吳普昭

(廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州511400)

HBV攜帶產(chǎn)婦血清與乳汁中HBV-DNA相關(guān)性分析

吳普昭

(廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州511400)

目的分析HBV攜帶產(chǎn)婦血清與乳汁中HBV-DNA的相關(guān)性，為安全母乳喂養(yǎng)提供科學(xué)依據(jù)。方法收集我院2013年至2015年共68例HBV攜帶產(chǎn)婦的血清及乳汁，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)方法分別檢測(cè)其HBV-DNA載量,并按產(chǎn)婦血清HBV載量分為四組。比較產(chǎn)婦血清HBV-DNA與乳汁HBV-DNA陽(yáng)性率以及各組間乳汁的陽(yáng)性率，分析血清HBV-DNA載量與乳汁HBV-DNA載量的相關(guān)性。結(jié)果68例HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA陽(yáng)性率為63.2%(43/68)，乳汁HBV-DNA陽(yáng)性率為29.4%(20/68)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.309，P＜0.05)；HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA載量在＜500IU/ml、500～104IU/ml、105～106IU/ml、107～108IU/ml區(qū)間時(shí)，對(duì)應(yīng)乳汁中HBV-DNA檢出率分別為0%（0/25）、11.1%(2/18)、63. 6%(7/11)、78.6%(11/14)，各組間陽(yáng)性率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=40.756，P＜0.05)；當(dāng)HBV攜帶產(chǎn)婦血清和乳汁中HBVDNA同時(shí)陽(yáng)性時(shí),乳汁中HBV-DNA的載量隨血清HBV-DNA載量增高而增高，二者中度相關(guān)(r=0.574)。結(jié)論HBV攜帶產(chǎn)婦隨著血清HBV-DNA載量的升高，產(chǎn)婦乳汁中HBV-DNA檢出率以及HBV-DNA載量有增高趨勢(shì)，HBV攜帶產(chǎn)婦在進(jìn)行母乳喂養(yǎng)時(shí)應(yīng)結(jié)合血清HBV-DNA和乳汁HBV-DNA來(lái)正確指導(dǎo)母乳喂養(yǎng)。

產(chǎn)婦；血清；乳汁；HBV-DNA

我國(guó)屬乙肝感染的高流行區(qū)，HBV的母嬰傳播是其主要傳播方式之一[1]。分娩后HBV攜帶產(chǎn)婦母乳喂養(yǎng)，在HBV母嬰傳播中的影響越來(lái)越受到人們的關(guān)注。本文探討HBV攜帶產(chǎn)婦血清與乳汁中HBV-DNA載量的相關(guān)性[2]，為慢性乙型肝炎產(chǎn)婦母乳喂養(yǎng)提供參考依據(jù)，正確指導(dǎo)母乳喂養(yǎng)，從而降低新生兒乙型肝炎的感染率[3]。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象2013年1月至2015年12月在我院住院和門診就診的乙肝表面抗原陽(yáng)性的產(chǎn)婦，共68例。

1.2 標(biāo)本采集

1.2.1 血清標(biāo)本采集空腹靜脈采血3ml，3000r/ min離心5min；吸取上層血清待測(cè)。

1.2.2 乳汁標(biāo)本采集用無(wú)菌生理鹽水對(duì)產(chǎn)婦乳頭消毒后，采集乳汁3ml，3000r/min離心15min，取中層乳清待測(cè)。

1.3 儀器和試劑ABI 7500 Real Time PCR system實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)儀。試劑購(gòu)于中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒。

1.4 HBV-DNA核酸提取與PCR擴(kuò)增⑴HBVDNA提?。喊凑赵噭┖姓f明書操作步驟，取200μl樣品，加入450μl DNA提取液Ⅰ和4μl內(nèi)標(biāo)液，用振蕩器劇烈振蕩混勻15s，瞬時(shí)離心數(shù)秒，100℃恒溫處理10±1min，12000g離心5min備用。⑵PCR擴(kuò)增：按比例（HBV PCR反應(yīng)液27μl/人份+Taq酶3μl/人份）取相應(yīng)量的PCR反應(yīng)液及Taq酶，充分混勻后按30μl/管分裝至各儀器適用的PCR反應(yīng)空管中備用。⑶擴(kuò)增程序：93℃2min；93℃45s→55℃60s 10個(gè)循環(huán)；93℃30s→55℃45s 30個(gè)循環(huán)；陽(yáng)性判斷值為≥500IU/ml。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。樣本陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)程度用直線相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA與乳汁HBVDNA檢測(cè)陽(yáng)性率相關(guān)性分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，68例HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)為43例，陽(yáng)性率63.2%(43/68)；乳汁HBV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)為20例，陽(yáng)性率29.4%(20/68)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.309，P＜0.05)，見表1。再按產(chǎn)婦血清HBV載量分為HBV-DNA載量＜500IU/ml組、500～104IU/ml組、105～106IU/ml組、107～108IU/ml組，比較各組間HBV-DNA陽(yáng)性率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA載量＜500IU/ml時(shí)，其對(duì)應(yīng)的乳汁中均未檢出HBV-DNA，檢出率為0%(0/25)；在500～104IU/ml區(qū)間時(shí)，檢出率為11.1%(2/18)；在105～106IU/m區(qū)間時(shí)，檢出率為63.6%(7/11)；在107～108IU/ml區(qū)間時(shí)，檢出率為78.6%(11/14)；各組間陽(yáng)性率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=40.756，P＜0.05)，見表2。

表1 HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA與乳汁HBV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性率比較

表2 HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA載量與乳汁HBV-DNA檢出率的關(guān)系

2.2 HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA載量與乳汁HBV-DNA載量的相關(guān)性分析當(dāng)HBV攜帶產(chǎn)婦血清和乳汁HBV-DNA同時(shí)陽(yáng)性時(shí)，運(yùn)用直線相關(guān)分析方法統(tǒng)計(jì)其載量，結(jié)果顯示，隨著產(chǎn)婦血清HBV-DNA含量升高，對(duì)應(yīng)乳汁中含量也相應(yīng)增高，兩者間呈中度相關(guān)（r=0.574），如圖1。

圖1 HBV攜帶產(chǎn)婦血清與乳汁中HBV-DNA載量的相關(guān)性

3 討論

HBV感染呈世界性流行，但不同地區(qū)HBV感染的流行強(qiáng)度差異很大。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約20億人曾感染HBV，其中2.4億人為慢性HBV感染者[4]，每年約65萬(wàn)人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞癌。我國(guó)是乙型肝炎高流行區(qū)域，一般人群的感染率為9.09%。HBV的母嬰垂直傳播有妊娠時(shí)經(jīng)胎盤宮內(nèi)感染；分娩時(shí)胎兒經(jīng)過產(chǎn)道吞進(jìn)羊水、血、陰道分泌物引起感染；密切接觸或母乳喂養(yǎng)時(shí)經(jīng)過乳汁進(jìn)行傳播等方式[5]。中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病分會(huì)制定的《慢性乙型肝炎防治指南》在關(guān)于母嬰垂直傳播的預(yù)防中指出，新生兒在出生12h內(nèi)注射HBIG和乙型肝炎疫苗，可接受HBsAg陽(yáng)性乳汁[6]，相關(guān)研究表明：嬰兒出生后注射乙肝疫苗可以接受HBV攜帶母親的母乳喂養(yǎng)[7]。但也有研究表明HBV-DNA陽(yáng)性乳汁可增加?jì)雰焊腥綡BV的危險(xiǎn)[8]，孕婦血清高濃度HBV水平是母嬰垂直傳播的危險(xiǎn)因素[9]。因此目前對(duì)于HBV攜帶母親是否可以進(jìn)行母乳喂養(yǎng)仍存爭(zhēng)議。

本文通過研究HBV攜帶產(chǎn)婦血清與乳汁中HBV-DNA載量相關(guān)性，從病毒載量方面探討HBV攜帶產(chǎn)婦母乳的安全性，為這一特殊人群的母乳喂養(yǎng)提供參考依據(jù)。結(jié)果表明：HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA陽(yáng)性率為63.2%，乳汁陽(yáng)性率為29.4%，血清HBV陽(yáng)性率高于乳汁HBV陽(yáng)性率。HBV攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA載量＜500IU/ml時(shí)，其對(duì)應(yīng)的乳汁中均未檢出HBV-DNA，血清HBVDNA載量在500～104IU/ml區(qū)間時(shí)，其對(duì)應(yīng)乳汁中HBV-DNA檢出率為11.1%；血清HBV-DNA載量在105～106IU/ml區(qū)間時(shí)，其對(duì)應(yīng)乳汁中HBV-DNA檢出率為63.6%；血清HBV-DNA載量在107～108IU/ml區(qū)間時(shí)，其對(duì)應(yīng)乳汁中HBV-DNA檢出率為78.6%，表明HBV攜帶產(chǎn)婦乳汁中HBV-DNA陽(yáng)性率隨血清HBV-DNA載量增高而增高。當(dāng)HBV攜帶產(chǎn)婦血清和乳汁HBV-DNA載量同時(shí)陽(yáng)性時(shí)，隨著血清HBV-DNA含量升高，乳汁中含量也相應(yīng)增高，兩者間呈中度相關(guān)，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道大致一致[10]。

在國(guó)家大力提倡母乳喂養(yǎng)的今天，HBV攜帶產(chǎn)婦這一特殊人群的母乳喂養(yǎng)如何合適地執(zhí)行，關(guān)系到HBV母嬰傳播控制成敗的重要環(huán)節(jié)[11]。在宣傳母乳喂養(yǎng)和執(zhí)行的同時(shí)，要嚴(yán)格遵照醫(yī)學(xué)原則，對(duì)可能發(fā)生HBV傳播的乳源進(jìn)行相應(yīng)的檢查和分析，為攜帶和感染HBV的產(chǎn)婦提供有效的醫(yī)學(xué)指導(dǎo)，在不能確定乳汁是否安全的情況下，對(duì)HBV攜帶產(chǎn)婦，應(yīng)結(jié)合血清HBV-DNA和乳汁HBV-DNA來(lái)正確指導(dǎo)母乳喂養(yǎng)，從而降低新生兒乙型肝炎的感染率。

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R512.6+3，R446.62

A

1674-1129(2017)03-0406-03

2016-10-20；

2017-03-15)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.037

廣東省廣州市番禺區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：2015-Z03-067）