亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        胸腺素α1二聚體蛋白的初步毒理學(xué)研究

        2017-06-09 08:58:14牛東武都都高凱麗王昭維張存張英起張偉李維娜
        生物技術(shù)通訊 2017年3期
        關(guān)鍵詞:毒理學(xué)攝食臟器

        牛東,武都都,高凱麗,王昭維,張存,張英起,張偉,李維娜

        1.腫瘤生物學(xué)國家重點實驗室;

        2.第四軍醫(yī)大學(xué) a.藥學(xué)系生物制藥學(xué)教研室;b.學(xué)員一旅二營八連;陜西 西安 710032

        胸腺素α1二聚體蛋白的初步毒理學(xué)研究

        牛東1,2a,2b,武都都1,2a,2b,高凱麗1,2a,王昭維1,2a,張存1,2a,張英起1,2a,張偉1,2a,李維娜1,2a

        1.腫瘤生物學(xué)國家重點實驗室;

        2.第四軍醫(yī)大學(xué) a.藥學(xué)系生物制藥學(xué)教研室;b.學(xué)員一旅二營八連;陜西 西安 710032

        目的:對胸腺素α1二聚體蛋白開展初步的毒理學(xué)研究,為后續(xù)系統(tǒng)地進(jìn)行臨床前研究提供依據(jù)。方法:將BALB/c小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對照組和胸腺素α1二聚體蛋白高、中、低劑量組,觀察胸腺素α1二聚體蛋白給藥后小鼠的一般行為,進(jìn)行血液生化學(xué)指征及組織病理學(xué)檢測。結(jié)果:動物未見明顯的中毒癥狀和死亡,與對照組相比,高、中、低各劑量胸腺素α1二聚體蛋白注射組的動物行為、活動、體重、進(jìn)食量等與對照組無顯著差異,血液生化指標(biāo)與主要臟器組織形態(tài)學(xué)檢查也均未見異常。結(jié)論:未發(fā)現(xiàn)胸腺素α1二聚體對小鼠有明顯的毒性作用。

        胸腺素α1;二聚體;毒理學(xué);小鼠

        胸腺素α1(thymosinα1,Tα1)是一種胸腺來源的酸性多肽,由28個氨基酸殘基組成,是重要的生物調(diào)節(jié)劑,可以顯著提高生物體的免疫應(yīng)答能力[1],臨床上已廣泛用于治療各種原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞缺陷病、某些自身免疫性疾病、乙型肝炎、丙型肝炎以及輔助治療腫瘤[2-6]。其臨床療效確切,毒副作用輕微,具有廣闊的應(yīng)用前景。

        為克服市場上同類藥品存在的純度低、價格昂貴等問題,我們實驗室前期構(gòu)建和表達(dá)了Tα1二聚體(Tα1②)蛋白,實現(xiàn)了Tα1以二聚體的形式在大腸桿菌中高效表達(dá),并用簡便廉價的純化工藝獲得了高產(chǎn)量、高活性的純化產(chǎn)物。細(xì)胞學(xué)實驗證實Tα1②可以促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增值,具有比化學(xué)合成單體更高的生物學(xué)活性[7]。

        為了進(jìn)行系統(tǒng)的臨床前研究,我們對Tα1②進(jìn)行了初步毒理學(xué)檢測。通過觀察不同劑量Tα1②給藥對小鼠的進(jìn)食、體重等一般狀況的影響,檢測血清生化學(xué)指標(biāo)、重要臟器相對重量、組織病理學(xué)情況,考察Tα1②的安全性,為進(jìn)一步系統(tǒng)性進(jìn)行Tα1②的臨床前研究提供參考依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        BALB/c小鼠(雌性,16~18 g)購自第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心;日達(dá)仙(SciClone公司);IPTG(Solon公司);4℃高速離心機(jī)、全自動生化分析儀(貝克曼公司);HE染色試劑盒(博士德公司)。

        1.2 小鼠的飼養(yǎng)與給藥

        BALB/c小鼠飼養(yǎng)環(huán)境為溫度24~26℃,相對濕度40%~70%,自然通風(fēng),光照/黑暗各12 h,自由攝食、飲水。40只小鼠按體重隨機(jī)分為生理鹽水對照組及低濃度(80μg/只)、中濃度(160μg/只)、高濃度(320μg/只)Tα1②實驗組,每組10只。分別于腹腔內(nèi)注射生理鹽水或Tα1②,每周2次,連續(xù)給藥6周,給藥后檢測各項指標(biāo)。

        1.3 小鼠的一般情況

        給藥后每日觀察小鼠一般狀況,包括體貌、毛色、活動、攝食、飲水、對刺激的反應(yīng)等。觀察各組是否出現(xiàn)豎尾、躁動、驚厥等興奮現(xiàn)象,或嗜睡、蜷縮、弓背等抑制現(xiàn)象。觀察各組糞、尿情況,是否有腹瀉、便血、黑便、尿血等現(xiàn)象,如有異常則進(jìn)行記錄。每周稱取小鼠空腹體重并測定飼料消耗量1次,共計6周。

        1.4 生化指標(biāo)測定

        小鼠最后一次給藥次日摘眼球取血,取血前禁食過夜。血液靜置30 min使其充分凝固,3000~4000 r/min離心分離血清,采用全自動生化分析儀進(jìn)行血清生化學(xué)檢測。

        1.5 重要臟器形態(tài)學(xué)與組織學(xué)觀察

        迅速脫頸處死小鼠,進(jìn)行系統(tǒng)解剖,觀察各主要臟器形態(tài)大小差異,同時稱重,與小鼠體重比較,求得各臟器系數(shù)(g/100 g)。摘取心、肝、肺、腎及腦新鮮組織,用多聚甲醛固定;固定后的組織經(jīng)修塊取材,常規(guī)石蠟包埋,滑動切片機(jī)5 μm切片;切片脫水脫蠟,蘇木素-伊紅(HE)染色,光鏡下對各組織進(jìn)行病理學(xué)檢測。

        1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

        采用SPSS17.0軟件,組間t檢驗和單因素方差分析,計量結(jié)果以x±s表示,P<0.05為有顯著性差異。

        2 結(jié)果

        2.1 小鼠的一般情況檢測

        高、中、低劑量Tα1②組及生理鹽水對照組注射給藥期間,各組動物一般狀況良好,沒有出現(xiàn)死亡;各組一般生理活動及二便未見異常;小鼠皮毛光澤,皮膚黏膜無異常,眼、耳、鼻、口及肛門等無異常分泌物;未見呼吸困難或呼吸頻率、幅度等發(fā)生異常變化;攝食、飲水正常,未見嘔吐、腹瀉等胃腸道反應(yīng)。

        小鼠按體重隨機(jī)分組,入組時各組體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異。于給藥第1、2、3、4、5、6周各稱量體重一次,觀察各組小鼠體重是否有變化,結(jié)果如表1及圖1,各組小鼠體重呈緩慢上升趨勢,給藥組體重變化與對照組比較無顯著性差異。

        小鼠入組時各組攝食量無統(tǒng)計學(xué)差異。于給藥第1、2、3、4、5、6周各計算攝食量一次,給藥組與對照組比較無顯著差異(表2、圖2)。

        表1 胸腺素α1二聚體對小鼠體重的影響(g,x±s,n=10)

        2.2 血清生化學(xué)檢測結(jié)果

        給藥6周后進(jìn)行血清生化學(xué)分析,結(jié)果見表3。高劑量給藥組總膽紅素(TBIL)和血糖(GLU)水平與對照組比較略升高(P<0.05),低劑量給藥組的白蛋白(ALB)水平低于對照組(P<0.01),但上述變化均在BALB/c小鼠的正常值范圍內(nèi);其他各項血清生化指標(biāo)與對照組比較無顯著差異。

        2.3 臟器組織病理學(xué)結(jié)果

        解剖小鼠,肉眼觀察各主要臟器均顏色鮮活,位置、大小無異常。稱重并計算各臟器數(shù)(表4),給藥組與對照組相比較無顯著差異。各組織用多聚甲醛固定后,包埋蠟塊切片進(jìn)行HE染色(圖3),各劑量組小鼠心、肝、肺、腎沒有發(fā)現(xiàn)明顯病變,與生理鹽水對照組相比無差異。

        3 討論

        作為一種重要的生物學(xué)應(yīng)答調(diào)節(jié)物,Tα1對調(diào)節(jié)免疫功能、維持人體內(nèi)動態(tài)免疫平衡具有重要作用。Tα1可以促進(jìn)T細(xì)胞增殖及對抗原刺激的反應(yīng)性[8],增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)同種或自身淋巴細(xì)胞反應(yīng)的能力[9],并且通過延遲自由基的產(chǎn)生和減少谷胱甘肽的消耗,拮抗淋巴細(xì)胞成熟過程中的凋亡[10]。Tα1能夠活化巨噬細(xì)胞,促進(jìn)其胞飲、胞吞及抗原提呈能力[11]。Tα1對樹突狀細(xì)胞(DCs)也具有促進(jìn)成熟、分化的作用,能促使DCs分泌巨噬細(xì)胞激活因子從而增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答功能[12]。Ta1還有雙向性免疫調(diào)節(jié)效應(yīng),具有保護(hù)免疫功能和調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的作用,從而減輕細(xì)胞因子所致炎性損害,改善感染導(dǎo)致的高代謝狀態(tài)[13]。

        表2 胸腺素α1二聚體對小鼠攝食量的影響(g,x±s,n=10)

        圖1 小鼠給藥期間的體重變化

        圖2 小鼠給藥期間的攝食量變化

        圖3 各組小鼠重要臟器的HE染色圖

        表3 胸腺素α1二聚體對小鼠血清生化指標(biāo)的影響(x±s,n=10)

        Tα1已廣泛應(yīng)用于各種原發(fā)性或繼發(fā)性免疫缺陷病、自身免疫病、病毒及微生物感染、腫瘤等的治療中。單獨應(yīng)用或聯(lián)合其他藥物,臨床療效確切,不良反應(yīng)極其輕微,且大劑量使用時無發(fā)熱及過敏反應(yīng),有廣闊的應(yīng)用前景。但是,目前市售的Tα1多為化學(xué)合成或生物提取。前者制備成本高、售價昂貴,且生產(chǎn)工藝對環(huán)境有很大污染;后者從小牛等動物胸腺組織中提取獲得,產(chǎn)量和純度低,易引起患者的過敏反應(yīng)。而Tα1序列過短,因此難于用基因工程方法直接獲得。為解決這一難題,我們構(gòu)建表達(dá)了有生物學(xué)活性的Tα1②,獲得了高產(chǎn)量、低成本、高活性的純化產(chǎn)物,具有比化學(xué)合成單體更高的生物學(xué)活性[7]。

        我們以小鼠為試驗對象,對Tα1②進(jìn)行了初步毒理學(xué)研究,以評價其安全性。Tα1②給藥后未引起動物死亡及出現(xiàn)明顯的中毒癥狀,對小鼠的生長發(fā)育和血液生化指標(biāo)等均沒有不良影響。Tα1②給藥后動物的行為、活動、體重、進(jìn)食量等與對照組無顯著差異。文獻(xiàn)報道Tα1主要通過腎臟排泄[14],實驗結(jié)果顯示與對照組相比,腎功能檢測指標(biāo)與腎臟外觀大小、臟器系數(shù)及組織病理學(xué)等指標(biāo)均未發(fā)現(xiàn)異常,其他主要臟器組織形態(tài)學(xué)檢查也均未見異常。綜上所述,未發(fā)現(xiàn)Tα 1②對小鼠有明顯的毒性作用,為進(jìn)一步系統(tǒng)性進(jìn)行Tα1②的臨床前研究提供了參考依據(jù)。

        表4 胸腺素α1二聚體對小鼠臟器系數(shù)的影響(g/100g,x±s)

        [1]Low T L,Goldstein A L.The chemistry and biology of thymosin.II.Amino acid sequence analysis of thymosin alpha1 and polypeptide beta11[J].J Biol Chem, 1979,254(3):987-995.

        [2]Romani L,Bistoni F,Montagnoli C,et al.Thymosin alpha1:an endogenous regulator of inflammation,immunity,and tolerance[J].Ann N Y Acad Sci,2007, 1112(10):326-338.

        [3]Kim B H,Lee Y J,Kim W,et al.Efficacy of thymosinα-1 plus peginterferonα-2a combination therapy compared with peginterferon α-2a monotherapy in HBeAg-positive chronic hepatitis B:a prospective, multicenter,randomized,open-label study[J].Scand J Gastroenterol,2012,47(8-9):1048-1055.

        [4]Maio M,Mackiewicz A,Testori A,et al.Large randomized study of thymosin α1,interferon α,or both in combination with dacarbazine in patients with metastatic melanoma[J].J Clin Oncol,2010,28(10):1780-1787.

        [5]Shuqun C,Mengchao W,Han C,et al.Antiviral therapy using lamivudine and thymosinα1 for hepatocellular carcinoma coexisting with chronic hepatitis B infection[J].Hepatogastroenterology,2006,53(68):249-252.

        [6]Rustgi V.Combination therapy of thymalfasin(thymosinα1)and peginterferon α-2a in patients with chronic hepatitis C virus infection who are non-responders to standard treatment[J].J Gastroenterol Hepatol,2004,19 (12):S76-S78.

        [7]李維娜,吳守振,張露,等.胸腺素α1二聚體蛋白的克隆、表達(dá)、純化及其生物學(xué)活性檢測[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2009,30(8):676-678.

        [8]Maini M K,Boni C,Lee C K,et al.The role of virus-specific CD8 cells in liver damage and virual control during persistent hepatitis B virus infection[J].J Exp Med,2002,191(6):1269-1280.

        [9]Stefanini G F,Foschi F G,Castelli E,et al.α1-thymosin and transcatheter arterial chemoembolization in hepatocellular carcinoma patients:a preliminary experience[J].Hepatogastroenterology,1998,45(19):209-215.

        [10]Baumann C A,Badamchian M,Goldstein A L.Thymosinα1 antagonizes dexamethasone and CD3-induced apoptosis of CD4+CD8+thymocytes through the activation of cAMP and protein kinase C dependent second messenger pathways[J].Mech Ageing Dev,1997,94(1-3):85-101.

        [11]Shrivastava P,Singh S M,Singh N.Activation of tumor-associated macrophages by thymosinα1[J].Int J Immunopathol Pharmacol,2004,17(1):39-47.

        [12]Shrivastava P,Singh SM,Singh N.Antitumor activation of peritoneal macrophages by thymosinα1[J].Cancer Invest,2005,23(4):316-322.

        [13]姜軍,李寧,黎介壽.胸腺肽α1對嚴(yán)重腹腔感染大鼠蛋白質(zhì)代謝和細(xì)胞因子的影響[J].腸外與腸內(nèi)營養(yǎng), 2005,12(3):1652-1691.

        [14]Ancell C D,Phipps J,Young L.Thymosinα1[J].Am J Health Syst Pharm,2001,58(10):879-885.

        Toxicity Study of Thymosinα1 Concatemer in BALB/c M ice

        NIU Dong1,2,WU Du-Du1,2,GAO Kai-Li1,2,WANG Zhao-Wei1,2, ZHANG Cun1,2,ZHANG Ying-Qi1,2,ZHANG Wei1,2,LIWei-Na1,2*

        1.State Key Laboratory of Cancer Biology;2.Department of Biopharmaceutics,School of Pharmacy,Fourth Military Medical University;Xi'an 710032,China

        *Corresponding author,E-mail:liweina@fmmu.edu.cn

        Objective:A primary safety study of recombinant human thymosinα1 concatemer protein was conducted to support the following design of preclinical trial.Methods:The BALB/c mice were injected intraperitoneally with saline or thymosinα1 concatemer protein.The parameters of standard toxicology were evaluated systematically.Results:Visible changes were not found on general signs,body weight,food consumption,clinical chemistry and necropsy analysis of main organ between thymosinα1 concatemer administrated group and normal saline control group.Conclusion:In conclusion,primary toxicology study showed that recombinant human thymosinα1 concatemer was well tolerated and had no significant adverse effect on mice.

        thymosinα1;concatemer;toxicology;mice

        R99

        A

        1009-0002(2017)03-0338-04

        10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.019

        2017-01-06

        國家自然科學(xué)基金(81301785,81472649,81672800)

        牛東(1995-),男,本科生,(E-mail)88488031@qq.com

        李維娜,(E-mail)liweina@fmmu.edu.cn

        猜你喜歡
        毒理學(xué)攝食臟器
        一例由大網(wǎng)膜破裂致多臟器粘連導(dǎo)致牛死亡的病例淺析
        兩種不同投喂策略對加州鱸攝食量和生長的影響
        輕則攝食減慢,重則大量死魚!加州鱸養(yǎng)殖亞硝酸鹽超標(biāo),預(yù)防處理如何做好?
        籠養(yǎng)灰胸竹雞入冬前日攝食量規(guī)律的研究
        PM2.5毒理學(xué)實驗染毒方法及毒理學(xué)效應(yīng)
        在達(dá)古雪山巔
        紅巖(2017年6期)2017-11-28 19:16:31
        災(zāi)害毒理學(xué)理論研究初探
        火災(zāi)毒理學(xué)若干問題的探討
        手術(shù)治療盆腔臟器脫垂137例臨床分析
        攝食紫菜粉等4種單一餌料的蚤狀溞脂肪酸組成的比較
        116美女极品a级毛片| 国产乱码精品一区二区三区久久| 欧美xxxx做受欧美88| 亚洲av永久无码精品国产精品| 亚洲不卡无码高清视频| 国产自产自现在线视频地址| 国产亚洲精品品视频在线| 亚洲成av人片在线观看www| 在线播放a欧美专区一区| 亚洲av色香蕉一区二区三区蜜桃| 久久精品国产亚洲av成人文字| 国产草草影院ccyycom| 国产精美视频| 日韩一区二区,亚洲一区二区视频| 校园春色人妻激情高清中文字幕| 和外国人做人爱视频| 国产偷国产偷高清精品| 色综合久久人妻精品日韩| 亚洲一区二区二区视频| 亚洲熟少妇在线播放999| 青青草视频网站免费观看| 久久精品国产一区老色匹| 欧美老妇多毛xxxxx极瑞视频| 久久久久久av无码免费看大片| 久久国产精品男人的天堂av| 一区二区视频中文字幕| 天天躁日日躁狠狠久久| 在线观看网址你懂的| 国产午夜激情视频在线看| 婷婷成人丁香五月综合激情| 欧美丰满大乳高跟鞋| 蜜桃视频免费在线视频| 国产区女主播一区在线| 国产成人av片在线观看| 国产成人精品三上悠亚久久| av天堂亚洲另类色图在线播放| 中文字幕乱码熟妇五十中出| 日韩久久一级毛片| 手机在线中文字幕av| 一本加勒比hezyo无码专区| 亚洲人成网站在线观看播放|