宋春宇 王中京 毛 紅 趙 湜

(華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖北 武漢 430014)

丹參川芎嗪注射液對糖尿病腎病大鼠微循環(huán)障礙及腎功能的影響

宋春宇 王中京 毛 紅 趙 湜

(華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖北 武漢 430014)

目的 探討丹參川芎嗪注射液對糖尿病腎病(DN)大鼠腎臟微循環(huán)障礙及腎功能的影響。方法 雄性Wistar大鼠48只，隨機分為正常組、模型組、丹參川芎嗪注射液低劑量組(1 ml·kg-1·d-1)和高劑量組(2 ml·kg-1·d-1)，每組12只。采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)50 mg/kg建立DN大鼠模型，同時各組給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥14 d，末次給藥后檢測空腹血糖(FBG)、腎小球濾過率(GFR)和24 h尿微量白蛋白(24 h mAlb)水平；測定血中血栓素(TX)B2的含量。結(jié)果 丹參川芎嗪注射液在劑量1～2 ml/kg范圍內(nèi)均可明顯抑制DN大鼠的FBG水平；還可降低GFR水平、24 h mAlb及血液TXB2的含量，改善腎血流動力學(xué)異常，改善腎臟微循環(huán)。結(jié)論 丹參川芎嗪注射液可有效改善DN大鼠微循環(huán)障礙，減輕DN腎小球高濾過、高灌注狀態(tài)，保護(hù)腎功能。

丹參川芎嗪注射液；糖尿病腎?。晃⒀h(huán)；腎功能

糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)微血管并發(fā)癥之一，亦是腎病終末期的首要原因〔1〕。該病的發(fā)病機制為DM致腎小球高濾過，引起腎臟持續(xù)的血流動力學(xué)異常及微血管結(jié)構(gòu)損傷，進(jìn)而誘發(fā)蛋白尿及腎小球硬化。因此，微循環(huán)障礙對DN早期發(fā)病起關(guān)鍵作用〔2〕。臨床研究表明，丹參川芎嗪注射液對DN具有顯著的臨床療效，既可降低空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)和尿蛋白的排除率，也可顯著改善機體抗炎指標(biāo)，促進(jìn)腎功能恢復(fù)〔3〕。此外，現(xiàn)代藥理研究表明，丹參川芎嗪注射液具有抗血小板聚集、降低血液黏度、改善微循環(huán)的作用〔4〕，提示其可能對DN的早期微循環(huán)障礙有一定的改善作用。然而，目前關(guān)于丹參川芎嗪注射液對DN早期發(fā)病中微循環(huán)障礙和腎功能的改善作用還未見報道。本實驗從血糖、腎血流動力學(xué)、腎功能等方面對其進(jìn)行系統(tǒng)研究。

1 材料與方法

1.1 動物 無特定病原體(SPF)級雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量180～220 g，平均(200±20)g，購自華中科技大學(xué)實驗動物中心，動物合格證號：SCXK(鄂)2010-0009。自由攝食，動物房室溫20℃～25℃，相對濕度50%～70%，12 h光照維持，晝夜循環(huán)。

1.2 試劑 鏈脲佐菌素(STZ，美國sigma，批號：20151042)，臨用前溶于無菌枸櫞酸緩沖液(0.1 mol/L，pH4.2)配成1%的溶液。生理鹽水(購于江西科倫藥業(yè)有限公司，批號：D120825G)，水合氯醛(購于上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司，批號：2015-041)。丹參川芎嗪注射液，貴州拜特藥業(yè)公司，規(guī)格：5 ml，批號：20140625。

1.3 儀器 電熱恒溫水浴箱(上海一恒科技有限公司，型號：CU600)；代謝籠(蘇州市艾可林實驗動物器材廠)；電子天平(常熟市雙杰測試儀器廠，型號：T1000)；電子分析天平〔梅特勒-托利多儀器(上海) 有限公司，型號：EL204〕；全自動生化分析儀(日立，型號：7180)；全波長酶標(biāo)儀(美國賽默飛，型號：Multiskan GO 1510)；低溫高速離心機(德國HERMLE公司，型號：MEGAFUGE2.0R)；全景激光灌注成像儀(英國Moor儀器有限公司，型號：Moor FLPI-2)；血糖儀及血糖試紙(德國拜耳拜安康系列)。

1.4 實驗方法 Wistar大鼠48只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后隨機分為正常組、模型組、丹參川芎嗪注射液低、高劑量組，每組12只。除正常組外，其余各組均一次性腹腔注射STZ 50 mg/kg誘導(dǎo)實驗性DN大鼠模型〔5〕。由于實驗周期長、大鼠長期高血糖狀態(tài)會導(dǎo)致實驗動物死亡。本研究中，模型組和丹參川芎嗪注射液低劑量組大鼠各死亡2只，丹參川芎嗪注射液高劑量組死亡1只。各組動物數(shù)仍然具有足夠的樣本重復(fù)數(shù)，不影響實驗結(jié)果的統(tǒng)計分析。72 h后大鼠眼眶采血測定FBG，F(xiàn)BG>16.7 mmol/L為造模成功。造模開始即給藥，丹參川芎嗪注射液給藥組按臨床人體-大鼠體表面積比值換算出大鼠的等效劑量。低劑量組每日給予1 ml/kg，高劑量組給予2 ml/kg，給藥時均利用5%葡萄糖注射液稀釋至0.5 ml后尾靜脈注射給藥。正常組及模型組給予等體積生理鹽水。1次/d，連續(xù)3 w，每日記錄24 h飲水量和體重。末次給藥后，用代謝籠收集24 h尿液。隨后腹腔注射水合氯醛(10%，3 ml/kg)麻醉大鼠，完全暴露左右腎臟。Moor FLPI-2散斑血流實時成像系統(tǒng)分析各組大鼠腎臟皮層表面血流值。腹主動脈取血，全自動生化測定儀測定FBG、血清肌酐、尿素氮、腎小球率過濾(GFR)和24 h尿微量白蛋白(24 h mAlb)水平，評價大鼠血糖和腎功能情況。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血栓素(TX)B2的含量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 丹參川芎嗪注射液對大鼠體重及飲水量的影響 與正常組相比，模型組大鼠3 d后飲水量有增加的趨勢，第8天開始飲水量增加明顯；6 d后體重開始不斷出現(xiàn)減輕；與模型組比較，丹參川芎嗪注射液給藥組大鼠飲水量和體重的減少均有所緩解。見圖1。

圖1 各組不同時間飲水量、體重

2.2 丹參川芎嗪注射液對大鼠FBG和24 h mAlb的影響 與正常組比較，模型組FBG和24 h mAlb水平均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，丹參川芎嗪注射液高、低劑量組FBG和高劑量組24 h mAlb水平均有明顯降低(P<0.05)，見表1。

2.3 丹參川芎嗪注射液對大鼠腎臟皮層血流值的影響 正常組大鼠腎臟皮層的散斑血流圖淺綠色和黃色區(qū)域分布較多，紅色區(qū)域較少，表明散斑血流灌注量較低，皮層血流值也較低。與正常組比較，模型組紅色分布區(qū)域明顯增多，腎臟皮層紅色分布均勻，腎臟皮層血流值(399.76±34.65)明顯升高(P<0.05)，與模型組比較，丹參川芎嗪注射液高劑量給藥組紅色區(qū)域分布減少，說明腎臟皮層血流量(334.22±21.44)較模型組少(P<0.05)。低劑量組的腎臟皮層血流值為(356.84±29.31)。

2.4 丹參川芎嗪注射液對大鼠腎功能的影響 相比于正常組，模型組大鼠GFR顯著升高(P<0.01)；血清肌酐和尿素氮含量也有一定程度地升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與模型組相比，經(jīng)丹參川芎嗪注射液高劑量治療后，大鼠GFR明顯降低(P<0.05)；低劑量丹參川芎嗪注射液也能一定程度的降低GFR，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；血清血肌酐、尿素氮含量有一定程度的降低，但變化不明顯(P>0.05)。見表2。

表1 各組大鼠FBG、24 h mAlb水平比較

與正常組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

表2 各組大鼠血清肌酐、尿素氮和GFR的比較±s)

2.5 丹參川芎嗪注射液對大鼠TXB2的影響 給予STZ誘導(dǎo)后，模型組大鼠的TXB2含量〔(287.39±12.98)pg/ml〕明顯高于正常組〔(98.11±5.32)pg/ml〕(P<0.01)。與模型組相比，丹參川芎嗪注射液低、高劑量干預(yù)后大鼠TXB2含量有所降低〔(203.88±11.23)、(167.65±12.90)pg/ml，P<0.05〕。

3 討 論

中醫(yī)學(xué)將DN歸屬于屬于 “尿濁”“腎勞”“關(guān)格”等范疇，亦有學(xué)者將DN命名為“消渴病腎病”。中醫(yī)認(rèn)為，DN病位以腎臟為中心，兼及肝、脾、肺、心等諸多臟腑。以虛、瘀、濁為核心病機，本虛標(biāo)實，虛實互見，因此，需以虛實同治，標(biāo)本兼顧為治則，以補虛、活血通絡(luò)、溫陽瀉濁為基本治法〔6〕。丹參川芎嗪注射液的主要成分為丹參素、鹽酸川芎嗪，具有活血化瘀功效，契合DN淤阻之病機。臨床研究表明，丹參川芎嗪注射液治療早期DN有很好的療效，總有效率可達(dá)73.3%，可降低24 h mAlb含量，促進(jìn)腎功能恢復(fù)；降低DN患者血清的C反應(yīng)蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平，改善抗炎指標(biāo)活性〔3〕。本實驗結(jié)果表明，丹參川芎嗪注射液可顯著降低STZ誘導(dǎo)的血糖水平，對改善微循環(huán)障礙及腎功能具有積極的意義。

在DM過程中，高血糖?？梢鹉I內(nèi)血管阻力下降，腎血漿流量增加，出現(xiàn)腎臟GFR、高內(nèi)壓和血流動力學(xué)的改變〔7〕。這種高灌注、高濾過的狀態(tài)可使腎小球內(nèi)毛細(xì)血管切流壓增加，引起血管內(nèi)皮和上皮細(xì)胞損害，破壞正常濾過屏障，是導(dǎo)致DN發(fā)生及形態(tài)學(xué)改變的基礎(chǔ)。因此，有效減輕DN早期的高灌注、高濾過狀態(tài)，可減少尿微量白蛋白排出，是減輕DM腎損傷的有效方法。本實驗結(jié)果表明，丹參川芎嗪注射液可以明顯降低SZT誘導(dǎo)的DN模型大鼠腎小球高濾過狀態(tài)，減緩高血流灌注對腎臟的損傷，對腎功能有一定的保護(hù)作用，且療效具有劑量依賴性。DM患者體內(nèi)普遍存在高凝狀態(tài)。高凝導(dǎo)致血小板黏附聚集活性增強并形成微血栓，進(jìn)一步促使血小板大量活化，從而出現(xiàn)亞臨床癥狀，即微血管病變〔8〕。DN的發(fā)病過程中，由血流動力學(xué)改變等因素引起的微循環(huán)障礙，?？稍斐赡I小球硬化性改變，出現(xiàn)腎臟不可逆的損害、血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和功能改變，最終出現(xiàn)尿蛋白，導(dǎo)致腎功能損害〔9〕。本實驗研究表明，給予STZ誘導(dǎo)DN后，模型組大鼠腎臟損害早期會表現(xiàn)腎臟皮層微循環(huán)血流動力學(xué)異常；丹參川芎嗪注射液可改變腎臟皮層微循環(huán)血流，劑量在1～2 ml/kg之間療效具有劑量依賴性。血中TXA2含量增加會導(dǎo)致血小板聚集和血管收縮增強，TXB2是TXA2的無活性代謝物，可間接反映TXA2含量。本實驗結(jié)果顯示，DN模型大鼠血小板功能增強，TXA2釋放增多，易引起血管并發(fā)癥；而丹參川芎嗪注射液具有明顯的降低血小板活性作用，符合活血化瘀的藥理作用。

綜上所述，丹參川芎嗪注射液可明顯降低DN大鼠的血糖水平，減少24 h mAlb的排出；有效降低DN大鼠的高濾過狀態(tài)，還可以減少大鼠腎臟皮層血流值和血液中TXB2含量，改善DN大鼠的腎臟微循環(huán)障礙，保護(hù)腎功能，且療效具有劑量依賴性。

1 Balasescu E，Ion DA，Cioplea M，etal.Caspases，cell death and diabetic nephropathy〔J〕.Rom J Intern Med，2015；53(4)：296-303.

2 龐宗然，蘇曉慧，劉祖涵，等.微循環(huán)障礙與糖尿病及其并發(fā)癥關(guān)系〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2011；22(4)：988-9.

3 陶 李，佟 杰，曹 亮，等.丹參川芎嗪注射液治療早期糖尿病腎病33例臨床觀察〔J〕.新中醫(yī)，2015；47(6)：90-1.

4 金 晟.丹參川芎嗪注射液聯(lián)合中藥灌腸對慢性腎臟病的療效及作用機制研究〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志，2013；19(8)：287-9.

5 林鷺平，李 興.鏈脲佐菌素誘導(dǎo)大鼠糖尿病腎病動物模型〔J〕.山西醫(yī)藥雜志，2010；39(1)：27-8.

6 劉玉寧，尕麗婭，馬雷雷.糖尿病腎病的中醫(yī)命名與病因病機〔J〕.中華腎病研究電子雜志，2013；2(4)：201-3.

7 張慶平，胡國華，朱衛(wèi)平，等.丹參川芎嗪注射液對2型糖尿病腎病的臨床療效及CRP，TNF-α水平的影響〔J〕.中國中藥雜志，2009；34(7)：911-2.

8 楊 芳，李敬林，依秋霞，等.益氣解毒活絡(luò)方對早期糖尿病腎病大鼠的防治作用〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志，2014；20(11)：165-9.

9 Raptis AE，Viberti G.Pathogenesis of diabetic nephropathy〔J〕.Exp Clin Endocrinol Diabetes，2001；109(2)：S424-37.

〔2016-09-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

宋春宇(1978-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事內(nèi)分泌疾病中西醫(yī)結(jié)合防治技術(shù)研究。

R587

A

1005-9202(2017)10-2396-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.020