陳福艷，梁萬文，陳 明，黃 婷，李莉萍，雷愛瑩，王 瑞，楊學明，羅洪林，歐陽賢華

(廣西水產(chǎn)科學研究院，廣西水產(chǎn)遺傳育種與健康養(yǎng)殖重點實驗室，廣西 南寧 530021)

卵形鯧鲹刺激隱核蟲病組織病理學研究

陳福艷，梁萬文，陳 明，黃 婷，李莉萍，雷愛瑩，王 瑞，楊學明，羅洪林，歐陽賢華*

(廣西水產(chǎn)科學研究院，廣西水產(chǎn)遺傳育種與健康養(yǎng)殖重點實驗室，廣西 南寧 530021)

利用組織切片、HE染色和顯微觀察的方法，研究了卵形鯧鲹患刺激隱核蟲病組織病理變化。組織切片結(jié)果可見，感染魚的鰓和體表受到直接機械損傷；魚體在缺氧狀態(tài)下，入侵的刺激隱核蟲有可能對機體產(chǎn)生某種毒素，也可能因刺激隱核蟲感染而引發(fā)細菌或病毒繼發(fā)性感染，造成肝、脾和腎臟不同程度的間接性損傷。表現(xiàn)為鰓部機能嚴重受阻，肝臟脂肪肝變性嚴重，肝索紊亂，血竇縮小或消失；脾臟組織結(jié)構(gòu)不清晰，有充血、出血和壞死等癥狀；腎臟結(jié)構(gòu)不清晰，腎小管及腎小體縮小，腎小管細胞融合(黏連)，組織間隙松散擴大，局部細胞壞死，存在脂肪粒。

卵形鯧鯵(Trachinotusovatus)；刺激隱核蟲(Cryptocaryonirritans)；組織病理學

卵形鯧鲹(Trachinotusovatus)是我國新興名特優(yōu)海水養(yǎng)殖品種之一。近年來，卵形鯧鲹養(yǎng)殖業(yè)在福建、廣東、海南、廣西等沿海地區(qū)迅猛發(fā)展，而且隨著深海網(wǎng)箱養(yǎng)殖技術(shù)的進步，該養(yǎng)殖業(yè)得到進一步發(fā)展。但隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，各種病害暴發(fā)日益頻繁，尤其是刺激隱核蟲(Cryptocaryonirritans)病，嚴重威脅卵形鯧鲹養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前由于該病尚無有效的治療方案，因此造成每年秋季快上市的大規(guī)格成品魚大批量死亡，且死亡率高達100%，這給養(yǎng)殖戶造成巨大的經(jīng)濟損失[1-4]。國內(nèi)外關(guān)于卵形鯧鲹刺激隱核蟲病的報道諸多，如但學明[5]、黃瑋[6]、陳添錚[7]等對卵形鯧鲹和刺激隱核蟲進行了研究，滿其蒙[8]、趙典惠[9]對細菌感染卵形鯧鲹組織病理學進行報道，但有關(guān)刺激隱核蟲感染卵形鯧鲹組織病理學研究未見報道，因此筆者對其進行研究，旨在為該病的病理及防治研究提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料及儀器

魚安定MS222，福爾馬林，無水酒精、二甲苯、石蠟，Leica RM2235切片機，Nikon ECLIPSE 80i顯微鏡，立體顯微鏡YYL-440。

1.2 采樣

試驗魚來源于欽州龍門港海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖魚，規(guī)格為(400±25)g。對健康魚和患病魚進行常規(guī)檢查和流行病學調(diào)查，依據(jù)資料[10]對寄生蟲進行診斷。

1.3 組織切片的制備及觀察

選取健康魚和感染魚各6尾，經(jīng)MS222麻醉后，用剪刀剪取魚鰓組織，解剖刀切取皮膚、肝、脾和腎臟組織適量(3 mm×3 mm)，將各組織塊置于10%的中性福爾馬溶液浸泡24 h以上，然后用梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，HE染色，中性樹膠封片[11]。Nikon ECLIPSE 80i顯微鏡觀察拍照[12]。

2 結(jié)果

2.1 感染魚的癥狀

感染魚活動緩慢，食欲下降或不進食，呼吸困難，常用身體摩擦網(wǎng)片或用尾鰭拍打水面。體表黏液增多，宛如身披輕紗，局部出現(xiàn)紅腫、充血和出血現(xiàn)象；部分鰭條充血、潰爛；鰓部暗紅、腫脹、充血和出血，黏液增多而將鰓絲粘連成片(圖1-2)。體表、鰭條和鰓部附著大量“小白點”(圖1-1，圖1-2)，鏡檢確診為刺激隱核蟲(圖1-3，圖1-4)。

注：1～2為感染魚；3為刺激隱核蟲附著鰓絲(×100)；4為包囊(×100)。
Notes：1～2 indicated infected fish；3 indicated parasitic gill filaments(×100)；4 indicated packaging(×100).

2.2 組織病理學觀察

1)鰓組織：健康魚的鰓部鮮紅、黏液正常；鰓絲切片可見，鰓小片整齊且梳形排列，呼吸上皮細胞、柱細胞、血竇等結(jié)構(gòu)清晰(圖2-1)。感染魚鰓部切片可見，由于刺激隱核蟲感染，局部組織腫脹、組織增生，使鰓絲和鰓小片呈波浪狀彎曲變形，局部細胞壞死和脫落，結(jié)構(gòu)不完整(圖2-2，圖2-3)。鰓絲上附著大小不等的刺激隱核蟲，局部組織被刺激隱核蟲擠壓或誘導組織細胞增生，阻礙血細胞流通(圖2-2～圖2-6)。

注：1.健康魚切片HE×400(a.鰓絲軟骨；b.鰓小片)；2.感染魚鰓切片HE×200(a.鰓絲軟骨；b.鰓小片局部腫脹、彎曲，細胞脫落)；3.感染魚鰓切片HE×400(a.紅腫/彎曲變形；b.細胞脫落)；4.感染魚鰓切片HE×400(刺激隱核蟲)；5.感染魚鰓切片HE×400(刺激隱核蟲)；6.感染魚鰓切片HE×400(刺激隱核蟲)。
Notes：1.The historigal section of healthy fish’s gill HE×400(a.gill filament，b.gill lamella)；2.The historigal section of infected fish’s gill HE×200(a.gill filament，b.local swelling and bending of gill lamella，cell shedding)；3.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(a.redness/bending and deformation，b.cell shedding)；4.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans)；5.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans)；6.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans).

2)皮?。航】德研析K鲹體表光滑、黏液較少。感染魚皮肌組織切片可見，表皮層增厚，黏液細胞數(shù)量增多，分泌黏液亢奮，中間層增厚；小滋養(yǎng)體已進入中間層與生發(fā)層，真皮層和肌肉層沒有發(fā)現(xiàn)刺激隱核蟲(圖3-1，圖3-2)。

注：1.感染魚皮膚組織切片HE×100(a.刺激隱核蟲；b.表皮層)2.感染魚皮膚組織切片HE×200(a.刺激隱核蟲)。
Notes：1.The transverse of infected fish’s back skin HE×100(a.Cryptocaryonirritans，b.surface layer)；2.The transverse of infected fish’s back skin HE×200(a.Cryptocaryonirritans).

3)鰭條：健康魚鰭條完整，無附著物。感染魚的鰭條局部充血、潰爛，黏液增加，常附著臟物，肉眼可見附著刺激隱核蟲(圖4-1，圖4-2)。

注：1.刺激隱核蟲；2.充血。
Notes：1.Cryptocaryonirritans；2.Congestion.

4)肝臟：健康魚與感染魚肝臟脂肪變性，肝細胞腫脹，結(jié)構(gòu)不清晰，胞漿內(nèi)充滿大小不等的空泡(脂肪滴)，有的細胞核被擠到一側(cè)(圖5-1)；感染魚脂肪肝變性更明顯，肝索結(jié)構(gòu)紊亂，有的變小或消失；部分胰腺內(nèi)有較大空泡，血管內(nèi)有大量紅細胞、白細胞，局部充血、淤血和水腫(圖5-2)。

注：1.健康魚肝臟切片HE×200；2.感染魚的肝胰腺切片HE×400(a.肝腫脹；b.血竇變大；c.胰腺內(nèi)瘀血、各種白細胞增多；d.大脂肪粒)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s liver HE×200；2.The transverse of infected fish’s hepatopancreas HE×400(a.liver swelling，b.sinusoid bigger，c.blood stasis in the pancreas and various leukocytes increasing，d.large fat granule).

5)脾臟：健康魚的脾臟結(jié)構(gòu)清晰，脾膜、紅髓、白髓等排列整齊致密，脾小體結(jié)構(gòu)清晰(圖6-1)。感染魚脾臟紅髓與白髓的界限模糊不清，小梁、脾小體組織清晰，白髓內(nèi)細胞減少，許多淋巴細胞壞死，脾血竇、間質(zhì)散布紅細胞，大靜脈內(nèi)出現(xiàn)大量紅細胞，脾臟淤血(圖6-2)。

注：1.健康魚脾臟切片HE×400；2.感染魚脾臟切片HE×200(a.小梁；b.脾索；c.脾血竇；d.淤積)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s spleen HE×400；2.The transverse of infected fish’s spleen HE×200(a. trabecula，b.splenic cord，c.splenic sinus，d.blood stasis).

6)腎臟：健康魚腎臟組織結(jié)構(gòu)完整清晰，腎小管、腎小球、腎單位等排列整齊(圖7-1)。感染魚腎臟結(jié)構(gòu)模糊，局部充血，間質(zhì)腫脹出血；有的腎小管、腎小球萎縮；腎小管內(nèi)部輪廓不清晰，兩邊上皮細胞相互溶合粘連，有些壞死崩解；腎小管和腎小體存在少許空泡(脂肪滴)(圖7-2)。

注：l健康魚中腎切片HE×400(a.腎小體；b.近端小管；c.遠端小管)； 2感染魚中腎切片HE×400(a.間隙擴大；b.腎間質(zhì)腫脹、出血；c.腎小管壞死；d.腎小管細胞溶合)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s mesonephros HE×400(a.renal corpuscle，b.proximal convoluted tubule，c.distal convoluted tubule)；2.The transverse of infected fish’s mesonephros HE×400(a.gap expansion，b.renal interstitium swelling and bleeding，c.uriniferous tubules necrosis，d.uriniferous tubules cell fusion).

3 討論

從組織切片觀察可知，刺激隱核蟲對魚鰓部的損傷是致命性的。一方面，由于刺激隱核蟲的入侵，鰓部組織受刺激產(chǎn)生大量黏液，黏液覆蓋整個鰓部，鰓絲粘連甚至溶合在一起，不利于鰓小片伸張，阻礙水體流通和氣體的有效交換，也減少了有害物質(zhì)的排泄，這是造成魚窒息性死亡的外因之一；另一方面，鰓絲受損嚴重，引起局部腫脹、上皮組織增生，表現(xiàn)出鰓絲及鰓小片嚴重扭曲，局部細胞壞死和脫落，且有出血和充血現(xiàn)象，因此在鰓組織內(nèi)部的血液循環(huán)不通暢，使作為主要呼吸器官的鰓組織難于進行氣體交換，這是造成魚缺氧的重要內(nèi)因之一。此結(jié)果與雷曼紅研究的多子小瓜蟲感染金魚的組織病理學結(jié)果相似[13]。臨床觀察到瀕死的刺激隱核蟲感染魚表現(xiàn)出活動緩慢、呼吸困難的癥狀，表明魚機體處于嚴重缺氧狀態(tài)，最終窒息而亡[1-4，14]。

刺激隱核蟲雖然沒有寄生于卵形鯧鲹的各內(nèi)臟器官，沒有對其造成直接性機械損傷，但魚體在缺氧狀態(tài)下，入侵機體的刺激隱核蟲有可能對機體產(chǎn)生某種毒素，也可能因刺激隱核蟲感染而引發(fā)細菌或病毒繼發(fā)性感染，使魚體的鰓、肝、脾和腎臟受到不同程度損傷，生理機能出現(xiàn)紊亂，對機體造成傷害。研究[15-16]表明刺激隱核蟲重度感染后，魚體免疫因子的釋放受到抑制或出現(xiàn)紊亂，使其免疫能力下降。組織切片結(jié)果表明感染卵形鯧鲹的肝、脾和腎臟組織的血管內(nèi)紅細胞局部增多，表現(xiàn)為不同程度淤血，血液循環(huán)不暢，局部組織腫脹，細胞增大或壞死，可見各組織器官發(fā)生不同程度的生理機能障礙、調(diào)節(jié)能力降低，可能進一步加速感染魚死亡。

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Histopathology study on theCryptocaryonirritansdisease ofTrachinotusovatus

CHENFuyan，LIANGWanwen，CHENMing，HUANGTing，LILiping，LEIAiying，WANGRui，YANGXueming，LUOHonglin，OUYANGXianhua*

(Guangxi Key Laboratory for Aquatic Genetic Breeding and Healthy Aquaculture，Guangxi Academy of Fishery Sciences，Nanning 530021，China)

Tissue sections，HE staining and microscopic observation were adopted to investigate the histopathological changes ofTrachinotusovatuswith theCryptocaryonirritansdisease. Through histological examination，the results showed that the gills and skin of infected fish were suffered with direct mechanical injury.When the fish under the hypoxia condition，theCryptocaryonirritansmay produce toxins，or cause bacterial or viral infection，thus cause indirect injury of liver，spleen and kidney in different degrees.The injure had following performances：the gill function was seriously blocked，the fatty liver degeneration was severe ，hepatic cord was disordered，blood sinus shrunk or disappeared；histological structure of spleen was unclear and had symptoms such as congestion，hemorrhage and necrosis；renal structure was unclear，renal tubule and renal corpuscle were shrunken，renal tubule showed fused cells(adhered)，interstitial space was loose and expanded，and local cell died and had fatty granules.

Trachinotusovatus；Cryptocaryonirritans；histopathology

2017-02-27

自治區(qū)直屬公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)專項資金項目：卵形鯧鲹刺激隱核蟲病病理學研究(GXIF-2014-009)；廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局科技計劃項目：廣西養(yǎng)殖卵形鯧鲹細菌性疾病“快速選藥”試劑盒的研究與應用(桂漁牧科1304534).

陳福艷，(1979-)，女，副研究員，從事水生動物病害防治.E-mail：215174469@qq.com

歐陽賢華(1978-)，男，助理工程師，從事水產(chǎn)養(yǎng)殖與病害防治.E-mail：419625825@qq.com

陳福艷，梁萬文，陳 明，等.卵形鯧鲹刺激隱核蟲病組織病理學研究[J].漁業(yè)研究，2017，39(3)：181-187.

S941.51+4

A

1006-5601(2017)03-0181-07