寶云龍， 王 羽， 吳 哲， 崔曉雪， 杜建軍， 王伊林， 趙 明△

(1. 內(nèi)蒙古通遼市醫(yī)院， 2. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)， 通遼 028000)

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caspase抑制劑z-VAD-fmk對阿霉素?fù)p傷乳鼠心肌細(xì)胞calumenin、caspase-3、GRP78及GRP94表達(dá)的影響*

寶云龍1， 王 羽2+， 吳 哲1， 崔曉雪2， 杜建軍1， 王伊林2， 趙 明2△

(1. 內(nèi)蒙古通遼市醫(yī)院， 2. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)， 通遼 028000)

目的：研究細(xì)胞凋亡限速酶caspase廣譜抑制劑z-VAD-fmk對阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞calumenin、caspase-3、GRP78及GRP94表達(dá)的影響, 探討心肌細(xì)胞網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及心肌細(xì)胞凋亡是否存在相互調(diào)控關(guān)系。方法：原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為3組：對照組(正常細(xì)胞)、阿霉素組(3 mg/L阿霉素+心肌細(xì)胞)、Z-VAD-fmk組(3 mg/L阿霉素+0.1 μmol/L Z-VAD-fmk+心肌細(xì)胞)，每組細(xì)胞設(shè)3個(gè)復(fù)孔，分別處理后置37℃、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h阿霉素組、z-VAD-fmk組。采用免疫組化方法檢測培養(yǎng)乳鼠心室肌細(xì)胞α-SMA蛋白。采用Western blot技術(shù)檢測各組心肌細(xì)胞Calumenin、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白GRP78、GRP94及caspase-3表達(dá)。結(jié)果：與對照組相比較，阿霉素組心肌細(xì)胞calumenin表達(dá)明顯減少(P<0.01)，GRP78 、GRP94及caspase-3表達(dá)增加(P<0.01)。與阿霉素組相比較，z-VAD-fmk組心肌細(xì)胞calumenin表達(dá)增加(P<0.01)，而GRP7，GRP94及caspase-3減少(P<0.01)。結(jié)論：caspase廣譜抑制劑z-VAD-fmk增加阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞calumenin表達(dá)進(jìn)而緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。

阿霉素；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白；乳鼠；z-VAD-fmk

阿霉素屬蒽環(huán)類抗癌藥物，具有抗瘤譜廣、抗瘤活性強(qiáng)的特點(diǎn)，臨床上廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤治療。但因?qū)π募〉亩拘宰饔?，限制了這一高效抗腫瘤藥物的臨床應(yīng)用，隨其劑量的增加而導(dǎo)致不可逆

的心肌損傷，最終可發(fā)生擴(kuò)張性心肌病及充血性心力衰竭[1]。關(guān)于阿霉素心肌病的發(fā)病機(jī)制目前尚未清楚，近年來認(rèn)為與心肌細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[2-4]。凋亡的產(chǎn)生機(jī)制復(fù)雜,近年發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是一條新的細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[5]。網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白(calumenin) 是一種位于哺乳動(dòng)物心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)/肌漿網(wǎng)內(nèi)屬于CREC家族具有多個(gè)EF-hand 結(jié)構(gòu)的鈣離子(Ca2+)結(jié)合蛋白[6]，文獻(xiàn)報(bào)道：calumenin緩解心肌細(xì)胞ERS并減少ERS介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量[7]。研究認(rèn)為caspases 的激活是心肌細(xì)胞凋亡的一個(gè)關(guān)鍵現(xiàn)象，caspase是一類同源蛋白酶，以酶原或無活性的形式被合成，在體內(nèi)低水平組成性表達(dá)，外部或內(nèi)部的刺激引發(fā)caspase以瀑布形式激活，進(jìn)而催化下游分子，產(chǎn)生作用。Caspase主要參與細(xì)胞凋亡的過程，在細(xì)胞凋亡過程中處于中心地位[8]。Caspase在細(xì)胞凋亡、活化及增殖中起到重要作用，其發(fā)揮作用受到多因素的調(diào)控。某些小分子與細(xì)胞作用后，直接抑制caspase的活性，稱為caspase的抑制劑。廣譜caspase抑制劑Z-VAD-fmk為其中的一種，可以明顯抑制心肌細(xì)胞凋亡[9]。本實(shí)驗(yàn)擬研究Z-VAD-fmk對阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞calumenin、caspase-3、GRP78及GRP94作用,討論阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及心肌細(xì)胞凋亡是否存在相互調(diào)控關(guān)系，進(jìn)一步揭示阿霉素心肌病發(fā)病機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物藥品與儀器

(1)1～3 d,Balb/c新生乳鼠購置吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心,許可證號：scxk(吉)2011-0004; (2)ɑ-SMA antibody (貨號：BM0002)購自博士德公司，Calumenin antibody(貨號：bs-6658R-A555)購于Bioss公司, GRP78 antibody(貨號：PA1815)，GRP94 antibody(貨號：PA1340)，caspase-3 antibody(貨號：PB9188)購于Boster公司，內(nèi)參抗體 β-actin(貨號：wl01845)購于wanleibio公司。(3)阿霉素(深圳萬東藥業(yè)),Z-VAD-fmk(sigma)。

本研究表明基礎(chǔ)肝臟疾病不同的HBV-ACLF患者臨床特征和預(yù)后有所不同，WGO推薦的分類適用于中國HBV-ACLF患者。ACLF概念需要強(qiáng)調(diào)識別基礎(chǔ)肝病，這有利于臨床患者的管理和治療。本研究屬于單中心、回顧性研究，具有一定局限性；另外，WGO認(rèn)為ACLF中急性打擊導(dǎo)致的器官衰竭應(yīng)涵蓋肝內(nèi)及肝外臟器，而本研究納入患者均以肝臟功能衰竭為主要表現(xiàn)，未納入單純肝外臟器衰竭者。中國ACLF的概念將來是否要完全或者部分采用WGO-ACLF概念，還需要進(jìn)一步深入研究。

《白皮書》通過采集并梳理全國范圍內(nèi)的12240戶育兒家庭用戶行為大數(shù)據(jù)與在線調(diào)查問卷，向社會(huì)勾勒出新生代年輕家庭在育兒方面的“眾生相”，并囊括當(dāng)下最熱門的育兒話題，為更好地了解中國育兒家庭提供了有意義的參考。

1.3 免疫組織化學(xué)方法鑒定乳鼠培養(yǎng)心肌細(xì)胞

傳統(tǒng)教育模式中，教師作為課堂主體，在新課改環(huán)境下，轉(zhuǎn)換了教師和學(xué)生的地位，在小學(xué)數(shù)學(xué)課堂上，教師只是學(xué)生的引路人，幫助學(xué)生更好地吸收數(shù)學(xué)知識，培養(yǎng)數(shù)學(xué)能力。要激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)數(shù)學(xué)的興趣，需要不斷完善教學(xué)方法。為了調(diào)動(dòng)學(xué)生在課堂上的積極性，筆者通常在每節(jié)數(shù)學(xué)課的開始，會(huì)先給學(xué)生留三到五分鐘時(shí)間自己熟悉本節(jié)課應(yīng)學(xué)的內(nèi)容，讓沒有預(yù)習(xí)的學(xué)生也能稍微熱熱身，或者講解一些與本節(jié)課內(nèi)容相關(guān)的簡單又有趣的數(shù)學(xué)題。

1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

各組乳鼠培養(yǎng)心肌細(xì)胞進(jìn)行免疫組化鑒定，0.1%TritonX-100孵育，3%過氧化氫孵育，血清室溫封閉30 min，一抗ɑ-SMA(1∶1 000)孵育2 h，PBS洗3次，每次5 min，二抗孵育1 h，PBS洗3次，每次5 min，辣根酶標(biāo)記; DAB顯色5～10 min，顯微鏡下觀察以掌握染色程度，PBS洗10 min，蘇木素復(fù)染2 min，鏡檢。

構(gòu)建問卷時(shí)，充分考慮社會(huì)距離對行為的影響。以情景1和11為例，社會(huì)距離對泰國留學(xué)生使用直接請求言語行為策略和我們想象的有所不同。照常理，社會(huì)距離越近，越容易實(shí)施直接請求言語行為，但調(diào)查結(jié)果顯示，社會(huì)距離較近的反而更多使用間接請求策略，而社會(huì)距離較遠(yuǎn)的反而更多使用直接請求策略。深入探討發(fā)現(xiàn)，在泰國高等社會(huì)地位主要有三級。一級：國王，二級：和尚，三級：長輩和老師，對這三級給予崇高敬意。因此即使對自己的祖父，社會(huì)距離親近，依然慣用間接請求策略。

自從20世紀(jì)70年代能源危機(jī)以來，以丹麥為代表的許多西方國家開始進(jìn)行生物質(zhì)能源發(fā)電研究，垃圾、動(dòng)物糞便、農(nóng)業(yè)剩余物等都曾經(jīng)被用來嘗試發(fā)電。但是30多年的科學(xué)研究與實(shí)踐證明了農(nóng)作物秸稈直燃發(fā)電是一種最適宜的選擇。

細(xì)胞培養(yǎng)于10%胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基中，置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。隔天換液處理，接種密度為70%為宜，便于加藥。細(xì)胞加藥：對照組(心肌細(xì)胞)、阿霉素組(3 mg/L阿霉素+心肌細(xì)胞)、Z-VAD-fmk組(3 mg/L阿霉素+0.1 μmol/L Z-VAD-fmk+心肌細(xì)胞)Z-VAD-fmk藥物濃度參考發(fā)表文獻(xiàn)[10]，藥物處理細(xì)胞24 h后收集細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。每組細(xì)胞設(shè)3個(gè)復(fù)孔。

1.2 乳鼠心肌細(xì)胞的分離與培養(yǎng)

1.5 Western blot檢測各組心肌細(xì)胞Calumenin及caspase-3表達(dá)

2.2 各組心肌細(xì)胞Calumenin及caspase-3表達(dá)

1.6 Western blot檢測各組心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白GRP78、GRP94表達(dá)

乳鼠培養(yǎng)心肌細(xì)胞經(jīng)免疫組化實(shí)驗(yàn)，檢測出心肌細(xì)胞特有的ɑ-SMA蛋白，培養(yǎng)細(xì)胞為ɑ-SMA蛋白陽性染色，確定為心室肌細(xì)胞(圖1，見彩圖頁Ⅰ)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將乳鼠心臟放入培養(yǎng)皿中，用PBS反復(fù)清洗。將清洗后的心臟組織剪碎至1～3 mm3小塊。加入0.1%Ⅱ型膠原酶以及0.1%胰蛋白酶混合液，37℃消化25 min。消化好后將其移入15 ml離心管1 500 r/min離心7 min去上清。用PBS重懸沉淀，用吸管反復(fù)吹打后1 000 r/min離心5 min，用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，過200目篩網(wǎng)去除大塊組織。PBS清洗細(xì)胞兩次，1 000 r/min離心10 min，去上清，留沉淀。加入1 ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)后放置到培養(yǎng)板中。成纖維細(xì)胞貼壁較快，2 h差速貼壁法可去除大量的成纖維細(xì)胞，上清懸液中為較純的心肌細(xì)胞。細(xì)胞放置在培養(yǎng)板后24 h不用動(dòng)，隨后每兩天換1次液。培養(yǎng)細(xì)胞至密度為90%左右，PBS清洗2次。按實(shí)驗(yàn)內(nèi)容將細(xì)胞接種于6孔板中，細(xì)胞濃度為5×104cells/ml，置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。24 h可進(jìn)行轉(zhuǎn)染，細(xì)胞密度一般在70%為宜。

2 結(jié)果

2.1 各組乳鼠培養(yǎng)心肌細(xì)胞免疫組化

綠色環(huán)保是近年來蘇印總廠發(fā)展的一個(gè)重要命題，從源頭削減，中間控制到末端處理，每一步，其都格外重視。據(jù)介紹，公司使用先進(jìn)的環(huán)保材料，積極推行無水膠印等先進(jìn)技術(shù)，在自身生產(chǎn)過程中減少VOCs等有害物質(zhì)的排放。此外，其于四年前專門成立了清潔生產(chǎn)治理委員會(huì)，投資配備了處理廢氣、廢水、固廢物等的環(huán)保裝備，建立了清潔環(huán)保管理體系，以保證每一指標(biāo)都可以達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，甚而要做得更好。

實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)驗(yàn)1.5，檢測各組乳鼠心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白GRP78、GRP94表達(dá)，明確阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞抑制凋亡限速酶caspase-3表達(dá)是否引起GRP78、GRP94表達(dá)變化，每組重復(fù)3次。

各組心肌細(xì)胞經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)處理后，提取細(xì)胞總蛋白質(zhì)并將蛋白質(zhì)定量。定量后的蛋白質(zhì)按一定量進(jìn)行SDS-PAGE。根據(jù)定量的結(jié)果，每孔加入15 μg蛋白質(zhì)。電泳后，取出凝膠，15 V轉(zhuǎn)膜1 h，將膜取下，用5%的脫脂奶粉于室溫?fù)u動(dòng)封閉1 h，加入針對目的蛋白的一抗(Calumenin為1∶1 000；caspase-3為1∶1 000)，室溫作用1 h后，TBST清洗4次，加入二抗作用1 h，用ECL顯色液進(jìn)行顯影，每組重復(fù)3次。檢測各組心肌細(xì)胞Calumenin、總caspase-3表達(dá)，明確阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞抑制凋亡限速酶caspase-3表達(dá)是否引起心肌細(xì)胞Calumenin表達(dá)變化。

與對照組心肌細(xì)胞caspase-3相比較，阿霉素組心肌細(xì)胞caspase-3表達(dá)增加(P<0.01)，而無論與對照組還是阿霉素組心肌細(xì)胞比較，Z-VAD-fmk組心肌細(xì)胞caspase-3表達(dá)明顯降低(P<0.01)，這證明Z-VAD-fmk抑制caspase-3作用有效；與對照組心肌細(xì)胞Calumenin相比較，阿霉素組心肌細(xì)胞Calumenin表達(dá)減少(P<0.01)，而與阿霉素組心肌細(xì)胞比較，Z-VAD-fmk組心肌細(xì)胞Calumenin表達(dá)增加(P<0.01, 圖2，表1)。

Fig. 2 The expressions of Calumenin and caspase-3 in cultured myocytes A: Control group; B: Adriamycin group; C: Z-VAD-fmk group

GroupCalumeninCaspase-3Control762±106853±78Adriamycin269±54**1806±195**Z-VAD-rmk539±83##984±121##

**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsadriamycin group

2.3 各組心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白GRP78、GRP94表達(dá)

試驗(yàn)地選擇在貴州省畢節(jié)市黔西縣綠化鄉(xiāng)小海子村丫口組謝與軍農(nóng)戶的承包地上，土質(zhì)黃壤，地勢平坦，肥力中等均勻，前作玉米，東經(jīng)106°03'81"，北緯 26°58'27"，海拔 1 252.6m。

與對照組心肌細(xì)胞GRP78相比較，阿霉素組心肌細(xì)胞GRP78表達(dá)增加(P<0.01)，與阿霉素組心肌細(xì)胞比較，Z-VAD-fmk組心肌細(xì)胞GRP78表達(dá)降低(P<0.01)； 與對照組心肌細(xì)胞GRP94相比較，阿霉素組心肌細(xì)胞GRP94表達(dá)增加(P<0.01)，與阿霉素組心肌細(xì)胞比較，Z-VAD-fmk組心肌細(xì)胞GRP94表達(dá)降低(P<0.01, 圖3，表2)。

3 討論

Caspase是通過靠近天冬氨酸殘基位置的切割效應(yīng), 進(jìn)而導(dǎo)致caspase 家族成員以類似于酶原激活的方式相互激活, 并產(chǎn)生放大效應(yīng)。 Caspase-3 屬于在級聯(lián)下游操作底物酶切的重要效性caspase, 是目前已知與凋亡關(guān)系最密切的 caspase 家族成員之一，在凋亡過程中起到了至關(guān)重要的作用[11]。本研究通過在細(xì)胞中加入z-VAD-fmk檢測casapse3的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)casapse3表達(dá)下降，說明z-VAD-fmk有效的抑制casapse3的表達(dá)，同時(shí)檢測calumenin蛋白發(fā)現(xiàn)其表達(dá)升高，提示z-VAD-fmk加入細(xì)胞后，可以緩解凋亡的發(fā)生。

Fig. 3 The expressions of GRP78 and GRP94 in cultured myocytes A: Control group; B: Adriamycin group; C: Z-VAD-fmk group

GroupGRP78GRP94Control1548±1651014±113Adriamycin3260±298**1560±137**Z-VAD-rmk2266±191##1123±129##

**P<0.01vscontrol group;##P<0.01vsadriamycin group

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)正確折疊蛋白質(zhì)功能異常，可能致誤折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)異常聚集及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性蛋白分泌增加，并且識別錯(cuò)誤折疊蛋白，并通過蛋白酶體將其降解，上述一系列反應(yīng)過程即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)(endoplasmic reticulum stress，ERS)。ERS發(fā)生后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通過上調(diào)分子伴侶蛋白GRP78及GRP94 表達(dá)、抑制蛋白質(zhì)合成、加速錯(cuò)誤折疊和未折疊蛋白質(zhì)降解等方式緩解ERS。然而持續(xù)或較嚴(yán)重的ERS 則通過下列PERK→P-PERK→eIF2a→ATF4→CHOP/caspase12→caspase9→caspase3/ATF6→CHOP等信號通路觸發(fā)凋亡信號，誘導(dǎo)CHOP、caspase-3、JNK 等促凋亡因子的表達(dá)及活化，導(dǎo)致ERS細(xì)胞凋亡[12]。78 kDa-糖調(diào)節(jié)蛋白(78-kDa glucose-regulated protein, GRP78)和94 KDa-糖調(diào)節(jié)蛋白(94-kDa glucose-regulated protein, GRP94)屬于熱休克蛋白(HSP70) 家族, 也稱免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白(immunoglobulin heavy chain binding protein, BiP),是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶蛋白, 通過與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激元件 PKR、IRE1 以及 ATF6 的結(jié)合抑制 ERS 的激活, 在未折疊蛋白反應(yīng)中發(fā)揮主要調(diào)控作用, 生理情況下, GRP78 在基礎(chǔ)水平表達(dá), 主要功能是作為分子伴侶參與新生多肽鏈的折疊 、裝配和轉(zhuǎn)運(yùn), GRP78 的誘導(dǎo)廣泛被認(rèn)為是 ERS 的標(biāo)志性分子[13]。本研究結(jié)果證明，z-VAD-fmk可緩解因阿霉素導(dǎo)致的GRP78和GRP94的高表達(dá)，進(jìn)而緩解了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。提示z-VAD-fmk通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激進(jìn)而影響了凋亡的發(fā)生。

本團(tuán)隊(duì)在前期研究中發(fā)現(xiàn)：calumenin對阿霉素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用[4],而且發(fā)現(xiàn)阿霉素?fù)p傷可能誘發(fā)ERS，并通過ERS凋亡信號通路PERK→P-PERK→eIF2a→ATF4→CHOP/IRE1→CHOP引起心肌細(xì)胞凋亡[14]。本研究應(yīng)用caspase廣譜抑制劑z-VAD-fmk抑制阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞caspase表達(dá)，觀察到z-VAD-fmk可以增加阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞calumenin表達(dá)進(jìn)而緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了心肌細(xì)胞calumenin表達(dá)減少可以加重阿霉素?fù)p傷并引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡，為阿霉素心肌損傷發(fā)病機(jī)制提供基礎(chǔ)理論。

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Effects of caspase inhibitor z-VAD-fmk on the expressions of calumenin,caspase-3, GRP78 and GRP94 in adriamycin-injured cardiomyocytes

BAO Yun-long1, Wang Yu2+, WU Zhe1, CUI Xiao-xue2, DU Jian-jun1, WANG Yi-lin2, ZHAO Ming2△

(1. The Inner-Mongolia Tongliao City Hospital, 2. The Inner-Mongolia National University, Tongliao 028000, China)

Objective: To study the effects of Caspase broad spectrum inhibitor Z-VAD-FMK on the expressions of calumenin,caspase-3,GRP78 and GRP94 in adriamycin-injured cardiomyocytes and to discuss whether there is a regulation relationship between calumenin and endoplasmic reticulum stress and myocardial apoptosis. Methods: The primary cultured suckling mouse myocardium were randomly divided into control group (cardiomyocyte), adriamycin group (3 mg/L adriamycin+cardiomyocyte) and z-VAD-fm group (3 mg/L adriamycin+0.1 μmol/L Z-VAD-fmk + cardiomyocyte), each group of cardiomyocytes were cultured in CO2incubator at 37℃ for 24 h (n=3). The expression of α-SMA protein in ventricular myocytes was detected by immunohistochemical method. The expressions of calumenin, GRP78, GRP94 and Caspase-3 in the myocardial cells were detected by Western blot. Results: Compared with the control group, the expression of calumenin in adriamycin induced myocardial cells was significantly decreased (P<0.01), while the expressions of GRP78, GRP94 and Caspase-3 expression were increased (P<0.01). Compared with adriamycin group, the expression of calumenin in z-VAD-fm group was increased (P<0.01), while the expressions of GRP78, GRP94 and caspase-3 were decreased (P<0.01). Conclusion: The caspase inhibitor z-VAD-fmk inhibited the expression of caspase and increased the expression of calumenin in adriamycin induced myocardial cells, and thus alleviated the endoplasmic reticulum stress.

adriamycin; endoplasmic reticulum stress; calumenin; suckling mouse; z-VAD-fmk

內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015MS08150)

2015-11-24

2016-11-22

R331.3；R-332

A

1000-6834(2017)03-222-04

12.12047/j.cjap.5384.2017.055

△【通訊作者】Tel: 13474859991； E-mail: langzhe73@163.com;+: 共同第一作者