黃 艷 文建文 陳明生 何開家 劉布鳴

廣西中醫(yī)藥研究院 廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530022

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粗齒冷水花中Epihernandulcin的含量測(cè)定

黃 艷 文建文 陳明生 何開家 劉布鳴*

廣西中醫(yī)藥研究院 廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530022

目的：建立測(cè)定粗齒冷水花中Epihernandulcin含量的方法。方法：采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定粗齒冷水花中Epihernandulcin含量，采用ECOSIL ODS-3反相色譜柱(250×4.6mm, 5μm)，以乙腈-0.2%磷酸溶液(65:35)為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，檢測(cè)波長為240nm，流速為1mL/min，柱溫為室溫。結(jié)果：Epihernandulcin在0.114-0.683μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(r=0.9991)，平均回收率為99.50%，RSD=2.18%(n=9)。結(jié)論：該法簡單，可行，重現(xiàn)性好，適用于粗齒冷水花中Epihernandulcin的含量測(cè)定。

粗齒冷水花；Epihernandulcin；高效液相色譜法；含量測(cè)定

粗齒冷水花為蕁麻科(Urticaceae)冷水花屬(PileaLindl.)植物粗齒冷水花PileasinofasciataC.J.Chen的全草，又名紫綠草、青藥、水麻葉、水甘草、大茴香、宮麻，分布于我國廣西、貴州、四川和云南等省，具有清熱解毒，活血祛風(fēng)，理氣止痛，主治高熱，鵝口瘡，喉蛾腫痛，跌打損傷，骨折，風(fēng)濕痹痛[1]。目前對(duì)粗齒冷水花的成分報(bào)道較少，牛延慧等[2]對(duì)冷水花屬植物進(jìn)行化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)研究。而本課題組對(duì)粗齒冷水花全草的乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，其主要含有機(jī)酸類、生物堿類、黃酮類、倍半萜類、三萜類等化合物[3]；另外采用GC-MS法對(duì)粗齒冷水花的脂溶性成分進(jìn)行了成分分析[4]，并對(duì)藥材進(jìn)行了薄層鑒定研究[5]。前期從粗齒冷水花分離得到epihernandulcin，而且含量較高，本文采用高效液相色譜(HPLC)對(duì)粗齒冷水花中epihernandulcin進(jìn)行含量測(cè)定研究，為粗齒冷水花的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 HH-S恒溫水浴鍋，1525型液相色譜儀(美國Waters公司)，2489型紫外檢測(cè)儀(美國Waters公司)，2707型自動(dòng)進(jìn)樣儀(美國Waters公司)，Breeze系統(tǒng)色譜工作站(美國Waters公司)，XS205分析天平(梅特勒-托利多)。

1.2 材料 epihernandulcin對(duì)照品(自制)純度>98%；甲醇(賽默飛世爾科技有限公司；色譜純)、乙腈(賽默飛世爾科技有限公司有限公司；色譜純)、磷酸(廣州新建精細(xì)化工廠，分析純)，其他試劑均為分析純。粗齒冷水花(PileasinofasciataC.J.Chen)采集于廣西百色市，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院何開家主任藥師鑒定為粗齒冷水花PileasinofasciataC.J.Chen。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性考察 色譜柱：ECOSIL ODS-3(250×4.6mm, 5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸溶液等度洗脫(65:35)；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長：240nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL。供試品溶液中Epihernandulcin的理論塔板數(shù)是12635，分離度大于1.5，完全分離。如圖1、圖2所示。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液的制備 精密稱取epihernandulcin 對(duì)照品11.38mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得對(duì)照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取粗齒冷水花粉末1g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，稱定重量，加熱提取2.5h，放冷至室溫，補(bǔ)足重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，再用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分別置于10mL容量瓶中，加入流動(dòng)相稀釋定容至刻度，搖勻，配成系列濃度的對(duì)照品溶液，按“2.1項(xiàng)下的色譜條件”下進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。回歸方程為：Y=1 211 482.847 7X-388.501 0(n=6)，r=0.999 7，表明對(duì)照品進(jìn)樣量在0.114～0.683μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。

2.4 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，精密吸取10μL，按“2.1色譜條件”連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果顯示RSD%小于2，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液按“2.1色譜條件”分別在0、1、2、4、6、8、10、12小時(shí)進(jìn)行結(jié)果RSD值為0.75%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性考察 取同一批次藥材適量，按照“2.2溶液的制備”方法制備6份供試品溶液，按“2.1色譜條件”進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD值為2.18%，表明重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率考察 取已知Epihernandulcin含量的粗齒冷水花粉末0.5g，共9份，精密稱定，置于1～9號(hào)錐形瓶中，1至3號(hào)精密加入0.1mg/mL的Epihernandulcin對(duì)照品溶液0.7 mL，4～6號(hào)精密加入0.1mg/mL的Epihernandulcin對(duì)照品溶液0.9mL，7至9號(hào)精密加入0.1mg/mL的Epihernandulcin對(duì)照品溶液1.1mL，按照“2.2溶液的制備”方法制備，按“2.1色譜條件”實(shí)驗(yàn)。結(jié)果Epihennandulcim的平均回收率99.50%，RSD值為1.96%。見表1。

表1 Epihernandulcin加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定 精密稱取不同批次粗齒冷水花末各1.0g，按“2.2溶液的制備”方法制備，按“2.1色譜條件”測(cè)定，測(cè)定Epihernandulcin含量，結(jié)果見表2。

表2 不同產(chǎn)地粗齒冷水花中Epihernandulcin含量(n=2)

3 討論

3.1 提取方法考察 試驗(yàn)過程中考察了加熱回流和超聲處理兩種方式，結(jié)果顯示加熱回流樣品中Epihernandulcin所測(cè)定的含量要高，故采用加熱回流提取方式。

3.2 提取溶劑的考察 試驗(yàn)過程中分別考察了甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇為提取溶劑，結(jié)果顯示甲醇提取含量較多，故采用甲醇作為提取溶劑。

3.3 提取時(shí)間的考察 試驗(yàn)過程中分別考察了加熱回流提取時(shí)間為30、60、90、120、150、180min，結(jié)果顯示150min基本可以將供試品中的Epihernandulcin提取完全，故選擇150min作為提取時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)還比較了采集百色不同產(chǎn)地的3批次粗齒冷水花中Epihernandulcin含量，其中Epihernandulcin(0.179 2mg/g)的含量以百色凌云縣產(chǎn)地采集得到的藥材為最高。

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海:上海科學(xué)出版社, 1999:577.

[2]牛延慧, 梁志遠(yuǎn), 甘秀海.貴州三種冷水花化學(xué)成分預(yù)試研究[J].貴州師范學(xué)院學(xué)報(bào), 2010, 26(3):26-28.

[3] 黃艷, 武旭, 文建文, 等.粗齒冷水花的化學(xué)成分研究[J].中草藥, 2016, 47(18)：3159-3163.

[4] 文建文, 黃艷, 何開家, 等.GC-MS 法分析粗齒冷水花石油醚部位的脂溶性成分[J].安徽農(nóng)業(yè)科技, 2010, 41(36):14156, 14168.

[5]武旭, 柴玲, 黃艷, 等.粗齒冷水花藥材的薄層鑒別研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐, 2016, 30(1):17-20.

The Determination of Epihernandulcin inPileasinofasciataC.J.Chen

HUANG Yan WEN Jianwen CHEN Mingsheng HE Kaijia LIU Buming*

Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences&Guangxi Key Laboratory of Tradtitonal Chinese Medicine Quality Stardands, Nanning 530022, China

Objective To develop a determination method of epihernandulcin inPileasinofasciataC.J.Chen.Methods The determination was performed on ECOSIL ODS-3(250×4.6mm, 5μm) column with acetonitrile-0.2% phosphoric acid(65:35) as mobile phase with flow rate 1.0 mL/min at detection wavelength of 240 nm.And the column temperature was set at room temperature.Results The average recovery rate(n=9) of epihernandulcin was 99.50% andRSDwas 2.18%(n=9), respectively.Conclusion The method is simple, rapid, accurate and reliable.And it is suitable for the quality control of epihernandulcin inPileasinofasciataC.J.Chen.

PileasinofasciataC.J.Chen；Epihernandulcin；HPLC；Determination

壯藥創(chuàng)新的共性關(guān)鍵技術(shù)研究與示范(桂科重1355001-4、14124002-11)；廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014GXNSFBA118142)；廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自主研究課題(桂中重自201408)；廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(14-045-12-K3)。

黃艷(1987-)，女，漢族，碩士，副研究員，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)成分與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail:hy2002-2006@163.com

劉布鳴，男，研究員，研究方向?yàn)橹兴帯⑻烊凰幓瘜W(xué)成分與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 E-mail:liubuming@aliyun.com

R284.1

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1007-8517(2017)10-0022-03

2017-03-24 編輯：陶希睿)