黃 燕 吳克瑾 姜 峰 楊 英 倪國(guó)英 丁 罡

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Luminal型乳腺癌中TBX3表達(dá)及其與P53、PS2表達(dá)的相關(guān)性

黃 燕 吳克瑾 姜 峰 楊 英 倪國(guó)英 丁 罡

目的 研究TBX3在Luminal型乳腺癌中表達(dá)的情況及其與P53、PS2表達(dá)的相關(guān)性，探討TBX3表達(dá)在Luminal型乳腺癌中的臨床意義。方法 采用免疫組化的方法,檢測(cè)Luminal型乳腺癌組織標(biāo)本中TBX3的表達(dá)，并分析TBX3的表達(dá)與乳腺癌相關(guān)的臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 ①TBX3在luminal型乳腺癌組織中的陽(yáng)性率為82.19%；②TBX3表達(dá)與luminal型乳腺癌的年齡及有無絕經(jīng)無關(guān)(P>0.05)，與乳腺癌腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期有關(guān)(P<0.05)；③TBX3在luminal型乳腺癌中的表達(dá)與P53表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.36283，P<0.05)，與PS2表達(dá)無明顯相關(guān)性(γ=-0.1761，P>0.05)。結(jié)論 TBX3與luminal型乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲過程有關(guān)，且與P53表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。

乳腺癌；TBX3；P53；PS2

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:367～369)

乳腺癌是最常見的女性惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅婦女的身心健康[1]，目前臨床上常用的乳腺癌分子分型是根據(jù)乳腺癌組織表達(dá)ER、PR、Her-2、Ki-67的情況，對(duì)乳腺癌進(jìn)行分子分型，其中l(wèi)uminal型乳腺癌(包括luminal A型luminal B型)最為常見，大約占乳腺癌48～58%[2-3]。作者先前的研究[4]發(fā)現(xiàn)TBX3在luminal型乳腺癌中高表達(dá)，提示TBX3與luminal 型乳腺癌關(guān)系密切，它有可能是luminal型乳腺癌預(yù)后因子之一。本文通過進(jìn)一步研究luminal 型乳腺癌組織中TBX3的表達(dá)，并分析它與臨床病理參數(shù)的關(guān)系及與P53、PS2表達(dá)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2011年1月至2013年12月在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院施行手術(shù)切除的luminal型乳腺癌73例，要求病史資料完整，術(shù)前未行放化療或靶向治療，病理標(biāo)本保存完好。73例患者均為女性，患者年齡39～93歲，平均年齡62.86歲，≤65歲42例，>65歲31例；月經(jīng)情況：絕經(jīng)56例，未絕經(jīng)17例；腫塊大小：腫塊≤2 cm 34例，腫塊>2 cm 39例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例；分期：Ⅰ期25例，Ⅱ期32例，Ⅲ期16例；免疫組化結(jié)果：P53(+)34例，P53(-)39例；PS2(+)52例，PS2(-)21例；luminal A型40例、luminal B型33例。

1.2 主要試劑

人TBX3多克隆抗體：abcam公司生產(chǎn)，英國(guó)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

腫瘤標(biāo)本均經(jīng)過10%甲醛固定、石蠟包埋、并切片備用。免疫組化二步法染色嚴(yán)格按照試劑說明書操作步驟進(jìn)行，采用高壓修復(fù)法抗原修復(fù)，陰性對(duì)照組：PBS磷酸緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 陽(yáng)性結(jié)果判斷

免疫組化結(jié)果的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)參考許良中[5]的免疫組化評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，具體判別標(biāo)準(zhǔn)為：光鏡下隨機(jī)觀察4～5個(gè)不重疊的高倍(×200)視野，計(jì)數(shù)100～200個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞染色陽(yáng)性表達(dá)為境界清晰,突出于背景的棕黃色或棕褐色顆粒，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和著色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：無陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)0分;陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占1%～30%，計(jì)1分;陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占31%～70%，計(jì)2分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占71%～100%，計(jì)3分；著色強(qiáng)度：不著色為0分；淺棕色為1分；棕黃色為2分；棕揭色為3分。兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)之和累計(jì)：0分為陰性(-)，1、2分為弱陽(yáng)性(+)，3、4分為陽(yáng)性(++)，5、6分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。結(jié)果分為陰性(0分)及陽(yáng)性(+～+++)兩組進(jìn)行分析。

1.5 乳腺癌分子分型標(biāo)準(zhǔn)

分子分型標(biāo)準(zhǔn)為2013年第十三屆St.Gallen國(guó)際乳腺癌會(huì)議專家共識(shí)[6-7]，即:①luminal A型：免疫組織化檢測(cè)結(jié)果為ER陽(yáng)性和(或)PR陽(yáng)性，Her-2陰性，Ki-67<20%；②luminal B型：ER陽(yáng)性或PR陽(yáng)性，Her-2 陽(yáng)性；或ER陽(yáng)性和(或)PR陽(yáng)性，Her-2陰性，Ki-67≥20%；③Her-2型：ER、PR陰性，Her-2陽(yáng)性，Ki-67多為高表達(dá)；④Basical-like型：ER(-)和PR(-)/HER-2(-)。本組研究對(duì)象73例均為luminal型乳腺癌，其中l(wèi)uminal A型40例、luminal B型33例。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

乳腺癌組織在不同的臨床病理因素(年齡、月經(jīng)、腫塊大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期)下TBX3表達(dá)率的差異均采用χ2檢驗(yàn)，如出現(xiàn)個(gè)別因樣本數(shù)較少，不符合χ2檢驗(yàn)條件，則采用確切概率分析法，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)分析(χ2檢驗(yàn)、確切概率分析法、Spearman相關(guān)分析均運(yùn)用SAS 8.02軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Luminal型乳腺癌中TBX3表達(dá)與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系

TBX3表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，陽(yáng)性表達(dá)為境界清晰、突出于背景的黃色或棕黃色。73例luminal型乳腺癌組織中，TBX3表達(dá)陽(yáng)性率為82.19%(60/73)；其與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

表1 TBX3表達(dá)與luminal型乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

2.2 Luminal型乳腺癌組織中TBX3表達(dá)與P53、PS2、Her-2、Ki-67蛋白表達(dá)的相關(guān)性

Luminal型乳腺癌組織中，TBX3表達(dá)陽(yáng)性率為82.19%，P53陽(yáng)性表達(dá)率為46.58%(34/73)，兩者呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.36283，P=0.0016<0.05)；PS2陽(yáng)性表達(dá)率為71.23%(52/73)，兩者無明顯相關(guān)性(γ=-0.1761，P=0.2457>0.05)，見表2。

表2 Luminal型乳腺癌組織中TBX3表達(dá)與P53、PS2蛋白表達(dá)的相關(guān)性/例

3 討論

3.1 TBX3與luminal型乳腺癌

乳腺癌是1個(gè)多基因突變驅(qū)動(dòng)的疾病，TBX3基因是乳腺癌相關(guān)的癌基因之一[8]。TBX基因家族也稱T-box，它具有高度保守的DNA結(jié)合區(qū)-T區(qū)，T區(qū)具有回文結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA的兩個(gè)位點(diǎn)，其中的一個(gè)位點(diǎn)與靶基因的啟動(dòng)子特點(diǎn)序列相結(jié)合形成半位結(jié)合體，并通過與不同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合發(fā)揮不同的作用[9]。TBX3不但與生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)，它與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中關(guān)系密切，國(guó)內(nèi)學(xué)者[10]研究發(fā)現(xiàn)TBX3基因在癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織，作者單位先前研究提示TBX3在乳腺癌中的表達(dá)明顯高于良性腫瘤和癌旁組織，中晚期乳腺癌表達(dá)明顯高于早期乳腺癌，研究發(fā)現(xiàn)TBX3在乳腺癌在luminal A型、luminal B型乳腺癌中高表達(dá)，提示結(jié)果提示TBX3基因與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后因素有關(guān)，而且它與luminal A型、luminal B型乳腺癌的關(guān)系密切，可能是luminal型乳腺癌預(yù)后因子之一[4]。本研究結(jié)果顯示TBX3在luminal型乳腺癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為82.19%，TBX3的表達(dá)與患者的年齡及有無絕經(jīng)無關(guān)，與乳腺癌腫塊的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期有關(guān)，它在腫塊大于2 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅱ、Ⅲ期luminal型乳腺癌中呈高表達(dá)。這提示TBX3在luminal型乳腺癌的發(fā)生進(jìn)展及侵襲過程中發(fā)揮了作用。

3.2 TBX3與P53

P53是1種促進(jìn)凋亡的細(xì)胞因子，即野生型P53，在正常的情況下，它在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)維持低水平，主要作用于受損的細(xì)胞，延緩細(xì)胞周期停滯在G1/S節(jié)點(diǎn)上以修復(fù)損傷DNA，而當(dāng)DNA損傷超過細(xì)胞的修復(fù)能力時(shí)，就誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡[11]。野生型P53是人體細(xì)胞內(nèi)最有效的腫瘤抑制因子之一，但也是最容易發(fā)生突變的蛋白之一，突變型P53一方面喪失了野生型P53的抑癌活性，另一方面能產(chǎn)生獲得性功能，反而促進(jìn)癌癥的發(fā)生與發(fā)展[12]。也就是說，突變型P53由原來的抑癌基因變成了癌基因，從而促進(jìn)正常細(xì)胞的轉(zhuǎn)化或加速已經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞進(jìn)一步惡化[13]。研究表明，在乳腺癌、直腸癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌等多種惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了突變型P53基因的高表達(dá)[14-17]。本研究結(jié)果顯示，P53在luminal型乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為46.58%，并且與TBX3的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，提示luminal型乳腺癌組織中TBX3表達(dá)上調(diào)可能與突變型P53基因的表達(dá)上調(diào)有關(guān)。

3.3 TBX3與PS2

PS2是雌激素誘導(dǎo)蛋白之一，由Masialowski于1982 年從激素依賴性乳腺癌MCF-7細(xì)胞株中提取出來的，在乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率約為43%～58%，它是一種雌性激素調(diào)節(jié)的基因產(chǎn)物，其表達(dá)反映ER功能，研究表明，PS2在反映腫瘤惡性程度上有重要價(jià)值，其陽(yáng)性率越高，則腫瘤的惡性程度越低，患者預(yù)后越好[18]。本研究發(fā)現(xiàn)PS2在luminal型乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為71.23%，高于陳守菊等[19]報(bào)道的PS2在乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率45.6%，這考慮與本研究的對(duì)象為luminal型乳腺癌有關(guān)，luminal型乳腺癌ER為陽(yáng)性，這正好了說明PS2是反映ER功能的指標(biāo)。在TBX3與PS2在luminal型乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析方面，沒有發(fā)現(xiàn)兩者有相關(guān)性關(guān)系。

綜上所述，TBX3在luminal型乳腺癌中的表達(dá)患者的年齡及是否絕經(jīng)無關(guān)；與乳腺癌腫塊的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期有關(guān)，它在腫塊大于2 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅱ、Ⅲ期luminal型乳腺癌中呈高表達(dá)。這提示TBX3可能與乳腺癌的發(fā)生進(jìn)展及侵襲過程有關(guān)；在luminal型乳腺癌中，TBX3與P53 蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，提示TBX3與P53在luminal型乳腺癌的進(jìn)展中可能具有協(xié)同作用；TBX3與Her-2及PS2無明顯的相關(guān)性關(guān)系。

[1] Benson JR,Jatoi I.The global breast cancer burden〔J〕.Future Oncol,2012，8(6):697-702.

[2] Dawood S,Hu R,Michelle D,et al.Defining breast cancer prognosis based on molecular phenotypes:results from a large cohort study〔J〕.Breast Cancer Res Treat,2011,126(1):185-192.

[3] Cancello G，Maisonneuve P，Rotmensz N，et al.Progesterone receptor loss identifies Luminal Bbreast cancer subgroups at higher risk of relapse〔J〕.Ann Oncol,2012,24(3):661-668.

[4] 黃 燕,丁 罡,陳 峰,等.TBX3基因在不同分子亞型乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.實(shí)用癌癥雜志，2014,29(10):1201-1204.

[5] 許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)〔J〕.中國(guó)癌癥雜志,1996,6(4):229-230.

[6] Goldhirsch A，Winer EP，Coates AS，et al.Personalizing the treatment of women with early breast cancer:highlights of the St Gallen International Expert Consensus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2013〔J〕.Ann Oncol,2013,24(9):2206-2223.

[7] 王新昭,左文述,劉 琪,等.2013年St Gallen 乳腺癌會(huì)議國(guó)際專家共識(shí)薈萃〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2013,20(23):1859-1864.

[8] Nik-Zainal S,Alexandrov LB,Wedge DC，et al.Mutational processes molding the genomes of 21 breast cancers〔J〕.Cell,2012,149(5):979-993.

[9] Tada M,Smith JC.T-targets:clues to understanding the fu- nctions of T-box proteins〔J〕.Dev Growth Differ,2001,43(1):1-11.

[10] 陳忠華,呂光明,季天海.TBX3基因mRNA在乳腺癌中表達(dá)的檢測(cè)及其意義〔J〕.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,29(1):87-89.

[11] Riley T,Sontag E,Chen P，et al.Transcriptional control of human p53-regulated genes〔J〕.Nat Rev Mol Cell Bio,2008,9(5):402-412.

[12] 方 勇，藍(lán)文賢,孔令義.p53蛋白的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究進(jìn)展〔J〕.生命的化學(xué)，2015，35(4):467-474.

[13] Saxena R，Dwivedi A.ErbB family receptor inhibitors as t- herapeutic agents in breast cancer:current status and future clinical perspective〔J〕.Med Res Rev，2012,32(1):166-215.

[14] 張書卿，張緒良，黃丹青.Ki-67和p53在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.醫(yī)學(xué)綜述,2015,21(18):3400-3402.

[15] 趙喜連,郗彥鳳,白文啟,等.錯(cuò)配修復(fù)蛋白和p53蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌的臨床病理關(guān)系及其相關(guān)性〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2016,32(4):370-375.

[16] 穆桂芳,穆雪峰,畢海靜,等.VEGF和突變型p53在胃癌組織表達(dá)及意義〔J〕.中國(guó)免疫學(xué)雜志,2016,32(1):90-92.

[17] 李 燕，趙 敏.不同年齡子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤分級(jí)及ER、PR、P53、CD44V6表達(dá)差異〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,24(12):1955-1958.

[18] Masiakowski P,Breathnach R,Bloch J,et al.Cloning of cDNA sequences of hormone-regulated genes from the MCF-7 human breast cancer cell line〔J〕.Nucleic Acids Res,1982,10(24):7895-7903.

[19] 陳守菊,劉福川.乳腺癌 ER、PR、PS2、C-erbB2、Ki-67 聯(lián)合檢測(cè)的臨床意義〔J〕.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,10(9):653-655.

(編輯：吳小紅)

Expression of TBX3 and the Correlations with P53、PS2 in Luminal Breast Cancer

HUANG Yan,WU Kejin，JIANG Feng，et al.

Chongming branch of Xinhua Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai,202150

Objective To study the expression of TBX3 and its clinical significance in luminal breast cancer.Methods Luminal breast cancer tissues were detected by immunohistochemistry for TBX3,and analyzed the relation between the expression of TBX3 and the clinical pathologic parameters.Results ①The positive rate of TBX3 express in the luminal breast cancer was 82.19%;②The expression of TBX3 was not correlated with the age of patient and menopause or not(P>0.05),but was correlated with the size of mass in the breast,the cancer lymph node metastasis and the clinical stage of breast cancer (P<0.05).③The expression of TBX3 was positively correlated with the expression of P53(γ=0.36283，P<0.05);There were no correlations between the expression of TBX3 and the expression of PS2(γ=-0.1761，P>0.05).Conclusion TBX3 associated with the progression and invasive process of luminal breast cancer，and is positively correlated with P53.

Breast cancer;TBX3;P53;PS2

上海崇明縣青年科技啟明星項(xiàng)目(編號(hào)：CQYL 2014-01)

202150 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院(黃 燕，姜 峰，楊 英，倪國(guó)英，丁 罡)；200092 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院(吳克瑾)

丁 罡

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.03.006

R737.9

A

1001-5930(2017)03-0367-03

2016-06-02

2017-02-07)