孫謙，唐軍，黃茉瑛，葉金甜，董瑤佳，吳冰

(九江市婦幼保健院檢驗科，江西九江332000)

九江地區(qū)新生兒黃疸患兒葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變分析

孫謙，唐軍，黃茉瑛，葉金甜，董瑤佳，吳冰

(九江市婦幼保健院檢驗科，江西九江332000)

目的了解九江地區(qū)新生兒黃疸患兒葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)缺乏癥的基因突變類型。方法采用葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)/6-磷酸葡萄糖酸（6PGD）比值法檢測G6PD酶活性和基因測序法檢測G6PD基因突變?yōu)檠芯渴侄?，對九江地區(qū)的病理性黃疸新生兒進行研究。結果100例新生黃疸患兒中共檢出基因突變19例，檢出率為19%，其中G1388A突變10例、G1376T突變7例、A95G突變2例。G1388A組與G1376T組相比較，兩組間差異無顯著統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；G1388A組與A95G組相比較，兩組間差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；G1376T組與A95G組相比較，兩組間差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論九江地區(qū)G6PD基因突變類型主要為G1388A和G1376T。

新生兒；黃疸；葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；基因突變

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose-6-phosphate Dehydrogenas，G6PD)是磷酸戊糖旁路途徑的第一個限速酶，它能催化6-磷酸葡萄糖生成6-磷酸葡萄糖酸，同時生成還原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)。NADPH不僅是體內多種物質合成的供氫體，也可維持谷胱甘肽的還原狀態(tài)，保護紅細胞免受氧化性損傷[1]。葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）缺乏癥是常見的X染色體隱性遺傳性酶缺乏性疾病，據報道全球約有4億人患有該病，而G6PD基因突變類型有140種[2]。這些患者常因接觸蠶豆或具有氧化作用的藥物發(fā)生急性溶血性貧血，導致紅細胞破壞過多，引起肝、腎或心功能衰竭，甚至死亡[3]。本研究以九江地區(qū)新生黃疸患兒為研究對象，通過對G6PD酶活性及基因突變類型的檢測，了解本地區(qū)G6PD基因突變的主要類型。

1 資料與方法

1.1 研究資料收集2015年7月至2016年7月九江市婦幼保健院新生黃疸患兒100例，其中男性54例，女性46例，新生兒父母均為九江市居民，漢族。將日齡總膽紅素值達到或超過“考慮光療”或“光療”值[4]者診斷為新生兒病理性黃疸[5]，入選病例均已排除血型不合、先天畸形、高危兒及母親患病等因素。

1.2 樣本采集對100例新生兒黃疸患兒進行靜脈采血1.0～2.0ml，EDTA抗凝，-20℃保存。

1.3 G6PD酶活性測定采用葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥檢測試劑盒（G6PD/6PGD定量比值法，中山天洋，廣東中山）檢測G6PD活性，具體操作步驟嚴格按照說明書進行。根據所選用試劑盒說明書，G6PD酶活性結果的參考區(qū)間：G6PD/6PGD≥1.1為G6PD正常；0.6＜G6PD/6PGD＜1.1為G6PD中度缺乏；G6PD/6PGD≤0.6為G6PD重度缺乏。

1.4 基因組DNA提取取全血標本1.0ml經紅細胞裂解，取白細胞用10%SDS和蛋白酶K56℃消化過夜，應用傳統(tǒng)酚/氯仿法抽提基因組DNA，加60μl滅菌雙蒸水溶解，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 G6PD基因突變檢測選用DTCS測序試劑盒（美國BeckMan公司），嚴格按照試劑盒說明書操作程序，于GeXP遺傳分析儀（美國BeckMan公司）上進行基因測序分析。

1.6 統(tǒng)計學方法采用SPSS 19.0軟件進行分析，實驗數(shù)據采用卡方檢驗統(tǒng)計分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 G6PD酶活性測定結果從表1中可知，100例病理性黃疸患兒中，G6PD正常的有67例（67.0%），中度缺乏的有29例（29.0%），重度缺乏的有4例（4.0%）。

表1 G6PD酶活性測定結果

2.2 G6PD基因突變檢測結果根據表2可知，100例病理性黃疸患兒中共檢出19例G6PD基因突變者，檢出率為19.0%，其中G1388A型10例，G1376T型7例，A95G型2例；三者分別占基因突變總數(shù)的52.6%、36.8%和10.6%。

表2 G6PD基因突變檢測結果

基因型G1388A組與G1376T組相比較，P＞0.05，說明兩組間差異無顯著統(tǒng)計學意義；基因型G1388A組與A95G組相比較，P＜0.05，說明兩組間差異有顯著統(tǒng)計學意義；基因型G1376T組與A95G組相比較，P＜0.05，說明兩組間差異有顯著統(tǒng)計學意義。根據統(tǒng)計學結果及三種基因突變類型所占總突變例數(shù)的百分比來看，G1388A和G1376T是本次研究中基因突變的主要類型。

3 討論

黃疸疾病，臨床又稱其為黃疸疾病或是黃病，是新生兒常發(fā)性疾病之一。新生兒黃疸的發(fā)生與多種因素相關，不論是何種原因，黃疸嚴重時均可引起膽紅素腦病，除了造成神經系統(tǒng)損害外，嚴重的還可能引起死亡[6，7]。G6PD缺乏癥最最常見的臨床癥狀就是黃疸，有報道在G6PD缺乏的新生兒中，有1/3呈現(xiàn)黃疸。

G6PD缺乏癥是X連鎖不完全顯性遺傳病。已知人類G6PD基因定位于X染色體的長臂2區(qū)8帶，基因全長18Kb，由13個外顯子和12個內含子組成，編碼515個氨基酸[8]。G6PD廣泛尋在于各種生物體內，對于維持紅細胞膜的穩(wěn)定性起了重要的作用。它是糖酵解磷酸戊糖途徑旁路中的一個關鍵酶和限速酶，其主要功能是產生NADPH。NADPH對于維持紅細胞的正常生理功能和紅細胞形態(tài)其了極其重要的作用[9]。有缺陷的G6PD不能夠產生足夠有效的保護反應而會導致細胞抗氧化能力大大減低，導致紅細胞的破裂，危及生命。有的患兒由于誤食蠶豆或者某些藥物造成急性溶血性貧血；有些新生兒出生后黃疸難消退，甚至發(fā)展為核黃疸，給小兒神經系統(tǒng)造成了不可逆的損傷；有的患兒可以表現(xiàn)為從新生兒時起就一直伴隨終生的慢性非球形細胞溶血性貧血[10]。所以，G6PD缺乏癥可以造成嚴重的不良后果。G6PD缺乏患兒臨床癥狀的差異，從根本上說是由于基因突變所致，因此我們通過此次研究來了解本地區(qū)G6PD缺乏癥的基因突變類型就顯得十分必要和重要。

G6PD基因突變大多數(shù)是點突變，可引起單個氨基酸的置換，從而引起酶活性中心或者是造成對三維結構有決定性作用的氨基酸基團被替代，如β轉角處的氨基酸被替代，新的氨基酸基團空間障礙，阻礙β轉角的形成，從而使酶的三維結構發(fā)生改變[11]。

據研究報道，中國人群中G6PD基因突變以G1388A、G1376T和A95G最為常見，這三種突變頻率之和占70%以上[12-14]，其中G1388A和G1376T是中國人群兩種特有的突變[15]。本次研究中，在100例病理性黃疸患兒中共檢出19例G6PD基因突變者，檢出率為19.0%，其中G1388A型10例，G1376T型7例，A95G型2例；三者分別占基因突變總數(shù)的52.6%、36.8%和10.6%。綜合分析三種基因突變類型占總突變例數(shù)的百分比和各組間的比較結果來看，G1388A和G1376T是本次研究中基因突變的主要類型。本次研究所檢出的本地區(qū)常見的G6PD基因突變主要類型與我國常見的三種突變類型一致[12]，未檢出文獻報道的G392T、C1024T及A493G等較少見的突變類型[16-19]可能是因為本次研究樣本量的局限性，在后續(xù)的研究中將加大樣本量，盡可能的更加全面地展現(xiàn)本地區(qū)的G6PD基因突變情況。

我國南方地區(qū)是G6PD缺陷癥的高發(fā)區(qū)，每年因急性溶血奪去不少人的生命，因核黃疸使不少新生兒身體及智力雙殘。G6PD基因突變的研究，對于深入探討該病的發(fā)病機理、提高臨床診斷水平及防治措施，從而提高民族健康素質，對于人類學和遺傳學都具有十分重要的意義[20]。

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G6PD gene mutations analysis of neonatal jaundice in Jiujiang area

SUN Qian，TANG Jun，HUANG Moying，YE Jintian，DONG Yaojia，WU Bing.
Department of Laboratory，Women and Children Health Hospital of Jiujiang City，Jiujiang Jiangxi 332000，China.

Objective To investigate the gene mutation types of neonatal jaundice with G6PD deficiency in Jiujiang area. Methods To analyse the neonates with pathologic jaundice in Jiujiang area.The G6PD activities were detected using the G6PD/ 6PGD ratio test.The G6PD gene mutations were analyzed with gene sequencing method.Results There were 19 cases of gene mutation in 100 neonates with pathologic jaundice，and the rate of gene mutation was 19%.There were 10 cases of G1388A gene mutation，7 cases of G1376T gene mutation and 2 cases of A95G gene mutation.For the comparison between G1388A and G1376T，the difference was not statistically significant(P＞0.05).But for the comparison between G1388A and A95G，the difference was statistically significant(P＜0.05)；and for the comparison between G1376T and A95G，the difference was also statistically significant (P＜0.05).Conclusion The main types of G6PD gene mutations are G1388A and G1376T in Jiujiang area.

∶Neonates；Jaundice；Glucose-6-phosphate dehydrogenas(G6PD)；Gene mutation

R722.17，R446.62

A

1674-1129(2017)03-0330-03

2016-09-09；

2016-12-23)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.011

江西省衛(wèi)生計生委科技計劃（20167145）

孫謙，男，1977年生，主管檢驗技師，主要從事臨床血液學檢驗工作。