徐 鋮 羅華榮 甘梅富

(臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心(集團(tuán))恩澤醫(yī)院病理科，浙江 臺(tái)州 318000)

老年胃癌組織MMP-9、p53、VEGF蛋白的表達(dá)及其臨床意義

徐 鋮 羅華榮 甘梅富

(臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心(集團(tuán))恩澤醫(yī)院病理科，浙江 臺(tái)州 318000)

目的 探討老年胃癌組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9、p53及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)蛋白表達(dá)及其臨床意義。方法 選擇胃癌根治術(shù)后存檔病例標(biāo)本78例(觀察組)，取癌旁正常組織為對(duì)照組。采用免疫組化法檢測(cè)MMP-9、p53、VEGF蛋白表達(dá)情況。比較兩組MMP-9、p53、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率，胃癌組織MMP-9、p53、VEGF表達(dá)與胃癌臨床病理學(xué)關(guān)系，MMP-9與p53、MMP-9與VEGF、p53與VEGF在胃癌組織中表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果 觀察組MMP-9、p53、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組(P<0.05)；MMP-9、p53、VEGF表達(dá)與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)(P<0.05)；而與無(wú)性別明顯相關(guān)性(P>0.05)；MMP-9與p53、MMP-9與VEGF、p53與VEGF在胃癌中表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論 老年胃癌組織中MMP-9、p53、VEGF蛋白呈高表達(dá)，且MMP-9、p53、VEGF蛋白高表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

胃癌；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；p53；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

胃癌是最常見(jiàn)的一種消化道惡性腫瘤〔1，2〕。目前雖然胃癌的具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但報(bào)道顯示胃癌發(fā)生、發(fā)展與腫瘤細(xì)胞凋亡失衡相關(guān)〔3〕。因此探討胃癌發(fā)生、發(fā)展中細(xì)胞凋亡的作用，成為胃癌臨床研究與基礎(chǔ)的熱點(diǎn)和重點(diǎn)之一。有關(guān)胃癌細(xì)胞凋亡蛋白調(diào)控機(jī)制近年來(lái)取得了一定的進(jìn)展。研究顯示多種蛋白參與胃癌細(xì)胞的凋亡過(guò)程，發(fā)現(xiàn)其發(fā)生、發(fā)展與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9、p53的突變及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)密切相關(guān)〔4～6〕。本文探討老年胃癌組織MMP-9、p53、VEGF蛋白的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇胃癌根治術(shù)存檔病例標(biāo)本78例(觀察組)，取癌旁正常組織為對(duì)照組。入組標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前均未接受過(guò)放療、化療及免疫治療者；②年齡70～90歲；③簽訂知情同意思者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②合并肝腎功能嚴(yán)重異常者。入組的78例患者中，男45例，女33例；平均年齡(79.84±3.24)歲；分化程度：中高分化34例，低分化44例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者49例。

1.2 主要試劑和儀器 主要試劑：鼠抗人MMP-9、鼠抗人P53、鼠抗人VEGF單克隆抗體(上海萬(wàn)疆生物技術(shù)有限公司)，免疫組化SP試劑盒(福州邁新生物公司)，DAB顯色試劑盒(北京中杉生物公司)。主要儀器：RM2015 病理切片機(jī)(德國(guó)Leica公司)，彩色病理圖像分析系統(tǒng)(日本OLYMPUS公司)，EGI150C組織包埋機(jī)(德國(guó)Leica公司)。

1.3 免疫組化法檢測(cè)MMP-9、p53、VEGF蛋白表達(dá) 所有手術(shù)切除標(biāo)本，以4%甲醛固定，常規(guī)石蠟切片，石蠟包埋，以梯度乙醇水化處理，PBS洗滌3次，于高溫高壓條件下修復(fù)3 min，再以3%過(guò)氧化氫溶液孵育10 min，PBS洗滌3次，滴加MMP-9、p53、VEGF一抗，室溫下孵育120 min，滴加二抗，室溫下孵育60 min，采用DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 由2位病理科醫(yī)師獨(dú)立觀察每張切片，以顯微鏡200倍下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞核出現(xiàn)黃色或者棕黃色，以染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞率半定量積分評(píng)估。染色強(qiáng)度評(píng)定：無(wú)色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；陽(yáng)性細(xì)胞率：0～10%計(jì)0分，11%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，76%～100%計(jì)4分。染色強(qiáng)度積分+陽(yáng)性細(xì)胞率積分：6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性()，4～5分為中度陽(yáng)性()，2～3分為弱陽(yáng)性(+)，0～1分為陰性(-)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t及χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組胃黏膜組織MMP-9、p53、VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)比較 觀察組MMP-9〔57例(73.08%)〕、p53〔51例(65.38%)〕、VEGF〔50例(64.10%)〕陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組〔21例(26.92%)、23例(29.49%)、18例(23.08%)，χ2=33.230 8,χ2=20.155 6,χ2=26.695 2,均P<0.05〕。

2.2 觀察組MMP-9、p53及VEGF陽(yáng)性表達(dá)與其臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 MMP-9陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)(P<0.05)；而與性別無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。p53表達(dá)與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)性(P<0.05)；而與性別無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。VEGF表達(dá)與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)(P<0.05)；而與性別無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.3 觀察組MMP-9、p53及VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)性 MMP-9與p53在胃癌組織陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.451，P<0.05)。MMP-9與VEGF在胃癌組織陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.315，P<0.05)。p53與VEGF在胃癌組織陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.379，P<0.05)。

表1 胃癌組織MMP-9、p53及VEGF陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性(n,n=78)

3 討 論

胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移和侵襲是多基因、多因素、多階段共同參與的一個(gè)復(fù)雜過(guò)程，涉及多種抑癌基因的失活和癌基因的激活〔7～9〕。MMPs是與侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系相關(guān)的一類蛋白水解酶，且為腫瘤細(xì)胞穿透基底膜所必需的一種降解酶，能夠降解細(xì)胞基底膜和外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤血管生成〔10〕。MMPs在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移中作用較為復(fù)雜，在以下幾個(gè)環(huán)節(jié)中發(fā)揮作用：①腫瘤血管生成：在細(xì)胞外基質(zhì)降解時(shí)，MMPs為生長(zhǎng)新生血管提供空間；②腫瘤的發(fā)生過(guò)程：MMPs可分解健康組織的基質(zhì)結(jié)構(gòu)，從而使腫瘤增生；③腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程：MMPs可松解周圍正常組織，有利于癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，且可組織自我分解促使MMPs釋放，引起腫瘤增生。其中MMP-9是MMPs家族中降解細(xì)胞外基質(zhì)的關(guān)鍵酶之一，又為Ⅳ型膠原酶。MMP-9能夠上調(diào)腫瘤血管化的程度，抑制MMP-9活性可抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移〔11〕。p53蛋白是胃癌中最常突變的一種抑癌蛋白，人類p53蛋白由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，正常的p53蛋白在細(xì)胞中易水解，且含量低，而采用免疫組化法很難檢測(cè)到正常p53蛋白，由于突變型p53構(gòu)象改變，穩(wěn)定性增強(qiáng)，故而目前免疫組化法檢測(cè)到的通常為突變型p53蛋白〔12〕。p53基因突變率有萎縮性胃炎病史的胃癌明顯高于無(wú)萎縮性胃炎病史者〔13〕。VEGF是一種血管通透因子，可在體內(nèi)誘導(dǎo)血管新生。VEGF在腫瘤細(xì)胞中功能分為免疫逃逸與信號(hào)通路兩個(gè)方面：①VEGF可干擾抑制樹(shù)突細(xì)胞活性，且能夠阻斷T細(xì)胞和B細(xì)胞的抗原呈遞，以及妨礙機(jī)體正常的監(jiān)察作用，從而致使腫瘤產(chǎn)生免疫逃逸〔14〕；②VEGF激增，與受體結(jié)合，從而產(chǎn)生一系列細(xì)胞信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而使得新血管生長(zhǎng)分化，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。胃癌具有高復(fù)發(fā)、高轉(zhuǎn)移及高侵襲等特點(diǎn)，胃癌中血管生成明顯增加，認(rèn)為其原因可能與腫瘤惡性生物學(xué)行為關(guān)系緊密，故而認(rèn)為，在胃癌生成和轉(zhuǎn)移中VEGF具有重要作用〔15〕。本研究表明老年胃癌組織中MMP-9、p53、VEGF蛋白高表達(dá)與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)，且MMP-9、p53、VEGF表達(dá)呈正相關(guān)。

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〔2016-01-17修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

徐 鋮(1982-)，男，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤病理學(xué)診斷研究。

R735.3

A

1005-9202(2017)10-2470-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.055