黃燕麗

摘要：為滿足我省各市縣新一輪綠化廣東大行動的任務需求，紅椎作為珍貴闊葉用材，擁有高效、多用途、速生等特性是南方地區(qū)造林的重要鄉(xiāng)土樹種之一。由于紅椎的繁殖方法較難滿足造林之需求，紅椎大量繁殖主要通過組織培養(yǎng)技術。本文對紅椎組織培養(yǎng)與快速繁殖技術進行了研究。

關鍵詞：紅椎；苗木；繁殖技術

引言

紅椎，別名赤黎、黎木、紅椽拷，學名：Castanopsis hystrixA·DC，殼斗科，常綠喬木亞熱帶樹種，其材質優(yōu)良，木材堅硬耐腐，少變形，心材大，褐紅色，邊材淡紅色，色澤和紋理美觀，是高級家具、造船、車輛、工藝雕刻、建筑裝修等優(yōu)質用材。它具有生長快、萌芽力強、混生性能好等優(yōu)良特性，是與松、杉等針葉樹種混交造林的最理想的伴生樹種之一。目前紅椎的繁殖方式無法滿足造林之需求。因此，對其進行組織培養(yǎng)與快速繁殖技術研究，對紅椎的合理開發(fā)利用具有重要的作用。

1材料與方法

1.1材料

紅椎萌芽條

1.2方法

1.2.1外植體消毒

剪取紅椎萌芽條帶腋芽莖段作為外植體，去葉，剪切成1-2cm長帶1-2個腋芽或莖節(jié)小段。用75%乙醇浸泡20s，蒸餾水清洗后置于超凈臺上，在無菌操作下用0.1%升汞消毒8min，再用20%次氯酸鈉消毒5min，消毒處理后用無菌水漂洗5-6次。

1.2.2始芽的誘導

細胞分裂素對始芽的誘導起著十分重要的作用，要使嫩芽獲得較高的誘導率，適宜的細胞分裂素濃度甚為關鍵。離體培養(yǎng)常用的生長素為NAA，細胞分裂素為6-BA，以生長素NAA0.25mg/L為基礎，在含0.1～0.5mg/L不同濃度的細胞分裂素6-BA的BMT培養(yǎng)基上，另加CH500mg/L，VB21mg/L，pH為5.8。每試驗處理接種20段，光照培養(yǎng)，定期進行誘導率的統(tǒng)計。

1.2.3芽增殖和生長

將初代培養(yǎng)所得的芽接種在增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，調節(jié)6-BA、KT、NAA的濃度，共設計9個試驗處理，每處理接種芽20顆，不定期觀察芽的分化、增殖和生長狀況，并統(tǒng)計芽的增殖系數。

1.2.4生根培養(yǎng)

當紅椎芽繼代培養(yǎng)擴大繁殖到一定數量并生長到3-4cm高時，選取生長健壯的單芽切割進行生根培養(yǎng)試驗。試驗采用L9（34）～交試驗設計，試驗設計考慮的因素為生長素IBA和NAA以及基本培養(yǎng)基BMT，因素水平安排見表1。

生根率（%）=生根株數/接入的無根苗數×100%

2結果與分析

2.1始芽的誘導試驗

細胞分裂素6-BA對始芽誘導分化的影響效果見表1。

表2顯示，當6-BA的濃度為0.1mg/L時，始芽的誘導率很低，僅為25%，又多為生長纖細的單芽，而且部分頂芽變黃。在一定范圍內，隨著細胞分裂素6-BA濃度增加，外植體始芽的誘導率也呈相應提高趨勢，當細胞分裂素6-BA為較高濃度0.4mg/L時，初始芽的誘導率出現下降的趨勢，而當濃度提高到0.5mg/L時，始芽呈短粗密集，接種操作時極難切割剝離，且芽呈透明水腫玻璃化，不利于繼代擴繁培養(yǎng)。因此，以細胞分裂素6-BA濃度為0.3mg/L時，有利于外植體初始始芽的誘導，不僅有85%較高的誘導率，而且每叢芽有2-3個單芽，芽生長健壯。

2.2外源激素組合對芽增殖培養(yǎng)的影響

在植物組織培養(yǎng)過程中，始芽的分化不僅要有較高的增殖系數，同時始芽還必須是生長健壯，才能達到組培快繁的要求。以細胞分裂素6-BA、KT和生長素NAA為外源激素，將紅椎芽轉接在9種不同濃度梯度組合進行繼代培養(yǎng)，觀察統(tǒng)計平均在一個培養(yǎng)繼代周期內始芽的分化增殖系數和及其生長情況，結果見表2。

激素不同種類，不同濃度對芽的增殖和生長有不用的效果，經試驗表明，6-BA濃度對芽增殖培養(yǎng)影響最大，NAA濃度次之，KT濃度影響最小。增殖率的變化規(guī)律是：從細胞分裂素6-BA來看，當細胞分裂素6-BA的濃度為較低0.2mg/L時，芽在繼代培養(yǎng)30d時，平均增殖率為2.41%，芽長勢較弱，表現出葉尖卷曲，部分頂芽變黃，而當濃度增加到0.3mg/L時，芽的增殖系數也相應提高，達到最高的3.58，而且芽生長健壯，葉色綠，但當濃度增加較高為0.4mg/L時，芽的增殖率有所下降，芽的生長質量也呈下降趨勢，表現出葉卷曲，芽粗短呈玻璃化；從生長素NAA來看，在3種與細胞分裂素6-BA不同組合中，濃度為0.5mg/L時，平均增殖率最高，濃度過高或過低都不利于增殖率的提高；從細胞分裂素KT來看，在培養(yǎng)基中加入KT后，芽的增殖率反而出現下降，說明KT的加入不利于紅椎芽增殖培養(yǎng)。因此，紅椎在繼代培養(yǎng)時適宜芽增殖和生長的最佳外源激素組合為BMT+6-BA0.3mg/L+NAA0.5mg/L。

2.3單芽生根誘導培養(yǎng)

在植物離體培養(yǎng)過程中，單芽生根率的高低是影響無性快繁速度的主要因子之一，生長素類物質的合理應用對生根起著至關重要的促進作用。將生長健壯、葉片舒展的芽叢分割并切成單芽呈直插式接種，以BMT基本培養(yǎng)基、IAA和IBA二種不同生長素共9個處理，進行正交生根誘導試驗。

2.4植株的移栽

將組培生根瓶苗搬出培養(yǎng)室移至大棚于自然環(huán)境下練苗5-7d，移栽前對移栽基質進行消毒處理，提前一天用0.2%～0.3%高錳酸鉀溶液消毒基質，移栽當天用自來水澆透基質，除去基質中殘留的高錳酸鉀，用清水漂洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基。移栽試驗結果表明：紅心土的移栽效果最好。移栽后要淋水保濕，保持移栽苗水分的平衡，防止移栽苗萎蔫而死。用遮光度為75%的黑網擋陽以避免太陽直射，注意苗床的通風透氣，移栽后可適當噴施一定濃度的葉面肥，使用這種方法移栽成活率在90%以上。

3小結與討論

3.1培養(yǎng)基的選擇

選擇適宜的培養(yǎng)基對組織培養(yǎng)成功與否至關重要。紅椎適宜的基本培養(yǎng)基為BMT。分析認為，BMT培養(yǎng)基內含有較高的Ca2+離子，Ca2+濃度能促進植物體內糖分的運輸，說明高濃度的鈣元素更加有利于紅椎芽的器官分化和生長。這一點與王以紅等對殼斗科植物大葉櫟組織培養(yǎng)選用的培養(yǎng)基的研究結果相一致。

3.2芽增殖和生長

以BMT為基本培養(yǎng)基，添加細胞分裂素6-BA0.3mg/L和生長素NAA0.5mg/L，可作為紅椎芽擴繁培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。將紅椎的芽以水平向接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)前期在較弱的光照下，光照強度控制在10001x左右，后期移置于3000N較強的光照強度下生長，繼代培養(yǎng)周期保持在30d左右，進行芽的分化、增殖和生長等擴繁培養(yǎng)，繼代芽可以3.58/30d的增殖系數達到擴大繁殖目的。在紅椎芽增殖和生長的過程中，隨著繼代次數的增加，培養(yǎng)材料會出現褐化現象，在轉接的時候將芽基部老化材料剪切后再接到新鮮的培養(yǎng)基上，能在一定程度上克服褐化現象的發(fā)現，但是褐化問題的根源有待進一步研究。

3.3單芽生根培養(yǎng)

可以1/2BMT+IBAl.5mg/L+IAA0.3mg/L作為紅椎單芽生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基，在繼代芽中選擇生長健壯的單芽切割后接種，進行根系誘導培養(yǎng)。培養(yǎng)6d時單芽基部開始長出根點，培養(yǎng)15d時根系生長至1～1.5cm長，形成完整的再生植株，生根率達到82%。本研究發(fā)現，單芽生根誘導與繼代芽的質量有很強的相關性，生長健壯、葉片舒展、葉色濃綠的繼代芽則生根率高，且根系發(fā)達，因此在進行單芽生根誘導前，必須使繼代芽得到充分的光照，以增強光合作用促進始芽的健壯生長。

4結語

研究結果表明，用來自于紅椎優(yōu)株的萌芽條的莖段作為外植體比較容易誘導成苗，試驗中，最適誘導培養(yǎng)基為BMT+6-BA0.3mg/L+NAA0.25mg/L，誘導率達到了85%；最適增殖培養(yǎng)基為BMT+6-BA0.3mg/L+NAA0.5mg/L，芽增殖系數3.58，且生長健壯；單芽在1/2BMT+IBAl.5mg/L+IAA0.3mg/L培養(yǎng)基上生根效果好，生根率82%；煉苗成功后移栽成活率達90%以上。此研究所建立的紅椎組織培養(yǎng)再生繁殖體系，為紅椎優(yōu)良苗木的培育提供了一定的科學依據。