魯毅，李燕思，王亞威，段靖，許桂麗

HPLC法測(cè)定復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶中橙黃決明素的含量

魯毅，李燕思，王亞威，段靖，許桂麗

目的建立測(cè)定復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶中橙黃決明素含量的HPLC方法。方法色譜柱為：InertSustain C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）為流動(dòng)相，流速為1.0 ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm。結(jié)果

復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶為筆者所在醫(yī)院自制制劑，由決明子、絞股藍(lán)等中藥材組成，清熱平肝，化瘀去濕；用于高血脂、輕度高血壓的輔助治療。方中決明子味甘、苦、咸，微寒，歸肝、大腸經(jīng)。具有清肝明目，潤(rùn)腸通便的作用。現(xiàn)代研究證明決明子具有降血壓、降血脂、保肝及抑菌等活性［1］。

決明子有效成分主要為蒽醌類物質(zhì)，其中橙黃決明素具有較好的降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化作用［2，3］。筆者采用HPLC法測(cè)定復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶中橙黃決明素的含量，為全面有效控制該制劑質(zhì)量提供參考和依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器SPD10A高效液相色譜儀（島津公司）、FA-2004N電子天平（上海精科）、CPA225D電子天平（賽多利斯）。

1.2 試藥橙黃決明素對(duì)照品（批號(hào)：111900-201001），購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品研究所；復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶（每袋3.0 g，解放軍第454醫(yī)院）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果［4-7］

2.1 色譜條件色譜柱為：InertSustain C18（4.6 mm× 250mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60），流速為1.0 ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm。理論塔板數(shù)按橙黃決明素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備取橙黃決明素對(duì)照品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液制成每1 ml約含橙黃決明素20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備精密稱定本品內(nèi)容物約1.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 ml，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 ml，蒸干，加稀鹽酸30 ml，置水浴中加熱水解1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，30 ml/次，合并三氯甲烷，回收溶劑至干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至25 ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn)按以上色譜條件分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液各20 μl，進(jìn)樣，對(duì)照品、供試品色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察精密吸取已配制好的對(duì)照品溶液2、6、20、14、18 μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)Y，以對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y= 8×106X+67226，r=0.9998；結(jié)果表明橙黃決明素在0.042～0.378 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，對(duì)照品溶液峰面積的RSD為1.06%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、8、16、24、48 h進(jìn)樣20 μl，按上述條件測(cè)定峰面積，以考察其穩(wěn)定性，RSD為1.84%，表明供試品溶液至少在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一供試品，按2.2.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，依次測(cè)定，計(jì)算得橙黃決明素含量，RSD為1.77%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的批號(hào)為20150721的復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶樣品約1.5 g，加入橙黃決明素約0.16 mg，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下方法檢測(cè)。其結(jié)果見表1。結(jié)果表明準(zhǔn)確度良好。

圖1 復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶HPLC

表1 復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2.9 供試品含量測(cè)定按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備10批供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算得橙黃決明素含量分別為0.1063、0.1087、0.1077、0.1046、0.1092、0.1053，0.1079、0.1059、0.1061、0.1073 mg/g，最低0.1046 mg/g，以最低測(cè)定值的80%為限，故擬復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶中含決明子以橙黃決明素計(jì)，不得低于83.7 μg/g。

3 討論

前期實(shí)驗(yàn)中，在定量物質(zhì)的選擇方面，課題組曾以絞股藍(lán)中皂苷類成分絞股藍(lán)皂苷Ⅲ為定量指標(biāo)，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，其分離效果不佳，后轉(zhuǎn)為測(cè)定制劑中橙黃決明素的含量。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，絞股藍(lán)中約含皂苷130多種，成分比較復(fù)雜［8，9］。接下來(lái)擬研究以絞股藍(lán)中黃酮類成分槲皮素、異鼠李素為定量成分，以期實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶質(zhì)量的全面控制。

供試品提取方法的選擇方面，以甲醇為提取溶劑，提取方法采用加熱回流提取1.5、2、2.5 h。測(cè)定方法相同，超聲提取2、2.5 h時(shí)，提取較完全，因此選用甲醇作為提取溶劑、加熱回流2 h。

流動(dòng)相的選擇方面，參考相關(guān)文獻(xiàn)，適當(dāng)提高磷酸比例，選用乙腈-0.1%磷酸（40∶60）、流速1 ml/ min作為流動(dòng)相，橙黃決明素與其他成分能完全分離，達(dá)到較佳的效果［10-12］。

該實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶中橙黃決明素的含量，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定可靠，且重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶的含量測(cè)定和質(zhì)量控制。

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［2016－11－21收稿，2016－12－18修回］［本文編輯：劉一洋］

Determination of aurantio-obtusin content of Compound Jiaogulan Daipaocha by HPLC

LU Yi，LI Yan-si，WANG Ya-wei，et al.Department of Pharmacy，the No.454 Hospital of PLA，Nanjing，Jiangsu 210002，China

ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of aurantio-obtusin in Compound Jiaogulan Daipaocha.MethodsThe operating conditions by HPLC were Inert Sustain C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），the mixture of acetonitrile-0.1%Phosphoric acid water（40∶60）as mobile phase，1.0 ml/min as flow speed and wavelength 284 nm.ResultsAurantio-obtusin can be well separated from other components.Aurantio-obtusin showed a good linear relationship within the range of 0.042-0.378 μg（r=0.9998，n=5）with an average recovery of 98.71%（RSD=1.02%）.ConclusionThe method is accurate and sensitive，which may be used for the quality control of compound Jiaogulan Daipaocha.

Compound Jiaogulan Daipaocha；HPLC；Aurantio-obtusin；Levels（content）

R917

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.06.026

210002江蘇南京，解放軍454醫(yī)院藥劑科（魯毅，李燕思，王亞威，段靖，許桂麗）

橙黃決明素與其他組分能較好分離，其在0.042～0.378 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9998，n=5），平均回收率為98.71%，RSD為1.02%。結(jié)論該方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏，可用于復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶的質(zhì)量控制。［關(guān)鍵詞］復(fù)方絞股藍(lán)袋泡茶；高效液相色譜法；橙黃決明素；含量