蔣 念，王雪迪，田 銳，謝顯彪，賴英榮，彭挺生

骨肉瘤中Axl抑制凋亡及與凋亡蛋白的相關(guān)性

蔣 念1，王雪迪1，田 銳1，謝顯彪2，賴英榮1，彭挺生1

目的 探討受體酪氨酸激酶Axl在骨肉瘤中的抗凋亡作用，分析磷酸化Axl(P-Axl)與抗凋亡蛋白之間的相關(guān)性。方法 常規(guī)培養(yǎng)骨肉瘤細(xì)胞株MG63、143B和U2OS，分別設(shè)立人重組蛋白Gas6刺激組、Axl siRNA轉(zhuǎn)染組、Gas6刺激+Axl siRNA轉(zhuǎn)染組及各陰性對照組，應(yīng)用順鉑(DDP)或氨甲喋呤(MTX)致使細(xì)胞凋亡后，通過Hoechst 33258染色、MTT實(shí)驗(yàn)、Annexin V-FIFC等檢測法統(tǒng)計分析不同處理組間細(xì)胞凋亡率的差異及不同濃度Gas6刺激后骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期變化；采用免疫組化EnVision兩步法檢測41例骨肉瘤及18例骨纖維結(jié)構(gòu)不良組織中P-Axl、BCL-2及Bax的表達(dá)，分析患者預(yù)后與三者的相關(guān)性；應(yīng)用TUNEL染色分析骨肉瘤組織中P-Axl表達(dá)水平與細(xì)胞凋亡率的相關(guān)性。結(jié)果 Hoechst 33258、MTT、Annexin V-FIFC等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，均表明骨肉瘤細(xì)胞株MG63、143B和U2OS中Gas6通過活化Axl降低DDP或MTX導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡率(P<0.05)，Axl siRNA則引起細(xì)胞凋亡率增加(P<0.05)，在Axl siRNA干擾前Gas6預(yù)刺激有降低凋亡率的趨勢。41例骨肉瘤組織中P-Axl、BCL-2、Bax的陽性率分別為85.4%、70.7%及36.6%；18例骨纖維結(jié)構(gòu)不良組織中三者陽性率分別為11.1%、22.2%及11.1%，兩組相比骨肉瘤組織中P-Axl、BCL-2、Bax的表達(dá)明顯增高(P<0.05)。Pearson相關(guān)性分析顯示BCL-2表達(dá)與P-Axl呈顯著正相關(guān)(r=0.842，P<0.000 1)；Cox單因素風(fēng)險回歸分析發(fā)現(xiàn)BCL-2和Bax表達(dá)是影響患者預(yù)后的預(yù)測因素；TUNEL結(jié)果顯示P-Axl高表達(dá)的骨肉瘤組織中細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.05)。結(jié)論 骨肉瘤中Gas6/Axl活化后通過調(diào)節(jié)凋亡蛋白BCL-2，抑制由DDP或MTX誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。

骨肉瘤；Axl；BCL-2；細(xì)胞凋亡；預(yù)后

骨肉瘤是原發(fā)于骨的惡性腫瘤，好發(fā)于兒童和青少年，其惡性度高，易發(fā)生早期肺轉(zhuǎn)移。目前采用新輔助化療和外科手術(shù)相結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)治療方式，但由于缺乏早期診斷指標(biāo)和腫瘤化療耐受等因素，患者的預(yù)后情況較差[1]。Axl是TAM酪氨酸激酶受體家族中的一員，其家族成員中還包括Tyro3等[2-3]。TAM酪氨酸激酶受體家族有2個共同的配體Gas6和protein S，其中Gas6/Axl蛋白復(fù)合物參與調(diào)控體內(nèi)腫瘤多種生物學(xué)行為，如細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、黏附等[4]。細(xì)胞凋亡即細(xì)胞程序性死亡，與體內(nèi)多種疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[5]。BCL-2家族屬于凋亡相關(guān)蛋白，包括促凋亡因子(Bax、Bak、Bad等)和抗凋亡因子(BCL-2、BCL-xL、BCL-w等)。細(xì)胞接收凋亡信號后，線粒體膜滲透性增高，釋放細(xì)胞色素C，抗凋亡蛋白可通過抑制細(xì)胞色素C的釋放抑制凋亡，其促凋亡蛋白作用與之相反[6]。BCL-2在多種腫瘤如乳腺癌、前列腺癌中表達(dá)增高[7-8]，在非小細(xì)胞肺癌中BCL-2高表達(dá)者預(yù)后差[9]；Bax在結(jié)腸癌、鼻咽癌中的表達(dá)降低[10-11]，在口腔鱗癌中Bax高表達(dá)者預(yù)后較好[12]。因此，凋亡相關(guān)蛋白在不同腫瘤中的表達(dá)水平不盡相同，可能與腫瘤的預(yù)后有關(guān)。本文著重探討骨肉瘤中凋亡相關(guān)蛋白BCL-2和Bax的表達(dá)，分析磷酸化Axl(P-Axl)與BCL-2、Bax表達(dá)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集2010～2013年中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院首診無轉(zhuǎn)移的41例骨肉瘤石蠟標(biāo)本，其中男性23例，女性18例；患者年齡8～58歲，平均16.32歲；術(shù)后隨訪30～70個月，16例患者死于骨肉瘤。另收集18例骨纖維結(jié)構(gòu)不良石蠟標(biāo)本作為良性對照組。

1.2 試劑 收集骨肉瘤細(xì)胞株MG63、143B、U2OS(中科院上海細(xì)胞研究所)，DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、100 U/mL青鏈霉素雙抗(GIBCO)，P-Axl單克隆抗體和人重組蛋白Gas6(R&D，美國)，BCL-2、Bax單抗(DAKO，丹麥)，順鉑(DDP)、氨甲喋呤(MTX)(大連美侖公司)，Axl siRNA及陰性對照siRNA、RNA提取試劑盒(廣州銳博公司)，X-treme(Roche，美國)，qRT-PCR逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、擴(kuò)增試劑盒SYBR Premix Ex Taq Ⅱ試劑盒及引物(Japan Takara)，Hoechst 33258、MTT、DNA檢測試劑盒、免疫組化二抗試劑盒(凱基，中國)，Annexin-V-FITC、TUNEL試劑盒(Roche，德國)，熒光顯微鏡(Leica，德國)，流式細(xì)胞儀(Beckman Coulter，美國)。

1.3 Axl siRNA瞬時轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞系 收集對數(shù)生長期的細(xì)胞株MG63、143B，提前1天接種于6孔板，密度為30%，當(dāng)細(xì)胞生長密度增至60%，換無血清培養(yǎng)液，每孔1.5 mL，4 h后實(shí)驗(yàn)組每孔加入Axl siRNA 5 μL、opti-mem 500 μL和x-treme 5 μL混合物，對照組加入對照siRNA 5 μL、opti-mem 500 μL和x-treme 5 μL混合物(室溫下已靜置30 min)，輕搖后置于37 ℃培養(yǎng)箱中6 h，換完全培養(yǎng)液，48 h內(nèi)提取RNA并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用熒光定量PCR進(jìn)行擴(kuò)增。Axl引物正向： 5′-TCAAGGTGGCTGTGAAGACGA-3′，反向：5′-CGTTCAGAACCCTGGAAACAGAC-3′；GAPDH引物正向：5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAA C-3′，反向：5′-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3′。

1.4 Hoechst 33258染色檢測凋亡細(xì)胞 骨肉瘤細(xì)胞株MG63和U2OS分別用濃度為0、400 ng/mL的Gas6預(yù)處理24 h，然后用20 μL/mL DDP或600 μL/mL MTX處理24 h。1 μL/mL Hoechst 33258避光室溫染色10 min，熒光顯微鏡下拍照；實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。用1-OD(處理組)/OD(對照組)計算抑制率，細(xì)胞抑制率高者凋亡細(xì)胞百分率(凋亡率)低，細(xì)胞抑制率低者細(xì)胞凋亡率高。

1.5 MTT法檢測細(xì)胞凋亡率 取對數(shù)生長期的細(xì)胞株MG63和143B，以每孔3×103個接種于96孔板。分別設(shè)陰性對照組、Gas6刺激組、Axl siRNA轉(zhuǎn)染組和Axl siRNA轉(zhuǎn)染+Gas6刺激組，以此為基礎(chǔ)再分別設(shè)置DDP或MTX處理組。細(xì)胞接種后孵育過夜，無血清培養(yǎng)4 h轉(zhuǎn)染Axl siRNA。轉(zhuǎn)染6 h后繼續(xù)無血清培養(yǎng)，然后分別在Gas6刺激組和Axl siRNA轉(zhuǎn)染+Gas6刺激組加入濃度為200 ng/mL Gas6培養(yǎng)24 h；化療組中DDP的終濃度為20 μg/mL，MTX的終濃度為300 μg/mL，孵育24 h。最終用MTT法檢測不同實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的凋亡率。

1.6 Annexin V-FIFC雙染檢測細(xì)胞凋亡率 取對數(shù)生長期細(xì)胞株MG63，以每孔2×105個接種于6孔板中。實(shí)驗(yàn)分組設(shè)置與MTT實(shí)驗(yàn)相同。分別用Axl siRNA、Gas6或DDP、MTX處理后，按Annexin V-FITC試劑盒說明書，加入100 μL混合液進(jìn)行染色，室溫放置15 min后轉(zhuǎn)入流式硬管中，每管再加入200 μL Buffer，用流式細(xì)胞儀以488 nm為激發(fā)波長檢測分析各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的凋亡率；各實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。1.7 細(xì)胞周期檢測 取對數(shù)生長期細(xì)胞株MG63、U2OS，應(yīng)用濃度分別為0、100、200、400 ng/mL的Gas6處理48 h。PI染色后，應(yīng)用流式細(xì)胞儀以488 nm為激發(fā)波長分析各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞周期；各實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。1.8 免疫組化及判斷標(biāo)準(zhǔn) 采用免疫組化EnVision兩步法檢測P-Axl、BCL-2、Bax蛋白表達(dá)，選取三位病理醫(yī)師采用盲法閱片。按細(xì)胞陽性百分比判斷：無陽性細(xì)胞為0分，<25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。按細(xì)胞陽性強(qiáng)度判斷：0分為陰性，1分為弱陽性，2分為陽性，3分為強(qiáng)陽性。兩者相乘以P-Axl評分≥2分為高表達(dá)，<2分為低表達(dá)；BCL-2和Bax評分≥2分為陽性，<2分為陰性。

1.9 TUNEL染色檢測骨肉瘤組織中凋亡細(xì)胞 隨機(jī)選取10例Axl高表達(dá)組與10例Axl低表達(dá)組，石蠟切片脫蠟、水化，置入含0.1% TritonX-100的10 mmol/L枸櫞酸鹽(pH 6.0)水浴30 min以透膜，1 μg/mL的蛋白酶K 37 ℃消化10 min。每張切片滴加50 μL TUNEL反應(yīng)混合液，置于37 ℃濕盒避光反應(yīng)1 h，PBS漂洗3次，熒光顯微鏡下計數(shù)凋亡細(xì)胞[激發(fā)波長為450～500 nm，檢測波長為515～565 nm(綠色)]；計算每張切片的平均陽性率。

1.10 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析；采用Pearson相關(guān)性分析P-Axl、BCL-2和Bax蛋白表達(dá)的相關(guān)性；應(yīng)用Cox單因素風(fēng)險回歸分析骨肉瘤患者預(yù)后的危險因素。所有數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Gas6/Axl增強(qiáng)骨肉瘤細(xì)胞對DDP和MTX的抗凋亡作用 Hoechst 33258染色發(fā)現(xiàn)，MG63在DDP或MTX處理后，化療藥所致的細(xì)胞凋亡率分別為42.6%和21.9%；Gas6預(yù)刺激后，相同濃度的DDP或MTX處理的細(xì)胞凋亡率分別降為29.8%和6.4%(P<0.01)。同樣，Gas6預(yù)刺激后DDP和MTX對U2OS的細(xì)胞凋亡率分別由40.0%和28.6%降為22.8%和16.4%(P<0.05)(圖1A)。MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在MG63和143B中，無論是對照組還是DDP或MTX處理組，均顯示轉(zhuǎn)染Axl siRNA導(dǎo)致細(xì)胞增殖率降低；而Gas6刺激后細(xì)胞增殖率明顯增高(P<0.05)；Gas6預(yù)刺激后再轉(zhuǎn)染Axl siRNA，其細(xì)胞增殖率與單獨(dú)轉(zhuǎn)染Axl siRNA者相比亦有增高的趨勢(圖1B、C)。Annexin V-FITC檢測發(fā)現(xiàn)骨肉瘤細(xì)胞株MG63在DDP或MTX分別處理后，其凋亡率由11.16%分別增至16.90%或17.67%；反之，以未處理組細(xì)胞為例，Gas6刺激使細(xì)胞凋亡率由11.16%降為3.46%；轉(zhuǎn)染Axl siRNA使細(xì)胞凋亡率增至30.09%；而Gas6預(yù)刺激后再轉(zhuǎn)染Axl siRNA，可使細(xì)胞凋亡率又降至27.79%。在DDP或MTX處理組也可觀察到類似結(jié)果，即Gas6預(yù)刺激降低細(xì)胞凋亡率，而Axl siRNA協(xié)同升高細(xì)胞凋亡率(圖2)。與細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同的是，不同濃度Gas6(0、100、200、400 ng/mL)的預(yù)刺激并不能使MG63、143B細(xì)胞周期出現(xiàn)顯著性變化。

圖1 A.骨肉瘤細(xì)胞株MG63和U2OS經(jīng)Gas6預(yù)刺激化療藥物DDP和MTX處理后細(xì)胞凋亡情況；B.MTT實(shí)驗(yàn)中143B的細(xì)胞凋亡率；C.MTT實(shí)驗(yàn)中MG63的細(xì)胞凋亡率

2.2 BCL-2、Bax和P-Axl蛋白在骨肉瘤組織中的表達(dá)及其與凋亡率的相關(guān)性 免疫組化結(jié)果顯示BCL-2及Bax蛋白在骨肉瘤細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，P-Axl在瘤細(xì)胞核質(zhì)內(nèi)表達(dá)(圖3)；骨肉瘤組織中BCL-2、Bax及P-Axl蛋白表達(dá)量明顯高于骨纖維結(jié)構(gòu)不良組織。在41例骨肉瘤組織中，BCL-2陽性者29例(70.7%)，Bax陽性者15例(36.6%)，P-Axl高表達(dá)者35例(85.4%)；在18例骨纖維結(jié)構(gòu)不良組織中，BCL-2、Bax陽性者和P-Axl高表達(dá)者分別為4例(22.2%)、2例(11.1%)和2例(11.1%)。因此，骨肉瘤組織中BCL-2、Bax和P-Axl的表達(dá)顯著高于骨纖維結(jié)構(gòu)不良組織(P<0.05，表1)。Pearson相關(guān)性分析顯示：BCL-2與P-Axl蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.842，P<0.000 1)，Bax與P-Axl、BCL-2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。TUNEL實(shí)驗(yàn)證明骨肉瘤組織中P-Axl高表達(dá)者細(xì)胞凋亡率僅為1%；P-Axl低表達(dá)者細(xì)胞凋亡率為7%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，圖4)。

2.3 BCL-2和Bax蛋白表達(dá)與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系 BCL-2和Bax蛋白表達(dá)與患者的預(yù)后明顯相關(guān)(P<0.05，表2)；Cox單因素風(fēng)險回歸分析發(fā)現(xiàn)BCL-2和Bax表達(dá)是影響患者預(yù)后的因素(P<0.05，表3)。

3 討論

本課題組前期實(shí)驗(yàn)表明，Axl及其配體Gas6的活化可以促進(jìn)骨肉瘤的發(fā)展，提示其預(yù)后差。由于P-Axl可抑制骨肉瘤細(xì)胞的凋亡[13]，因此Gas6/Axl信號與凋亡相關(guān)蛋白的相關(guān)性值得深入分析。本組應(yīng)用骨肉瘤細(xì)胞系為基礎(chǔ)，建立Axl siRNA抑制及Gas6刺激活化細(xì)胞模型，應(yīng)用MTT、Annexin V-FIFC等方法，證明骨肉瘤細(xì)胞中Gas6與Axl結(jié)合并促其磷酸化后抑制化療藥物對骨肉瘤細(xì)胞的致凋亡作用。TUNEL實(shí)驗(yàn)亦表明骨肉瘤組織中P-Axl高表達(dá)者細(xì)胞的凋亡率降低，證明Gas6/Axl在骨肉瘤組織中也發(fā)揮抗凋亡作用。此外，免疫組化結(jié)果表明P-Axl、BCL-2和Bax蛋白在骨肉瘤組織中表達(dá)均高于骨纖維不良組織，Pearson相關(guān)性分析顯示BCL-2與P-Axl蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)，而Cox單因素風(fēng)險回歸表明BCL-2或Bax蛋白表達(dá)是患者預(yù)后的獨(dú)立因素，提示P-Axl可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡蛋白BCL-2抑制骨肉瘤細(xì)胞的凋亡，從而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。由于本組例數(shù)較少，Bax與P-Axl和BCL-2的表達(dá)不具有統(tǒng)計學(xué)意義，但其負(fù)相關(guān)趨勢提示三者之間可能存在調(diào)節(jié)或平衡關(guān)系。

表1 BCL-2、Bax和P-Axl蛋白在骨肉瘤和骨纖維結(jié)構(gòu)不良組織中的表達(dá)差異

圖2 流式細(xì)胞術(shù)檢測MG63細(xì)胞不同處理組的凋亡細(xì)胞數(shù)量

隨著新輔助化療在臨床上的廣泛使用，骨肉瘤患者的5年生存率有所提高。近年化療耐藥性已嚴(yán)重影響化療藥物的敏感性和有效性。有文獻(xiàn)報道[14]Axl高表達(dá)可降低乳腺癌細(xì)胞對伊馬替尼的敏感性，使用Axl抑制劑能使乳腺癌細(xì)胞恢復(fù)對伊馬替尼的敏感。另外，阻斷Axl受體可促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)化療藥物作用[15]。Sinha等[16]報道阻斷Axl受體能促進(jìn)慢性B淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞的凋亡，并具有與酪氨酸激酶抑制劑的協(xié)同作用，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。AKT通路下游有2條凋亡通路，外通路靶向結(jié)合凋亡受體，內(nèi)通路由細(xì)胞線粒體異常引起。在外通路中，細(xì)胞的凋亡取決于BCL-2家族因子的平衡[17]； AKT/GSK3β/Cyclin D1/Cdk4通路是另一種以抑制細(xì)胞周期而致細(xì)胞凋亡的信號通路[18]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Gas6可以不通過影響細(xì)胞周期而使骨肉瘤細(xì)胞系抗凋亡，表明Gas6可能通過AKT-BCL-2信號通路抑制細(xì)胞凋亡，而并非通過AKT-Cyclin D1通路實(shí)現(xiàn)作用。Hong等[19]報道耐藥的急性髓系白血病細(xì)胞中Axl表達(dá)上調(diào)，Gas6/Axl活化可能通過促進(jìn)BCL-2表達(dá)進(jìn)一步產(chǎn)生耐藥性，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

表2 BCL-2 、Bax蛋白表達(dá)與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系

③A③B③C④A④B圖3 A．骨肉瘤中BCL?2蛋白的表達(dá)，EnVi?sion兩步法；B．骨肉瘤中Bax蛋白的表達(dá)，EnVision兩步法；C．骨肉瘤中P?Axl蛋白的表達(dá)，EnVision兩步法 圖4 TUNEL法檢測骨肉瘤組織中P?Axl表達(dá)狀況與細(xì)胞凋亡率的關(guān)系：A．骨肉瘤中P?Axl低表達(dá)；B．骨肉瘤中P?Axl高表達(dá)

表3 Cox單因素回歸分析預(yù)后相關(guān)因素

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示骨肉瘤中Gas6/Axl活化后通過調(diào)節(jié)凋亡蛋白BCL-2，促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞抵抗由DDP或者M(jìn)TX誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。因此，未來抑制Axl表達(dá)或活化可能成為增加化療藥療效、抑制腫瘤進(jìn)展的治療手段之一。

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Relationship between receptor tyrosine kinase Axl andapoptosis relative proteins in osteosarcoma

JIANG Nian1, WANG Xue-di1, TIAN Rui1, XIE Xian-biao2, LAI Ying-rong1, PENG Ting-sheng1

(1DepartmentofPathology,2DepartmentofMusculoskeletalOncology,theFirstAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China)

Purpose To identify the role of tyrosine kinase receptor Axl for anti-apoptosis which was induced by cisplatin (DDP) and methotrexate (MTX) chemotherapy and to analyze the relationship between P-Axl and apoptosis-related proteins in osteosarcoma. Methods Osteosarcoma cell lines MG63, 143B and U2OS were used in apoptosis assays, Axl siRNA transfection, cytotoxicity assays, cell cycle analysis, etc. A total of 41 cases of osteosarcom patients were included for immunohistochemistry of EnVision two-step staining and clinico-pathological relative analysis. TUNEL assay was performed in ten cases for apoptosis detection. Results Among the osteosarcoma cell lines, Gas6/Axl could obviously protect tumor cells from apoptosis induced by DDP and MTX (P<0.05). Axl siRNA transfection enhanced cell apoptosis, whereas Gas6 prone to function upon previous knockdown by Axl siRNA. Among the 41 cases, the positive rate of P-Axl, BCL-2, and Bax was 85.4%, 70.7%, and 36.6%, respectively. In contrast, the positive rate of them was 22.2%, 11.1%, and 11.1% in osteofibrous dysplasia, respectively. The expression levels of these apoptosis-related factors were significantly higher in osteosarcoma than in osteofibrous dysplasia (P<0.05). Through clinico-pathological analysis, there were significant relationships between the survival status and BCL-2 or Bax expression (P<0.05). Pearson correlation analysis demonstrated that BCL-2 was positively correlated to P-Axl with statistical significance (r=0.842,P<0.000 1). By Cox univariate analysis, BCL-2 or Bax was correlated with the patients’ prognosis. TUNEL assay also demonstrated that P-Axl high expression inhibited apoptosis in osteosarcoma tissues. Conclusion Gas6/Axl protects osteosarcoma cells from the apoptosis induced by DDP and MTX chemotherapy and inhibits apoptosis in osteosarcoma tissue, possibly through the regulation of apoptosis-related protein BCL-2.

osteosarcoma； Axl； BCL-2； apoptosis； prognosis

國家自然科學(xué)基金(81302348)

中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院1病理科、2骨腫瘤科，廣州 510080

蔣 念，女，碩士研究生。E-mail: candicejang@163.com 彭挺生，女，博士，主任醫(yī)師，副教授，通訊作者。E-mail：pengtsh@mail.sysu.edu.cn

時間：2017-5-17 23:52 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170517.2352.005.html

R 738.3

A

1001-7399(2017)05-0490-07

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.05.005

接受日期：2017-04-18