。

TRFIA法檢測梅毒螺旋體特異性抗體，利用特異性基因工程制成梅毒特異性抗原包被在微孔板上，采用雙抗原夾心法通過酶的放大作用檢測血清中的梅毒螺旋體抗體，具有雙重識別機制，提高了試驗的敏感度和特異性，且整個檢測過程可自動化，結(jié)果重復(fù)性好、較穩(wěn)定，很適合臨床實驗室標本量大的檢測由于TP-TFRIA檢測的是IgG與IgM混合抗體，而梅毒IgG抗體即便在治愈后仍能長期存在，檢測結(jié)果仍可呈陽性，這部分陽性只能說明患者曾經(jīng)感染過或者正處于感染期內(nèi)，并不能確定是否為梅毒活動期，無法進行療效監(jiān)測[12]。實驗結(jié)果表明，TRFIA法雖具有生物學(xué)假陽性的存在，同時從送檢血樣的檢測對比中也可以看出，不同廠家生產(chǎn)的梅毒ELISA法試劑存在著一定的差異，同一方法檢測結(jié)果不同，這是否與試劑的生產(chǎn)包被有關(guān)還待探討。除此之外，影響因素還包括標本處理不完全、標本溶血、標本被細菌污染、保存不當、操作失誤及儀器與方法學(xué)的因素等等(灰?guī)^(qū)現(xiàn)象、空白對照影響)。

綜上所述，梅毒診斷是比較復(fù)雜的檢測過程，三種方法各具應(yīng)用優(yōu)勢，在TP血清學(xué)檢查中均具有重要意義。對上述三種方法比較分析：TRUST試驗陽性符合率較低，易產(chǎn)生漏檢標本，不適用作篩查實驗，可作為監(jiān)測梅毒療效的方法。TPPA法陽性符合率高于TRUST實驗，與TRUST法相比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。TRFIA法作為本科室新近選用的方法學(xué)檢測，且通過本研究可以看出該方法具有較高的靈敏度和特異性，是臨床實驗室檢測梅毒螺旋體特異性抗體的首選初篩實驗。梅毒的血清學(xué)試驗陽性，只提示所測標本中有抗類脂抗體或抗TP抗體存在，不能作為患者感染梅毒螺旋體的絕對依據(jù)，陰性結(jié)果也不能排除梅毒螺旋體感染，檢測結(jié)果還應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合分析。TRFIA法和TPPA法靈敏度和特異性均較好，是較理想的血清梅毒螺旋體的診斷方法，在一定的程度上可以用TRFIA法取代TPPA法，且TRFIA法的自動化分析系統(tǒng)可以大量的檢測樣本，是一種很好的檢測方法。但是如果對該檢測系統(tǒng)檢測出的結(jié)果有疑問也可以對標本進行TPPA確認，綜合分析兩者的檢驗結(jié)果，并結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)以及病史，排除假陽性或者假陰性的結(jié)果，給臨床醫(yī)生做出正確的判斷提供依據(jù)。由于各種檢測方法都存在著假陽性和漏檢比例，為提高檢出率，最好每次用兩種以上方法檢測，盡可能的減少臨床實驗室的漏診和誤診。

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：647-650.

[2]陳月香，初開秋，周淑華.三種檢測梅毒螺旋體抗體試劑的對比分析[J].臨床醫(yī)學(xué)，2004，24(6)：64-65．

[3]曹佩琪.四種梅毒檢測方法比較[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3 (3)：58-61．

[4]張春秀，胡亞遠，姚藝斌.TRUST與TPPA聯(lián)合檢測的臨床應(yīng)用[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2012，30(3)：278-279.

[5]鄭懷競，邢文革.免疫學(xué)檢驗與臨床疾病安全輸血.北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社：1997，137-140.

[6]孫蓉，張玲.梅毒特異性抗體和非特異性抗體同時檢測的臨床意義[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2015，33(1)：92-94.

[7]戴玉琳，馮星.對梅毒血清學(xué)研究的建議[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2008，18(8)：505-508．

[8]龔建紅，陳衛(wèi)武，馬吉輝袁，等.三種梅毒血清學(xué)檢測方法的應(yīng)用分析[J].中外健康文摘，2013，10(4)：220-221

[9]鄭琪，何良修，吳私舟.TRUST與RPR梅毒診斷試劑穩(wěn)定性比較[J].中國輸血雜志，1998，11(1)：125．

[10]潘繼文.三種梅毒螺旋體抗體檢測方法比較[J].臨床醫(yī)學(xué)，2006，26(10)：65-66．

[11]武建國．老年人抗梅毒螺旋體抗體測定的假陽性率偏高[J].臨床檢驗雜志，2006，24(4)：241-243．

[12]周琳，胡雪玲，張健倩袁，等.RPR、TPPA、TP-TFRIA 3種檢測梅毒方法的比較及評價[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21(1)：86-87.

R446.62，R759.1

A

1674-1129(2017)03-0408-03

2016-09-02；

2016-03-13)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.038