宋 晨 孫利敏

(大連醫(yī)科大學附屬二院腫瘤二科，遼寧 大連 116021)

1 腫瘤科

老年乳腺癌組織雌激素受體、孕激素受體與富集AT序列的特異性結合蛋白1及人表皮生長因子受體-2表達的相關性

宋 晨 孫利敏1

(大連醫(yī)科大學附屬二院腫瘤二科，遼寧 大連 116021)

目的 探討老年乳腺癌組織中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)與富集AT序列的特異性結合蛋白(SATB)1及人表皮生長因子受體(CerbB)2表達的相關性。方法 回顧性分析原發(fā)性乳腺癌患者172例的臨床資料。以距腫瘤組織超過5 cm外的癌旁組織為對照，用免疫組化方法檢測乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達及其與臨床病理特征、ER、PR的關系。結果 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中表達的陽性率顯著高于癌旁組織(P<0.05)。組織學分級Ⅲ級的乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達陽性率最高，其次為Ⅱ級、Ⅰ級，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；臨床分期為Ⅲ期的乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達陽性率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)；有淋巴結轉移的乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達陽性率顯著高于無淋巴結轉移者(P<0.05)。SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達與ER、PR表達呈顯著負相關(rER=-0.387，-0.372，rPR=-0.296，-0.329，均P<0.05)。結論 SATB1、CerbB2在老年乳腺癌組織中呈高表達，且與ER及PR表達呈顯著負相關。

乳腺癌；雌激素受體；孕激素受體；人表皮生長因子受體-2；富集AT序列的特異性結合蛋白1

乳腺癌的發(fā)生與遺傳密切相關，發(fā)生發(fā)展與腫瘤細胞凋亡、侵襲、轉移等密切相關，其發(fā)病機制涉及諸多基因的異常表達。富集AT序列的特異性結合蛋白(SATB)1是一種組織特異性表達的核基質(zhì)結合區(qū)結合蛋白，參與T細胞的發(fā)育及成熟。近年來研究顯示SATB1可能為基因組的組織者，參與了核基質(zhì)結合區(qū)的特異性結合，參與腫瘤細胞凋亡、增殖、侵襲以及轉移過程，提示其有可能成為乳腺癌早期診斷的指標之一〔1～3〕。乳腺癌細胞生長受多種因子調(diào)控，包括雌激素、孕激素等。乳腺癌被認為是雌激素依賴性腫瘤，而抗雌激素治療的療效取決于雌激素受體(ER)的表達情況。目前ER與孕激素受體(PR)水平是臨床上評估患者預后，選擇治療方法的重要指標〔4〕。人表皮生長因子受體(CerbB)2參與腫瘤的發(fā)生過程，與腫瘤組織學分級有密切的關系，惡性程度越高其表達水平也越高〔5，6〕。本研究擬分析老年乳腺癌組織中ER、PR與CerbB2及SATB1水平的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2010年1月至2015年12月在大連醫(yī)科大學附屬二院診斷治療的原發(fā)性乳腺癌患者172例的臨床資料。納入標準：年齡≥65歲，均為女性，以無痛性腫塊、乳頭溢液、腋窩腫塊、皮膚潰爛等為初發(fā)癥狀就診，均經(jīng)我院病理科病理切片確診；排除臨床資料不完整者。所有乳腺癌標本經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，4 μm切片，蘇木素-伊紅(HE)染色及免疫組化染色。172例乳腺癌組織中，浸潤型導管癌125例，浸潤性小葉癌47例。組織學分級：Ⅰ級61例，Ⅱ級62例，Ⅲ級49例。172例患者中有109例發(fā)生淋巴結轉移。TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期115例，Ⅲ期57例。以距腫瘤組織超過5 cm外的癌旁組織為對照。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器及試劑 海爾冰箱，歐林巴斯光學顯微鏡，石蠟包埋機，石蠟切片機，自動脫水機，電熱恒溫干燥箱。鼠抗人ER、PR單克隆抗體，兔抗人SATB1多克隆抗體，鼠抗人CerbB2單克隆抗體。SP免疫組化試劑盒，磷酸鹽緩沖液(PBS)。

1.2.2 免疫組化染色 用已知陽性對照為陽性對照，PBS代替一抗為陰性對照。石蠟標本連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度酒精分化，PBS沖洗。加H2O2阻斷液50 μl阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，室溫下孵育10 min，PBS浸泡。SATB1、ER、PR、CerbB2采用檸檬酸修復液熱修復：5%山羊血清封閉，室溫下孵育10 min，去血清。滴加一抗工作液50 μl，4℃過夜。恢復至室溫，PBS沖洗每次5 min。加生物素標記二抗50 μl，37℃孵育20 min，PBS沖洗3次，每次5 min。加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑100 μl顯色5 min，PBS阻斷，自來水沖洗，蘇木素復染，梯度酒精脫水干燥，透明處理，樹脂封片，之后在顯微鏡下觀察。

1.3 判讀結果 每張片隨機選擇10個有代表性視野計數(shù)，取平均值。SATB1陽性：標記在細胞核，出現(xiàn)棕黃色顆粒。細胞陽性百分率判定：無陽性細胞為陰性，陽性細胞≤50%或強陽性細胞≤5%為“+”，陽性細胞>50%或強染色細胞>5%為“”。ER、PR陽性物質(zhì)位于細胞核，陽性細胞<10%為陰性，10%～25%為“+”，26%～50%為“”，>50%為“”。CerbB2陽性物質(zhì)定位于細胞膜，陽性細胞<10%為“-”，10%～25%為“+”，26%～50%為“”，>50%為“”。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗或F檢驗及Spearman相關分析。

2 結 果

2.1 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中表達的陽性率(SATB1：-55例，+62例，55例；CerbB2:-35例，+62例，41例，34例)顯著高于癌旁組織(SATB1：-172例；CerB2：-163例，+9例)(χ2=177.30、197.31,P<0.000 1)。

2.2 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中表達與臨床病理特征關系 組織學分級為Ⅲ級的乳腺癌組織SATB1、CerbB2表達陽性率最高，其次為Ⅱ級、Ⅰ級，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；臨床分期為Ⅲ期的的乳腺癌組織SATB1、CerbB2表達陽性率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)；有淋巴結轉移的乳腺癌組織中SATB1、CerbB2表達陽性率顯著高于無淋巴結轉移者(P<0.05)。見表1。

2.3 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達與ER、PR表達的相關性 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達與ER、PR的表達呈顯著負相關(P<0.05)。見表2。

表1 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達與臨床病理特征的關系(n)

表2 SATB1、CerbB2在乳腺癌組織中的表達與ER、PR表達的相關性(n)

3 討 論

在致癌因素的刺激下，乳腺上皮細胞癌基因激活，抑癌基因失活，正常細胞的增殖周期被干擾，細胞凋亡與增殖失衡，發(fā)生非典型增生，進而發(fā)展為腫瘤。腫瘤組織結構紊亂，細胞間鏈接松散，腫瘤細胞容易發(fā)生侵襲及轉移并隨著淋巴系統(tǒng)及血液系統(tǒng)播散，導致遠處轉移，而這個過程涉及多種基因。SATB1是阻止特異性表達的核基質(zhì)結合區(qū)結合蛋白，位于3號染色體上，由763個氨基酸組成，可形成二聚體，與核基質(zhì)結合區(qū)序列具有非常高的親和力。核基質(zhì)結合區(qū)又稱為核骨架結合區(qū)，是核基質(zhì)上結合的特定DNA序列。SATB1識別核基質(zhì)結合區(qū)A-T豐富序列結合于DNA雙螺旋小溝〔7〕。不同的核基質(zhì)結合區(qū)均具有富含A-T序列，含高度堿基解配對傾向區(qū)域，該區(qū)域內(nèi)有A-T豐富序列，混合A、T、C并以G結尾，稱為ATC序列，其內(nèi)含核心解旋原件。SATB1有一個核基質(zhì)結合區(qū)結合結構域與一個同源結構域，識別核基質(zhì)結合區(qū)，啟動異源報告基因轉錄，參與基因轉錄與表達調(diào)控。SATB1在正常組織中一般不表達，在大多的腫瘤細胞中有異常表達。有學者研究認為SATB1是乳腺癌細胞發(fā)生轉移所必需的，其在非轉移性乳腺癌細胞中表達異常，能夠誘導細胞活動性侵襲〔8〕。體外研究顯示，敲除乳腺癌細胞中的SATB1基因后腫瘤細胞顯示正常的腺泡結構，恢復上皮細胞正常極性，腫瘤侵襲表型被逆轉〔9，10〕。非侵襲性乳腺癌細胞中SATB1的高表達可導致細胞出現(xiàn)類似高度侵襲性乳腺癌基因表達譜，乳腺癌細胞增殖加強并發(fā)生轉移〔11〕。SATB1被稱為“基因組組織者”，是其他基因異常表達的總“開關”，可影響1 000多種基因的表達，改變基因譜包括許多與腫瘤生長轉移有關的基因〔12〕。有學者測定預后不良乳腺癌中，有63中預后不良基因與SATB1表達異常有關，SATB1的異常表達導致乳腺細胞基因表達模式改變。SATB1可上調(diào)多種基因的表達，包括轉移相關基因，例如鈣結合蛋白、血管內(nèi)皮生長因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等〔1〕。SATB1還能夠上調(diào)與上皮生長因子信號轉到有關的基因，還能抑制抑癌基因的表達。SATB1表達下調(diào)浸潤性乳腺癌細胞結構基因，喪失正常細胞結構。

乳腺癌細胞的生長受多種因子的調(diào)控，包括雌激素、孕激素、雄激素等。乳腺癌被認為是雌激素依賴性腫瘤。乳腺組織是雌激素的靶組織，體內(nèi)雌激素水平過高，雌激素、孕激素平衡失調(diào)，都會誘發(fā)乳腺癌。乳腺上皮是表達ERα但少量表達ERβ〔13〕，ERα能夠激活乳腺上皮，使其受雌激素刺激，ERα表達增加的同時ERβ表達下降。乳腺癌中，ER及PR陽性表達丟失的腫瘤分化程度更低，具有更強的生物活性及侵襲性。實踐證明，ER、PR是乳腺癌內(nèi)分泌治療的決定性指標，并且影響乳腺癌的預后。ER、PR陽性的乳腺癌內(nèi)分泌治療效果更好，并且預后也更好〔14〕。本研究說明SATB1高表達的患者預后較差。

CerbB2癌基因又稱為Her-2或者neu，其編碼的跨膜蛋白質(zhì)具有內(nèi)酪氨酸激酶樣活性，參與正常乳腺細胞的生長及發(fā)育的調(diào)節(jié)過程，其可促進細胞分裂，蛋白水解酶分泌，增強細胞運動能力〔15，16〕。病理情況下，CerbB2受體表達增加，促進腫瘤細胞的侵襲及轉移〔17〕。CerbB2高表達提示細胞增殖旺盛，侵襲力強，癌基因激活，癌變細胞內(nèi)癌基因數(shù)量性質(zhì)改變，受體結構缺陷，抑制乳腺癌激素依賴的生長特性〔18〕。CerbB2在胚胎發(fā)育形成及分化中發(fā)揮一定的作用，在上皮細胞中有廣泛表達。CerbB2能抑制凋亡，促進腫瘤的發(fā)生。CerbB2還能夠顯著上調(diào)VEGF/VDF，刺激腫瘤新生血管的生成，促進癌癥的發(fā)生及發(fā)展〔19〕。CerbB2能夠下調(diào)整合蛋白的表達，增加腫瘤細胞侵襲力，破壞機體正常反侵襲屏障，促進腫瘤轉移。病理情況下，酪氨酸激酶蛋白活化增強，促進細胞增殖，促進腫瘤生長及發(fā)展。本研究說明CerbB2參與乳腺癌的發(fā)生，而臨床分期越晚表達水平越高，組織學分級越高表達水平越高，有淋巴結轉移者表達水平高，這提示CerbB2參與了乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展過程。本研究結果也提示CerbB2高表達的乳腺癌患者預后相對較差，并且內(nèi)分泌治療效果欠佳。

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〔2017-02-03修回〕

(編輯 郭 菁/滕欣航)

孫利敏(1972-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事乳腺癌及老年腫瘤學研究。

宋 晨(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事乳腺癌方向研究。

R73

A

1005-9202(2017)10-2479-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.059