樊紅軍，谷杰，周麗麗

長春市食品藥品檢驗中心，吉林長春130021

HPLC法測定三七傷藥片、膠囊和顆粒中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量

樊紅軍，谷杰，周麗麗

長春市食品藥品檢驗中心，吉林長春130021

目的建立HPLC法測定三七傷藥片、三七傷藥膠囊、三七傷藥顆粒中三七的含量測定方法。方法色譜柱：Agilent HC C18(250×4.6 mm,5 μm)；流動相：乙腈：水，采用梯度洗脫程序；檢測波長：203 nm。結(jié)果人參皂苷Rg1在0.276～2.346 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，r=0.999 9；平均回收率為99.01%（n=6）,RSD=2.5%；人參皂苷Rb1在0.243 2～2.067 2 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，r=0.999 9；平均回收率為98.38%（n=6）,RSD=1.5%。結(jié)論該法簡便，準確，重現(xiàn)性好，可作為評價三七傷藥片、三七傷藥膠囊、三七傷藥顆粒的質(zhì)控方法。

三七；人參皂苷Rg1；人參皂苷Rb1；含量測定；高效液相色譜

三七傷藥片、三七傷藥膠囊、三七傷藥顆粒為骨科用藥，只要功效為舒筋活血，散瘀止痛，用于跌打損傷，風(fēng)濕瘀阻；急慢性扭挫傷，神經(jīng)痛[1-2]。該系列品種均由三七、制草烏、雪上一枝蒿、冰片、骨碎補、紅花、接骨木和赤芍八味藥材組成的復(fù)方制劑，三七為君藥，具有散瘀止血，消腫止痛之功效[3]?？刂破滟|(zhì)量十分必要，參照中國藥典三七項下分析方法進行了含量測定研究[4]。實驗結(jié)果表明由于制劑中干擾因素較多，三七皂苷R1無法檢測，因此對人參皂苷Rg1、Rb1的含量進行了測定，具有合理性，且方法易于操作，陰性無干擾，結(jié)果準確，重現(xiàn)性良好，可作為評價三七傷藥系列品種的質(zhì)控標準。

1 儀器與試藥

Agilent1100 series高效液相色譜儀；試劑均為色譜純或分析純；對照品人參皂苷Rg1（110754-200421）、Rb1（110734-200726）,均購自中國藥品生物制品檢定所。三七傷藥片為上海上聯(lián)藥業(yè)提供，批號：100301。

2 色譜條件

Agilent HC C18分析柱(250×4.6mm,5 μm)，柱溫40℃，流速0.8 mL/min，檢測波長203 nm，以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1進行梯度洗脫。

表1 不同時間梯度洗脫的比較（%）

3 試驗方法

3.1 對照品溶液的制備

精密稱取在105℃干燥12 h的人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，搖勻，即得。

圖1 三七陰性對照溶液色譜圖

圖2 人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1對照品溶液色譜圖

圖3 三七供試品溶液色譜圖

3.2 供試品溶液的制備

取該品2 g，研細，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，放置過夜，超聲處理(功率350 W，頻率50 kHz) 40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，水浴蒸干，殘渣加水15 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，20 mL/次，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得，見圖1、圖2、圖3。

3.3 標準曲線制備

精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rg1對照品0.138 mg、人參皂苷Rb1對照品0.1212 mg的混合溶液，分別精密吸取2、5、8、11、14、17 μL注入液相色譜儀，依法測定，以對照品溶液的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。見表2、表3。

表2 人參皂苷Rg1標準曲線數(shù)據(jù)

表3 人參皂苷Rb1標準曲線數(shù)據(jù)

結(jié)果表明，人參皂苷Rg1在0.276～2.346 μg、人參皂苷Re在0.243 2～2.067 2 μg范圍內(nèi)，呈良好線性關(guān)系，符合外標法定量測定的要求。

3.4 精密度試驗

精密吸取供試品溶液5 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進樣6次，測定其色譜峰面積值。見表4、表5。

表4 人參皂苷Rg1精密度試驗結(jié)果

表5 人參皂苷Rb1精密度試驗結(jié)果

結(jié)果表明，所用儀器具良好的精密性。

3.5 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液5 μL，按正文色譜條件，于不同的時間進行測定，結(jié)果見表6、表7。

表6 人參皂苷Rg1穩(wěn)定性試驗結(jié)果

表7 人參皂苷Rb1穩(wěn)定性試驗結(jié)果

結(jié)果表明6 h內(nèi)供試品溶液中人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量基本穩(wěn)定。

3.6 重復(fù)性試驗

取同一批號樣品（廣西玉林制藥有限公司310052），依正文方法獨立操作，測定6次，結(jié)果見表8、表9。

結(jié)果表明本法具有良好的重復(fù)性。

表8 人參皂苷Rg1重復(fù)性試驗結(jié)果

表9 人參皂苷Rb1重復(fù)性試驗結(jié)果

3.7 回收率試驗

取已知含量的供試品：人參皂苷Rg13.789 4 mg/g、人參皂苷Rb12.857 8 mg/g各6份，每份約1.0 g，精密稱定，分別精密加入配成含對照品溶液人參皂苷Rg1（0.044 62 mg/mL）、人參皂苷Rb1（0.0350 64 mg/mL）的對照品溶液50 mL，依含量測定項下方法測定。計算回收率，結(jié)果見表10、表11。

如上表所示，人參皂苷Rg1的平均回收率為99.01%, RSD=2.52%；人參皂苷Rb1的平均回收率為98.38%, RSD=1.51%；證明方法具有一定的準確性，方法可行。

3.8 檢出限與定量限。

檢出限為信噪比的3倍高，精密量取人參皂苷Rg1（138.0 μg/mL）和人參皂苷Rb1（121.6 μg/mL）對照品溶液,照正文方法檢測，進樣量為0.5μL。檢出限分別為0.069 μg和0.061 μg。

定量限為信噪比的10倍高，精密量取人參皂苷Rg1（138.0 μg/mL）和人參皂苷Rb1（121.6 μg/mL）對照品溶液依照正文方法檢測，進樣量為1.5 μL，定量限分別為0.207 μg和0.183 μg。連續(xù)測定6次，平均值分別為84.71（RSD=1.27%）和52.67（RSD=2.32%）。符合定量分析的要求。

表10 人參皂苷Rg1回收率試驗結(jié)果

表11 人參皂苷Rb1回收率試驗結(jié)果

表12 三七傷藥片11批樣品人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1總量測定結(jié)果

表13 三七傷藥膠囊10批樣品人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1總量測定結(jié)果

表14 三七傷藥顆粒樣品人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1總量測定結(jié)果

3.9 樣品測定

依法測定三七傷藥片、膠囊和顆粒樣品。見表12、表13、表14。

4 討論

不同廠家色譜柱耐用性考察：取同一供試品溶液分別采用Agilent HC C18（4.6×250 mm,5 μm）的色譜柱、Diamonsil C18（250×4.6mm,5 μm）的色譜柱、Agilent Extent C18（4.6×250 mm,5 μm）的色譜柱按正文擬訂的方法測定。

實驗結(jié)果顯示，所選用的三種色譜柱均達到方法系統(tǒng)適用性的要求。但是Agilent HC C18(250×4.6 mm,5 μ)柱和Agilent Extent C18(250×4.6 mm,5 μ)柱可在60 min內(nèi)將人參皂苷Rg1、Rb1混合對照品溶液完全分離，Diamansil C18(4.6×250 mm，5 μm)柱超過100 min，說明其對色譜柱有一定的選擇性。故本法采用Agilent HC C18(250×4.6 mm,5 μ)柱。

[1]魏莉本.三七傷藥片的質(zhì)量分析與質(zhì)量標準探討[J].中國藥師,2011,14(7):1060-1061.

[2]賈春芝,高波.玉林三七傷藥膠囊活血止痛作用的臨床觀察[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2003,4(4):27.

[3]李家實.中藥鑒定學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1998: 1321.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:11.

Analysis of HPLC Method in Measuring the Ginsenoside Rg1 and Rb1 in the Sanqishangyao Tablets and Capsules and Granules

FAN Hong-jun,GU jie,ZHOU Li-li
Changchun Food and Drug Test Center,Changchun,Jilin Province,130021 China

ObjectiveTo establish the method of HPLC method in measuring the ginsenoside Rg1 and Rb1 in the sanqishangyao tablets and capsules and granules.MethodsChromatographic column Agilent HC C18(250×4.6 mm,5 μ),mobile phase:acetonitrile,water,gradient elution program,determine wavelength:203 mm.ResultsGinsenoside Rg1 was between 0.276 and 2.346 μg,and the liner correlation was good,r=0.999 9,The average recovery was 99.01%(n=6),RSD=2.5%. Ginseng saponin Rb1 in 0.243 2～2.067 2 μg,and the liner correlation was good,r=0.999 9,the average recycle rate 98.38%(n=6),RSD=1.5%.ConclusionThe method is simple and accurate,and the reproducibility is good,which can be used as the quality control method of evaluating the Sanqishangyao tablets and capsules and granules.

Sanqi;Ginsenoside Rg1;Ginsenoside Rb1;Measurement of constant;High-pressure liquid chromatography

R286.0

A

1672-5654（2017）05（a）-0077-05

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.13.077

2017-02-11）

樊紅軍（1966-），男，吉林長春人，本科，主任藥師，研究方向：檢驗機構(gòu)管理。