谷小雨， 方婷婷， 高 琴， 康品方， 李正紅， 程向陽

(1. 蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院麻醉科， 2. 心血管內(nèi)科， 安徽蚌埠 233004； 3. 蚌埠醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室， 安徽蚌埠 233030)

?

高糖對(duì)線粒體乙醛脫氫酶2在大鼠心肌成纖維細(xì)胞中表達(dá)的影響*

谷小雨1, 3， 方婷婷3， 高 琴3， 康品方2， 李正紅3， 程向陽1△

(1. 蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院麻醉科， 2. 心血管內(nèi)科， 安徽蚌埠 233004； 3. 蚌埠醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室， 安徽蚌埠 233030)

目的：觀察心肌成纖維細(xì)胞是否存在線粒體乙醛脫氫酶2(ALDH2)的表達(dá)，探討ALDH2在高糖誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞引起纖維化發(fā)生中的作用。方法：原代培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞，分為正常對(duì)照組(5.5 mmol/L)、正常+ALDH2激動(dòng)劑Alda-1(20 μmol/L)組、高糖組(30 mmol/L)、高糖+Alda-1組。免疫熒光鑒定心肌成纖維細(xì)胞。各組細(xì)胞分別培養(yǎng)48 h后應(yīng)用MTT法檢測(cè)成纖維細(xì)胞增殖活力，RT-PCR和Western blot檢測(cè)ALDH2 mRNA及蛋白的表達(dá)。結(jié)果：RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示心肌成纖維細(xì)胞ALDH2 mRNA和蛋白均有表達(dá)。與正常對(duì)照組相比，高糖組心肌成纖維細(xì)胞增殖能力提高(P<0.01)，ALDH2蛋白表達(dá)下降(P<0.05)；與高糖組相比，高糖+Alda-1組心肌成纖維細(xì)胞增殖能力降低(P<0.01), ALDH2的蛋白表達(dá)增加(P<0.05)。結(jié)論：心肌成纖維細(xì)胞存在ALDH2的表達(dá)，ALDH2激動(dòng)劑Alda-1提高ALDH2的表達(dá)后可以抑制高糖引起的心肌成纖維細(xì)胞的增殖。

心肌成纖維細(xì)胞；乙醛脫氫酶2；高糖；Alda-1；大鼠

糖尿病是世界范圍內(nèi)常見的慢性疾病之一，其發(fā)病年齡日趨年輕化。糖尿病的重要并發(fā)癥之一-糖尿病心肌病導(dǎo)致患者病死率明顯高升, 主要病理改變?yōu)樾呐K的結(jié)構(gòu)以及功能紊亂，心肌纖維化是其

重要表現(xiàn)之一。

對(duì)于心肌損傷和纖維化研究，以往多著重于心肌細(xì)胞的作用[1]，近期報(bào)道表明，心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展與心肌成纖維細(xì)胞密度增加密切相關(guān)[2]。除心肌細(xì)胞外，心肌成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞以及血管平滑肌細(xì)胞是心臟的其他主要細(xì)胞來源[3]，其中心肌成纖維細(xì)胞數(shù)量最多，約占整個(gè)心臟細(xì)胞總數(shù)的60%，具有較高的增殖能力[2, 4]，也是細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生的主要來源。因此，探討心肌成纖維細(xì)胞在糖尿病心肌病中的作用及相關(guān)機(jī)制至關(guān)重要。

ALDH2是19個(gè)ALDH基因家族中的一員，它在乙醛和其他有毒醛類，如4-羥基壬烯醛的代謝以及硝酸鹽向一氧化氮的生物轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要的作用[5]。本實(shí)驗(yàn)室前期結(jié)果顯示[6, 7]糖尿病大鼠早期已經(jīng)發(fā)生心肌纖維化，表現(xiàn)為膠原沉積、心肌細(xì)胞排列紊亂以及心臟收縮和舒張功能紊亂等，心肌中羥脯氨酸含量隨著纖維化程度增加而增高。以往的報(bào)道多集中于ALDH2在糖尿病或高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷[1, 8]、心臟整體水平研究等，但ALDH2是否在心肌成纖維細(xì)胞上表達(dá)尚未見報(bào)道。

本研究首先觀察心肌成纖維細(xì)胞上是否存在ALDH2的表達(dá)，進(jìn)一步探討高糖誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞中ALDH2的變化情況，分析ALDH2在糖尿病心肌病中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要藥品試劑

SD乳鼠1～3 d(蚌埠醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，合格證號(hào)：SCXK(滬)2013-0006。細(xì)胞裂解液，0.25%胰酶消化液(含0.05%EDTA)(碧云天公司)，DMEM(Dulbecco modified Eagle medium)低糖培養(yǎng)基(Hyclone公司)，胎牛血清(四季青公司)，II型膠原酶以及MTT(Sigma公司)，DNA酶I(Solarbio公司)，mouse anti-Vimentin、FITC-羊抗小鼠IgG、小鼠抗大鼠GAPDH抗體和HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG(武漢博士德生物有限公司)，兔抗大鼠ALDH2抗體(Abcam公司)，引物合成(上海生工生物工程股份有限公司)，TRIzol(Invitrogen公司)，逆轉(zhuǎn)錄以及PCR試劑盒(Themo Fisher Scientific公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 大鼠心肌成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定 超凈工作臺(tái)中取乳鼠心尖部組織，預(yù)冷的D-Hank’s液沖洗2～3遍，剪碎后加入混合酶(終濃度分別為0.07%的胰蛋白酶，0.08%的II型膠原酶，10 μg/ml的DNA酶混合物)，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱靜置6～7 min，棄去渾濁上清。重復(fù)以上消化步驟約6～8次，直至心肌組織結(jié)構(gòu)疏松。加入等體積預(yù)冷的含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基，輕柔吹打5～6次，靜置，待大塊組織沉淀后吸取渾濁上清液入另一離心管中，放入4℃冰箱以保持細(xì)胞活力。重復(fù)以上步驟直至心肌組織完全被吹散，收集上清1 000 r/min離心6 min得到細(xì)胞沉淀。完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱差速貼壁90 min，吸出培養(yǎng)瓶中含未貼壁心肌細(xì)胞的培養(yǎng)基，此時(shí)心肌成纖維細(xì)胞幾乎均已貼壁。加入DMEM低糖完全培養(yǎng)基，37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

將心肌成纖維細(xì)胞爬片用PBS液輕柔沖洗3遍，每遍1 min，4%的多聚甲醛37℃固定30 min，PBS液沖洗后加入0.5%Triton-100，37℃孵育30 min，PBS液沖洗后5% BSA 37℃封閉30 min，波形蛋白(Vimentin 1∶300)4℃孵育過夜，次日PBS液沖洗后加入FITC-羊抗兔IgG(1∶60)37℃避光孵育30 min，PBS液沖洗3遍，每遍5 min，DAPI染細(xì)胞核37℃避光孵育15 min，吸除DAPI染液，甲醇漂洗1遍，5 min；PBS液沖洗后在避光條件下滴加50%的甘油封片，熒光顯微鏡下拍照。鏡下可見陽性細(xì)胞胞質(zhì)區(qū)發(fā)綠色熒光，此為心肌成纖維細(xì)胞，計(jì)算有熒光標(biāo)記的細(xì)胞的比例，重復(fù)5次，確定心肌成纖維細(xì)胞純度。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組 含體積分?jǐn)?shù)為0.1的胎牛血清的DMEM低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞，給予實(shí)驗(yàn)條件干預(yù)前予以無血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h，使其同步化。選取傳代2～3代的細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分為4組：(1)正常對(duì)照組(normal control group，NG)：心肌成纖維細(xì)胞在葡萄糖濃度為5.5 mmol/L的DMEM完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)；(2)正常+ALDH2特異性激動(dòng)劑Alda-1(NG+Alda-1)：葡萄糖濃度為5.5 mmol/L的DMEM完全培養(yǎng)基，加入ALDH2特異性激動(dòng)劑Alda-1使得其終濃度為20 μmol/L[9]，培養(yǎng)48 h；(3)高糖組(high glucose，HG)：葡萄糖濃度為30 mmol/L[8, 10]的DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h；(4)高糖+Alda-1組(HG+Alda-1)：葡萄糖濃度為30 mmol/L的DMEM完全培養(yǎng)基，加入Alda-1使得其終濃度為20 μmol/L，培養(yǎng)48 h；(5)為排除高糖滲透壓對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的影響，設(shè)置高滲組(hypertonic pressure，HOP)：葡萄糖濃度為5.5 mmol/L的DMEM加24.5 mmol/L的甘露醇組成30 mmol/L的高滲完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h。我們選取(1)～(5)組進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)，(1)～(4)組進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 RT-PCR以及Western blot檢測(cè)心肌成纖維細(xì)胞ALDH2的mRNA以及蛋白表達(dá) 選取三個(gè)不同批次培養(yǎng)的正常心肌成纖維細(xì)胞樣本，按照TRIzol說明書提取細(xì)胞總RNA，測(cè)量濃度和純度。取3 μg為模板，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書方法逆轉(zhuǎn)錄為cDNA進(jìn)行PCR[9]，引物序列見(表1)。

選取三個(gè)不同批次培養(yǎng)的正常心肌成纖維細(xì)胞樣本，收集細(xì)胞沉淀。加入細(xì)胞裂解液和PMSF(100∶1)提取細(xì)胞總蛋白，按照BCA試劑盒方法進(jìn)行蛋白濃度的測(cè)定。取得的樣品進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳(12%分離膠70 V，4%濃縮膠100 V)。電泳結(jié)束后，采用380 mA，90 min將目的蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜上，室溫下5%的脫脂牛奶(脫脂奶粉+TBST)封閉2 h，ALDH2抗體(1∶3 500)4℃孵育過夜。加入HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG(1∶10 000)孵育1 h，洗膜后ECL顯影液顯影。

Tab. 1 Reverse transcription-PCR primers for ALDH2 and GAPDH

1.2.4 MTT檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力 取傳代2～3代心肌成纖維細(xì)胞，以1×105cells/ml種于96孔板培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)干預(yù)前予以無血清DMEM同步化48 h。設(shè)置高滲組(5.5 mmol/L DMEM+24.5 mmol/L甘露醇)排除高滲透壓對(duì)細(xì)胞的影響。各組細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)干預(yù)條件處理48 h之后每孔加入20 μl MTT溶液(5 mg/ml)，繼續(xù)37℃培養(yǎng)4 h后棄去培養(yǎng)液，每孔加入150 μl DMSO，置于搖床上緩慢振蕩20～30 min，酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm吸光度值。

1.2.5 Western blot檢測(cè)各組心肌成纖維細(xì)胞ALDH2蛋白表達(dá) 藥物培養(yǎng)48 h后收集各組細(xì)胞沉淀，提取各組細(xì)胞總蛋白，按照前述方法檢測(cè)各組心肌成纖維細(xì)胞ALDH2蛋白的表達(dá)，以GAPDH為內(nèi)參對(duì)照。采用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行條帶的灰度值測(cè)量，計(jì)算ALDH2/GAPDH比值，將該比值作為ALDH2蛋白表達(dá)量的半定量結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 心肌成纖維細(xì)胞的免疫熒光鑒定

Vimentin是一種存在于間質(zhì)細(xì)胞中的中間纖維，是細(xì)胞支架的組成部分，維持了細(xì)胞完整性，Vimentin表達(dá)陽性用于鑒定心肌成纖維細(xì)胞[4]。免疫熒光染色顯示心肌成纖維細(xì)胞Vimentin抗原免疫熒光呈陽性反應(yīng)，為綠色，位于細(xì)胞漿內(nèi)，DAPI染細(xì)胞核為藍(lán)色。免疫熒光染色表明本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的細(xì)胞為成纖維細(xì)胞，經(jīng)計(jì)算純度為96.8±2.6(圖1)。

2.2 心肌成纖維細(xì)胞中ALDH2的表達(dá)

選取三個(gè)不同批次培養(yǎng)的心肌成纖維細(xì)胞樣本，提取樣本細(xì)胞的總蛋白或總RNA，測(cè)量濃度后計(jì)算上樣量或模板量，進(jìn)行Western blot以及RT-PCR。結(jié)果顯示，ALDH2 mRNA和蛋白在心肌成纖維細(xì)胞上均有表達(dá)(圖2、圖3)。

Fig. 1 Immune fluorescence identification of cardiac fibroblasts (×100) A: DAPI； B: Vimentin； C: Merged

Fig. 2 mRNA expression of ALDH2 gene in cardiac fibroblasts

Fig. 3 Expression of ALDH2 in cardiac fibroblasts

2.3 各組心肌成纖維細(xì)胞的MTT檢測(cè)結(jié)果

NG和HOP(高滲組，5.5 mmol/L DMEM+24.5 mmol/L甘露醇)組心肌成纖維細(xì)胞的增殖活力無顯著差異，說明高滲環(huán)境對(duì)于心肌成纖維細(xì)胞增殖能力沒有影響。與NG組相比，HG組細(xì)胞的增殖能力明顯升高(P<0.01)，HG+Alda-1組細(xì)胞增殖被抑制(P<0.01，表2)。

GroupODvalueNG0.206±0.016NG+Alda-10.222±0.056HG0.315±0.035**HG+Alda-10.222±0.025##HOP0.225±0.038

NG: Normal control; HG: High glucose; Alda-1: Agonist of ALDH2; HOP: HG+Alda-1

**P<0.01vsNC；##P<0.01vsHG

2.4 高糖干預(yù)后兩組心肌成纖維細(xì)胞ALDH2蛋白的表達(dá)情況

由于MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高滲環(huán)境對(duì)于成纖維細(xì)胞無明顯影響，故在Western blot實(shí)驗(yàn)中我們并未繼續(xù)討論高滲組中ALDH2的變化。NG和NG+Alda-1組中ALDH2的表達(dá)無明顯區(qū)別，與NG組相比，HG中ALDH2的表達(dá)明顯降低(P<0.01)，HG+Alda-1組ALDH2的表達(dá)升高(P<0.01，圖4)。

3 討論

糖尿病心肌病是糖尿病嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，威脅著人類健康。高糖可以刺激心肌成纖維細(xì)胞增殖，增加細(xì)胞外基質(zhì)的形成，膠原分泌增多，從而使得心臟顯著增大，心臟的收縮和舒張功能減退[11]。本研究中觀察到高糖刺激下，心肌成纖維細(xì)胞數(shù)目顯著增加，增殖能力明顯增強(qiáng)。

國內(nèi)外研究顯示，ALDH2廣泛表達(dá)于心臟、肝臟、腎臟以及肺臟等重要器官中，并參與了上述臟器相關(guān)疾病的發(fā)生。激動(dòng)ALDH2可減輕糖尿病大鼠心肌損傷程度[12, 13]。已有研究表明激動(dòng)ALDH2可以抑制高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞AMPK激活、上調(diào)FOXO3a磷酸化，減少心肌細(xì)胞凋亡，發(fā)揮保護(hù)作用[8]，并且可以通過提高細(xì)胞自噬改善高糖引起的心肌細(xì)胞損傷[1, 14]，但關(guān)于心肌成纖維細(xì)胞是否表達(dá)ALDH2以及在糖尿病心肌病中的作用卻鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)中通過mRNA及蛋白水平檢測(cè)觀察到心肌成纖維細(xì)胞存在ALDH2的表達(dá)。

ALDH2對(duì)多種心血管相關(guān)損傷具有保護(hù)作用。提高ALDH2的表達(dá)可以改善糖尿病引起的微血管損傷[15]，在大鼠糖尿病心肌病中發(fā)揮心肌保護(hù)作用，并且可以對(duì)抗大鼠心肌缺血/再灌注損傷，改善心臟功能[16]。低劑量乙醇為ALDH2非特異性激動(dòng)劑，它的干預(yù)可以通過增高ALDH2表達(dá)、抑制JNK表達(dá)減輕糖尿病大鼠心肌纖維化的發(fā)生[17]。當(dāng)心肌細(xì)胞發(fā)生缺氧以及高糖損傷時(shí)，ALDH2的表達(dá)降低，予以心肌細(xì)胞保護(hù)干預(yù)時(shí)ALDH2的表達(dá)有所提高[6, 18]。本實(shí)驗(yàn)中觀察到，與正常組相比，高糖處理組心肌成纖維細(xì)胞增殖的同時(shí)，ALDH2蛋白表達(dá)降低，提示高糖可能通過降低心肌成纖維細(xì)胞ALDH 2的表達(dá)參與高糖引起的細(xì)胞損傷。給予ALDH 2特異性激動(dòng)劑Alda-1干預(yù)后可以提高ALDH2的表達(dá)，抑制高糖引起的心肌成纖維細(xì)胞增殖，對(duì)抗高糖培養(yǎng)帶來的細(xì)胞損傷。

綜上所述，我們首次證實(shí)了心肌成纖維細(xì)胞上存在ALDH2的表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)，提高ALDH2的表達(dá)可以抑制高糖引起的心肌成纖維細(xì)胞的增殖從而產(chǎn)生心肌保護(hù)作用，對(duì)糖尿病心肌纖維化的臨床治療帶來新的治療方向和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

[1] 劉 敏, 張 樂, 馬 穎, 等. 線粒體乙醛脫氫酶2通過提高細(xì)胞自噬改善高糖導(dǎo)致的心肌損傷[J]. 心臟雜志, 2015, 27(3): 249-254.

[2] Baudino TA, Carver W, Giles W,etal. Cardiac fibroblasts: friend or foe[J].AmJPhysiolHeartCircPhysiol, 2006, 293(3): 1015-1026.

[3] Sun Y, Weber KT. Animal models of cardiac fibrosis[J].MethodsMolMed, 2005, 117: 273-290.

[4] 辛 毅, 許秀芳, 黃益民, 等. 乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)及熒光鑒定[J]. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2011, 28(5): 541-547.

[5] Budas GR, Disatnik MH, Mochly-Rosen D. Aldehyde Dehydrogenase 2 in Cardiac Protection: A New Therapeutic Target [J].TrendsCardiovascMed, 2009, 19(5): 158-164.

[6] 王曉梅, 葉紅偉, 康品方, 等. 線粒體乙醛脫氫酶在大鼠糖尿病心肌病中的表達(dá)及意義[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào), 2012, 28(3): 379-383.

[7] 張冠軍， 張蔚屏， 王開成， 等. 厄貝沙坦對(duì)抗糖尿病大鼠心肌纖維化作用及機(jī)制[J]. 中國應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2016, 32(3): 221-224.

[8] 郭鈺麗, 閆 浩, 張榮慶, 等. 線粒體乙醛脫氫酶2(ALDH2)通過 AMPK/FOXO3a 通路改善高糖導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2014, 14(11): 2024-2028.

[9] Miller SP, Younus H, Vanam R,etal. Alda-1 is an agonist and chemical chaperone for the common human aldehyde dehydrogenase 2 variant[J].NatStructMolBiol, 2010, 17(2): 159-164.

[10]Yu W, Zha W, Ke Z,etal. Curcumin protects neonatal rat cardiomyocytes against high glucose-induced apoptosis via PI3K/Akt signalling pathway[J].JDiabetesRes, 2016, 2016: 4158591.

[11]戴 斌, 崔 猛, 張 宏. 高糖狀態(tài)下心肌成纖維細(xì)胞I、III型膠原表達(dá)變化的觀察[J]. 重慶醫(yī)學(xué), 2013, 42(15): 1724-1726.

[12]Wang JL, Wang HG, Hao PP,etal. Inhibition of aldehyde dehydrogenase 2 by oxidative stress is associated with cardiac dysfunction in diabetic rats [J].MolMed, 2011, 17(3-4): 172-179.

[13]王洪巨， 康品方， 葉紅偉， 等. 激動(dòng)乙醛脫氫酶2對(duì)糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注損傷的作用[J]. 中國應(yīng)用生理學(xué)雜志， 2012， 28(2)： 133-137.

[14]Guo YL, Yu WJ, Sun DD,etal. A novel protective mechanism formitochondrial aldehyde dehydrogenase 2 (ALDH2) in type I diabetes-induced cardiac dysfunction: Role of AMPK-regulated autophagy[J].BiochimBiophysActa, 2015, 1852(2): 319-331.

[15]Idewaki Y, Iwase M, Fujii H,etal. Association of genetically determined aldehyde dehydrogenase 2 activity with diabetic complications in relation to alcohol consumption in Japanese patients with type 2 diabetes mellitus: the fukuokadiabetes registry[J].PLoSOne, 2015, 10(11): e0143288.

[16]Ji W, Wei S, Hao P,etal. Aldehyde dehydrogenase 2 has cardioprotective effects on myocardial ischaemia/reperfusion injury via suppressing mitophagy[J].FrontPharmacol, 2016, 7: 101.

[17]于 影, 張冠軍, 宗巧鳳, 等. 低劑量乙醇干預(yù)減輕糖尿病大鼠心肌纖維化的機(jī)制探討[J]. 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2015, 20(4): 379-383.

[18]張應(yīng)花, 孫愛軍, 文小軍, 等. 硝酸甘油對(duì)大鼠缺氧心肌細(xì)胞乙醛脫氫酶 2表達(dá)的影響[J]. 上海醫(yī)學(xué), 2010, 33(5): 417-420.

Effect of high concentration glucose on the expression of ALDH2 in cardiac fibroblasts of rats

GU Xiao-yu1, 3, FANG Ting-ting3, GAO Qin3, KANG Pin-fang2, LI Zheng-hong3, CHENG Xiang-yang1△

(1. Department of Anesthesiology, 2. Department of Cardiovascular Medicine, the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu 233004;3. Department of Physiology, Bengbu Medical College, Bengbu 233030, China)

Objective: To observe whether acetaldehyde dehydrogenase 2 (ALDH2) is expressed in cardiac fibroblasts and investigate the change of ALDH2 in cardiac fibroblasts when cultured with high concentration of glucose. Methods: Cultured cardiac fibroblasts were randomly divided into four groups: normal control group (5.5 mmol/L glucose), Alda-1 (the agonist of ALDH2, 20 μmol/L) group, high glucose group (30 mmol/L glucose) and high glucose + Alda-1 group. Cardiac fibroblasts were identified by immunofluore-scence technique. Cell proliferation was detected by MTT method after treated with drugs for 48 hours. mRNA and protein expressions of ALDH2 were determined by RT-PCR and Western blot, aimed to ensure whether ALDH2 was expressed in cardiac fibroblasts. The changes of ALDH2 protein expression in cardiac fibroblasts were tested by Western blot. Results: RT-PCR and Western blot results revealed that ALDH2 was expressed in cardiac fibroblasts. Compared with normal control group, cardiac fibroblasts proliferation was increased (P<0.05), while the protein expression of ALDH2 was reduced (P<0.05) in high glucose group. When treated with Alda-1, the proliferation of cardiac fibroblasts was decreased (P<0.01), while the protein expression of ALDH2 was increased (P<0.05) in high glucose group. Conclusion: ALDH2 was expressed in cardiac fibroblasts. Alda-1, the agonist of ALDH2 enhanced the expression of ALDH2 and inhibited the proliferation of cardiac fibroblasts when cultured with high concentration of glucose.

cardiac fibroblasts; acetaldehyde dehydrogenase 2; high concentration of glucose; Alda-1; rat

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81550036)；安徽省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(1508085MH169，1508085MH170)；蚌埠醫(yī)學(xué)院研究生科研創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(Byycx1548)

2016-09-13

2017-01-25

R363.2

A

1000-6834(2017)03-267-05

10.12047/j.cjap.5514.2017.065

△【通訊作者】Tel： 0552-3086198； E-mail： cxybbmc@163.com