胡友明 張娟安 劉 軍 陳漢東

?

AFP、AFU、GPC3及GP73聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷意義

胡友明 張娟安 劉 軍 陳漢東

目的 探討AFP、AFU、GP73和GPC3聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌(primary hepatic cancer，PHC)的診斷價值。方法 收集荊州市中心醫(yī)院2013年12月至2015年3月收治的PHC患者血清標(biāo)本45例，肝硬化患者血清標(biāo)本36例，乙型肝炎患者血清標(biāo)本54例和健康體檢者血清標(biāo)本50例，分別檢測各組研究對象血清AFP、AFU、GP73和GPC3水平，采用ROC曲線分析各標(biāo)志物診斷PHC的價值。結(jié)果 PHC組患者血清AFP、AFU、GP73和GPC3表達(dá)水平均顯著高于肝硬化組、乙型肝炎組和健康體檢組(P<0.05)。肝硬化組和乙型肝炎組患者血清AFP、AFU水平顯著高于健康體檢組(P<0.05)。肝硬化組患者血清GP73水平顯著高于乙型肝炎組患者(P<0.05)，乙型肝炎組患者血清GP73水平顯著高于健康對照組。聯(lián)合AFP、AFU、GP73和GPC3檢測的ROC曲線下面積為0.922，大于任何單一標(biāo)志物檢測。聯(lián)合AFP、AFU、GP73和GPC3檢測的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性分別為93.8%，81.5%和90.1%，其中敏感性和準(zhǔn)確性明顯高于任何單一標(biāo)志物。結(jié)論 聯(lián)合AFP、AFU、GP73和GPC3檢測可以顯著提高PHC的檢出率和準(zhǔn)確性，為臨床早期診斷PHC提供可靠參考。

原發(fā)性肝癌；甲胎蛋白；高爾基體蛋白73；磷脂酰肌醇蛋白聚糖3；α-巖藻糖苷酶

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:375～377)

原發(fā)性肝癌(primary hepatic cancer，PHC)是我國常見惡性腫瘤之一，惡性程度高，5年生存率低。PHC起病較隱匿，早期臨床癥狀不典型，診斷難度較大，大多數(shù)患者確診時已是中晚期，失去最佳治療時機。因此，PHC的早期診斷對治療及預(yù)后至關(guān)重要。甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)是診斷肝癌的經(jīng)典腫瘤標(biāo)志物，但是單獨使用AFP達(dá)不到理想的特異度和靈敏度。近年來，薈萃分析顯示高爾基體蛋白73(golgi protein73，GP73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3，GPC3)和α-巖藻糖苷酶(alpha fucosidase，AFU)在肝癌患者血清中出現(xiàn)高表達(dá)[1]。本研究聯(lián)合檢測AFP、GP73、GPC3和AFU 4種腫瘤標(biāo)志物在PHC患者血清中的表達(dá)水平，旨在探討4種標(biāo)志物聯(lián)合檢測對PHC的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集荊州市中心醫(yī)院2013年12月至2015年3月收治的PHC患者血清標(biāo)本45例，肝硬化患者血清標(biāo)本36例，乙型肝炎患者血清標(biāo)本54例和健康體檢者血清標(biāo)本50例。PHC組男性29例，女性16例；年齡32～69歲，平均(43.2±7.5)歲。肝硬化組男性21例，女性15例；年齡35～72歲，平均(45.3±7.2)歲。乙型肝炎組男性28例，女性26例；年齡24～75歲，平均(40.6±8.1)歲。健康體檢組男性26例，女性24例；年齡25～70歲，平均(42.9±8.0)歲。4組患者年齡，性別構(gòu)成比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

血清AFU試劑由寧波美康生物科技股份有限公司提供，儀器采用美國貝克曼庫爾特公司LX-20型全自動生化分析儀；血清AFP測定儀器采用美國貝克曼庫爾特公司DX1800全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，試劑和校準(zhǔn)品采用其公司原裝配套試劑。血清GP73和GPC3采用美國RD Biosciences公司提供的酶聯(lián)免疫分析試劑盒檢測。嚴(yán)格按照說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組患者4種腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)水平

PHC組患者血清AFP、AFU、GP73和GPC3表達(dá)水平均顯著高于肝硬化組、乙型肝炎組和健康體檢組(P<0.05)。肝硬化組和乙型肝炎組患者血清AFP、AFU水平顯著高于健康體檢組(P<0.05)，但肝硬化組和乙型肝炎組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。肝硬化組患者血清GP73水平顯著高于乙型肝炎組患者(P<0.05)，乙型肝炎組患者血清GP73水平顯著高于健康對照組患者。血清GPC3水平在肝硬化組、乙型肝炎組患者和健康體檢組患者間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組患者4種腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)水平

2.2 4種腫瘤標(biāo)志物單獨檢測及聯(lián)合檢測的ROC曲線分析

聯(lián)合AFP、AFU、GP73和GPC3檢測的ROC曲線下面積為0.922，大于任何單一標(biāo)志物檢測。見表2。

2.3 4種腫瘤標(biāo)志物檢測對PHC診斷效能分析

聯(lián)合AFP、AFU、GP73和GPC3檢測的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性分別為93.8%、81.5%和90.1%，其中敏感性和準(zhǔn)確性明顯高于任何單一標(biāo)志物，但是特異性有所降低。見表3。

3 討論

肝癌是我國常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，死亡率位居第二，并且近年來呈現(xiàn)出發(fā)病率和死亡率逐年上升的趨勢。PHC患者早期多不呈現(xiàn)典型的臨床表現(xiàn)，以致早期發(fā)現(xiàn)及診斷該病困難，因此對早期PHC患者尋求有效的檢測方法，提高診斷水平就成為臨床醫(yī)生關(guān)注的焦點。血清腫瘤標(biāo)志物是腫瘤細(xì)胞或是腫瘤相關(guān)組織產(chǎn)生的可在血液中呈現(xiàn)高表達(dá)的物質(zhì)，與腫瘤的生長、擴散和發(fā)展有關(guān)[2-3]。AFP是胚胎發(fā)育早期形成的一種糖蛋白，是目前臨床上診斷肝癌常用的腫瘤標(biāo)志物，但是高分化或分化很差的肝癌細(xì)胞常不表達(dá)AFP，而在病毒性肝炎和肝硬化等慢性肝臟疾病中出現(xiàn)高表達(dá)，臨床診斷PHC的靈敏度較低[4]。本研究中AFP診斷PHC的敏感性為78.6%，準(zhǔn)確性為80.5%，可見單獨的AFP檢測診斷PHC的漏診率和誤診率還是比較高的。AFU是存在于多種組織中的一種溶酶體酸性水解酶，幾乎在所有的哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)[5]。研究顯示PHC患者中AFU呈現(xiàn)高表達(dá)，檢測PHC時，可以與AFP互補，提高診斷的敏感性和特異性[6]。GP73是高爾基Ⅱ型跨膜蛋白，在正常肝臟細(xì)胞中，GP73主要是在匯管區(qū)的膽管上皮細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，在其他肝細(xì)胞中低表達(dá)或不表達(dá)[7]，在疾病狀態(tài)時，GP73可從高爾基體順面膜囊尚循環(huán)出來并到達(dá)胞內(nèi)體及細(xì)胞表面[8]，研究顯示GP73的特異度和靈敏度顯著高于AFP，且在肝轉(zhuǎn)移癌中尤其顯著[9]。GPC3通過磷脂酰肌醇錨定在細(xì)胞膜上，屬于分泌蛋白，介導(dǎo)多種信號傳導(dǎo)途徑，通過多聚陰離子GAG側(cè)鏈或核心蛋白，與Wnt、胰島素樣生長因子-Ⅱ、轉(zhuǎn)化酶等多種細(xì)胞因子發(fā)生作用，導(dǎo)致肝細(xì)胞增生與分化，參與肝細(xì)胞的癌變過程[10-11]。

表2 4種腫瘤標(biāo)志物單獨檢測及聯(lián)合檢測的ROC曲線分析

表3 4種腫瘤標(biāo)志物檢測對PHC診斷效能/%

單一標(biāo)志物對于腫瘤的檢測往往存在敏感性和特異性的不足，而聯(lián)合檢測可以達(dá)到互補的作用。目前，對于PHC的診斷，眾多學(xué)者采用聯(lián)合檢測的方法研究，結(jié)果幾乎都顯示出聯(lián)合檢測較單一標(biāo)志物檢測能獲得較高的檢出率和準(zhǔn)確性。謝明水等[12]分析了AFP-L3、GP73和GPC3聯(lián)合檢測在PHC中的診斷價值，結(jié)果顯示聯(lián)合檢測的ROC曲線下面積可達(dá)到0.960，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于單獨檢測的ROC曲線下面積，明顯提高PHC的檢出率。葉宏[13]聯(lián)合AFP、AFU和β2-微球蛋白及透明質(zhì)酸診斷PHC，結(jié)果顯示聯(lián)合這4種腫瘤標(biāo)志物能顯著提高早期診斷PHC的敏感性和診斷率。本研究聯(lián)合AFP、AFU、GP73和GPC3 4種腫瘤標(biāo)志物檢測PHC，結(jié)果顯示PHC患者血清中這4種腫瘤標(biāo)志物均出現(xiàn)顯著升高，其中肝硬化和乙型肝炎患者的血清AFP、AFU和GP73水平與健康體檢者比較也出現(xiàn)了顯著升高，而GPC3只在PHC患者血清中出現(xiàn)顯著升高，可見GPC3診斷肝癌的特異性較高，可達(dá)到90.7%。ROC曲線分析的結(jié)果顯示聯(lián)合4種標(biāo)志物檢測的曲線下面積為0.922，高于任何單一標(biāo)志物和其他任意組合檢測，且聯(lián)合檢測的敏感性可達(dá)到93.8%，準(zhǔn)確率可達(dá)到92.1%，相比于單獨檢測明顯升高，特異性略有所降低，為81.5%。由此可見聯(lián)合AFP、AFU、GP73和GPC3檢測可以顯著提高PHC的檢出率和準(zhǔn)確性，降低假陽性和假陰性結(jié)果的發(fā)生率，為臨床早期診斷PHC提供可靠參考。

[1] 楊素麗，謝 風(fēng).腫瘤標(biāo)志檢測應(yīng)用于原發(fā)性肝癌的研究進(jìn)展〔J〕.中國實驗診斷學(xué)，2015，19(11)：1981-1982.

[2] 王波蘭.AFP與AFU聯(lián)合檢測原發(fā)性肝癌的意義〔J〕.實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2014，32(5)：60-61.

[3] 黃玲莎，朱 波，陳艷華，等.腫瘤標(biāo)志物三項聯(lián)合檢測在鼻咽癌診斷中的意義探討〔J〕.檢驗醫(yī)學(xué)，2006，21(5)：472.

[4] Marrero JA，El-Serag HB.Alpha-fetoprotein should be included in the hepatocellular carcinoma surveillance guidelines of the American Association for the study of liver diseases〔J〕.Hepatology，2011，53(3)：1060-1061.

[5] Stefaniuk P，Cianciara J，Wiercinska-Drapalo A.Present a- nd future possibilities for early diagnosis of hepatoeellular carcinoma〔J〕.World J Gastroenterol，2010，16(4)：418-424.

[6] Song P，F(xiàn)eng X，Inagaki Y，et al.Clinical utility of simultaneous measurement of alpha-fetoprotein and des-gamma-carboxy prothrombin for diagnosis of patients with hepatocellular carcinoma in China：A multi-center case-controlled study of 1153 subjects〔J〕.Biosci Trends，2014，8(5)：266-273.

[7] Yang Y.GP73 and AFP individual and joint the value of the diagnosis of primary liver cancer〔J〕.Clin J Lab Med，2012，35(11)：1034.

[8] Puri S，Bachert C，F(xiàn)immel CJ，et al.Cycling of early Golgi proteins via the cell surface and endosomes upon luminal pH disruption〔J〕.Traffic，2002，3(9)：641-653.

[9] 楊愛華，陸 文，張 維.血清高爾基體蛋白73在肝細(xì)胞肝癌早期診斷中的價值〔J〕.實用臨床醫(yī)藥雜志，2013，17(5)：29.

[10] Capurro M，Wanless IR，Sherman M，et al.Glypican-3：a n- ovel serum and histochemical marker for hepatocellular carcinoma〔J〕.Gastroenterology，2003，125(1)：89-97.

[11] Hippo Y，Watanabe K，Watanabe A，et al.Identification of soluble NH2-terminal fragment of glypican-3-as a serological marker for early-stage hepatocellular carcinoma〔J〕.Cancer Res，2004，64(7)：2418-2423.

[12] 謝明水，劉 楊，陳丹丹，等.AFP-L3、GP73、GPC3聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用價值〔J〕.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2014，35(5)：519-520.

[13] 葉 宏.聯(lián)合檢測甲胎蛋白、α-巖藻糖苷酶、β2-微球蛋白及透明質(zhì)酸對診斷原發(fā)性肝癌的意義〔J〕.中國醫(yī)藥科學(xué)，2015，5(14)：162-164.

(編輯：甘 艷)

The Significance of Combined Detection of AFP，AFU，GPC3 and GP73 in the Diagnosis of Primary Hepatocellular Carcinoma

HU Youming，ZHANG Juan'an，LIU Jun，et al.

Jingzhou Shashi District People's Hospital，Jingzhou，434000

Objective To investigate the value of combined detection of AFP，AFU，GP73 and GPC3 in the diagnosis of primary liver cancer.Methods Collected 45 cases of serum samples of PHC patients，36 patients with liver cirrhosis，54 patients with hepatitis B and 50 cases of healthy patients.Detected the levels of serum AFP，AFU，GP73 and GPC3 in each group respectively，and used ROC curve to analyze the diagnostic value of PHC.Results The expression levels of AFP，AFU，GP73 and GPC3 in the serum of patients with PHC were significantly higher than those in patients with cirrhosis，hepatitis B group and healthy control group (P<0.05).The serum AFP and AFU levels in liver cirrhosis group and hepatitis B patients were significantly higher than that in healthy control group(P<0.05).The serum level of GP73 in patients with liver cirrhosis was significantly higher than that of patients with hepatitis B(P<0.05)，the level of serum GP73 in patients with hepatitis B was significantly higher than that in healthy control group.The area under the ROC curve of the combination of AFP，AFU，GP73 and GPC3 was 0.922，larger than that of any single marker.The sensitivity，specificity and accuracy of the combined detection of AFP，AFU，GP73 and GPC3 were 93.8%，81.5% and 90.1%，respectively，and the sensitivity and accuracy were significantly higher than those of any of the markers.Conclusion Combined detection of AFP，AFU，GP73 and GPC3 can significantly improve the detection rate and accuracy of PHC，and provide a reliable reference for the early diagnosis of PHC.

Primary hepatic cancer；AFP；GP73；GPC3；AFU

434000 湖北省荊州市沙市區(qū)人民醫(yī)院(胡友明，陳漢東)；434000 湖北省荊州市中心醫(yī)院(張娟安，劉 軍)

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.03.008

R735.7

A

1001-5930(2017)03-0375-03

2016-05-04

2016-11-04)