俞 濤 聶文軍

(南京市浦口區(qū)畜牧獸醫(yī)站,江蘇南京 211800)

不同口蹄疫疫苗免疫效果及檢測(cè)方法評(píng)估

俞 濤 聶文軍

(南京市浦口區(qū)畜牧獸醫(yī)站,江蘇南京 211800)

為更好地了解豬口蹄疫O型合成肽疫苗與豬口蹄疫O型滅活疫苗的免疫效果與合理的檢測(cè)方法，浦口區(qū)獸醫(yī)站在某豬場(chǎng)進(jìn)行了此次試驗(yàn)。試驗(yàn)豬分3組，分別注射不同廠家生產(chǎn)的豬口蹄疫O型合成肽疫苗、和豬口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）滅活疫苗，并采用豬O型口蹄疫VPI抗體檢測(cè)試劑盒、口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒和正向間接血凝試驗(yàn)（HI）分別對(duì)使用上述口蹄疫苗免疫效果進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，豬注射口蹄疫O型合成肽疫苗后，用豬O型口蹄疫VPI抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，抗體陽(yáng)性率達(dá)到100%；用正向間接血凝和液相阻斷ELISA方法檢測(cè)不到注射合成肽疫苗后產(chǎn)生的抗體效價(jià)。免疫豬口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）滅活疫苗后，用VPI抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，抗體陽(yáng)性率只有40%；用HI方法進(jìn)行檢測(cè)，抗體陽(yáng)性率為75%：用液相阻斷ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，抗體陽(yáng)性率為70%。

豬O型口蹄疫 合成肽疫苗 滅活疫苗 免疫效果 抗體檢測(cè)

豬口蹄疫O型滅活疫苗在臨床使用過(guò)程中對(duì)豬只應(yīng)激較大，常會(huì)出現(xiàn)豬只應(yīng)激死亡的現(xiàn)象，并且對(duì)豬只免疫效果不是很理想，通常情況下只有65%～75%的免疫合格率。豬口蹄疫O型合成肽疫苗是用固相多肽合成技術(shù)在體外人工合成含有口蹄疫病毒主要抗原位點(diǎn)的多肽，并連接人工合成的可激活輔助性T細(xì)胞的短肽，以此作為免疫原，加油佐劑混合乳化制成。有關(guān)研究表明，該疫苗具有較好的免疫原性，副反應(yīng)較小。目前在口蹄疫防疫中使用的豬口蹄疫O型高效滅活疫苗（OZK/93株+OS/99株），是采用細(xì)胞培養(yǎng)病毒，然后滅活，加油佐劑混合乳化而成，在免疫過(guò)程中副反應(yīng)較大。為更好地了解豬口蹄疫O型合成肽疫苗與豬口蹄疫O型滅活疫苗的使用效果以及探究合理的檢測(cè)方法，2011年6～10月在南京某豬場(chǎng)進(jìn)行此次試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇南京某豬場(chǎng)60頭80日齡左右的健康小豬。試驗(yàn)前盡可能避開(kāi)母源抗體的干擾，并檢測(cè)口蹄疫抗體。另在1棟肥育豬舍中取600頭80～90日齡的豬，其中300頭注射豬口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）滅活疫苗，另300頭分別注射上海和蘭州生產(chǎn)的豬口蹄疫O型合成肽疫苗，觀察注射疫苗后1～3d各組豬的應(yīng)激反應(yīng)。

1.2 疫苗

豬口蹄疫O型合成肽疫苗，分別由上海和蘭州某公司生產(chǎn)；豬口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）滅活疫苗，由蘭州某公司生產(chǎn)。

1.3 試劑盒

豬O型口蹄疫VPI抗體檢測(cè)試劑盒，分別由上海、韓國(guó)、荷蘭某公司生產(chǎn)?？谔阋逴型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒由蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。

1.4 試驗(yàn)分組及免疫方案

試驗(yàn)豬分為3組，80日齡首免、120日齡二免。試驗(yàn)1、2組分別注射上海和蘭州某公司生產(chǎn)的豬口蹄疫O型合成肽疫苗，試驗(yàn)3組注射蘭州某公司生產(chǎn)的豬口蹄疫O型（OZK/93株+OS/99株）滅活疫苗。

1.5 血清采集

正式試驗(yàn)前（80日齡）以及第1次注射疫苗后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月，分別頸靜脈采血4ml分離血清，用于抗體檢測(cè)。

1.6 測(cè)定指標(biāo)

用不同方法檢測(cè)抗體，并進(jìn)行應(yīng)激反應(yīng)觀察。

2 結(jié)果與分析

表1 不同ELlSA檢測(cè)口蹄疫抗體陽(yáng)性率（n=20）%

表2 用Hl方法檢測(cè)口蹄疫抗體陽(yáng)性率（n=20）%

表3 用液相陰斷ELlSA方法檢測(cè)口蹄疫抗體陽(yáng)性率（n=20）%

2.1 從表1來(lái)看，3家的試劑盒大體上一致，只有少部分差別。在80日齡免疫前，大部分豬已沒(méi)有口蹄疫抗體，經(jīng)首次免疫1個(gè)月后（110日齡）合成肽疫苗組90%以上能檢測(cè)到免疫抗體，但常規(guī)OZK/93株+OS/99株組用進(jìn)口試劑盒仍未能檢測(cè)到抗體，只有上海生產(chǎn)的試劑盒能檢測(cè)到抗體，但常規(guī)OZK/93株+OS/99株組抗體陽(yáng)性率只有20%～40%。

表4 不同口蹄疫疫苗在注射過(guò)程中出現(xiàn)的應(yīng)激情況

為了進(jìn)一步驗(yàn)證豬口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株滅活疫苗的免疫效果，實(shí)驗(yàn)室同時(shí)采用國(guó)產(chǎn)的間接血凝抑制（HI）試劑和液相陰斷ELISA方法檢測(cè)不同疫苗的免疫效果。從表2可以看出，用HI方法進(jìn)行檢測(cè)口蹄疫O型O型OZK/93株+OS/99株滅活疫苗組在首免后1個(gè)月僅40%產(chǎn)生抗體，在二免后20d、40d只有65%、75%能檢測(cè)到免疫抗體。從表3可以看出，用液相陰斷ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)在首免后1個(gè)月僅35%產(chǎn)生抗體，在二免后20d、40d只有60%、70%能檢測(cè)到免疫抗體。說(shuō)明液相陰斷ELISA方法檢測(cè)地陽(yáng)性率比HI方法要低。合成肽疫苗無(wú)論用HI方法或液相陰斷ELISA方法在首免后1個(gè)月還是二免后20d、40d，均檢測(cè)不到免疫抗體。說(shuō)明用HI方法和液相陰斷ELISA方法檢測(cè)不到合成肽疫苗的免疫抗體的。

2.2 對(duì)比不同疫苗的免疫效果

從表1、表2、表3可以看出，合成肽疫苗的免疫效果較好，在進(jìn)行首免疫后用ELISA法能很快檢測(cè)到免疫抗體，并且抗體陽(yáng)性率在90%以上，第2次免疫后抗體陽(yáng)性率達(dá)100%。但常規(guī)的口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株滅活疫苗，無(wú)論用ELISA法還是HI檢測(cè)法，在進(jìn)行二次免疫后豬血清免疫抗體檢測(cè)值合格率都比較低，最高只有75%。

2.3 免疫注射應(yīng)激反應(yīng)觀察對(duì)比

從表4可以看到，在臨床免疫注射過(guò)程中，豬口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株滅活疫苗產(chǎn)生應(yīng)激明顯高于豬口蹄疫O型合成肽疫苗。

3 結(jié)論

豬口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫抗體須用O型口蹄疫VPI抗體檢測(cè)試劑盒才能檢測(cè)出來(lái)，HI方法檢測(cè)不到。用O型口蹄疫VPI抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)豬口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株滅活疫苗抗體的敏感性比用HI方法和液相陰斷ELISA方法低。所有的檢測(cè)結(jié)果表明，豬口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株滅活疫苗的免疫效果相對(duì)較差，經(jīng)過(guò)二次免疫后抗體陽(yáng)性率最高仍只有75%左右。從臨床使用效果觀察可知，豬口蹄疫O型OZK/93株+OS/99株滅活疫苗明顯比豬口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫應(yīng)激大。