孫良廣 郭振旺

廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所，廣西 梧州 543001

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HPLC-CAD法同時測定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖和氯及鈉的含量

孫良廣 郭振旺*

廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所，廣西 梧州 543001

目的：建立高效液相色譜-電噴霧檢測器(HPLC-CAD)法同時測定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯和鈉的含量。方法：采用Thermo U3000-Corona CAD測定，用超純水溶解葡萄糖氯化鈉注射液，過濾后注入液相色譜儀測定。色譜柱為Thermo Mixed-Mode Hilic-1柱(3μm 2.1×150mm)；柱溫：40℃；流動相：50mmol/L醋酸銨和乙腈梯度洗脫；流速：0.3mL/min；進(jìn)樣體積：10μL。結(jié)果：葡萄糖的線性范圍為0.05～1.00mg/mL(r=0.9993)，氯和鈉的線性范圍為0.09～1.80mg/mL(r=0.9999)。方法回收率均>99.8%，精密度RSD均<2.0%，超純水中ClO-、NO3-對葡萄糖氯化鈉的含量測定幾乎沒有干擾。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確，快速、簡便，可用于葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯和鈉的測定及其質(zhì)量控制，對其類似化合物的測定具有參考價值。

葡萄糖氯化鈉注射液；高效液相色譜；電噴霧檢測器

葡萄糖氯化鈉注射液(Glucose and sodium chloride injection)是常用的補(bǔ)充熱能和體液的復(fù)方制劑，內(nèi)含葡萄糖與氯化鈉，用于各種原因引起的進(jìn)食不足或大量體液丟失[1]。2015年版《中國藥典》二部中葡萄糖氯化鈉注射液的含量測定方法繁瑣耗時，分別用旋光度法測定葡萄糖含量，硝酸銀滴定法測定氯化鈉中氯含量。目前，葡萄糖的檢測方法中高效液相色譜法準(zhǔn)確、快速，得到廣泛采用[2]。常采用示差折光率檢測器(RID)[3-4]和蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)檢測器[5]。為了縮短測定時間且同時對葡萄糖和氯化鈉含量進(jìn)行分析，筆者采用HPLC-CAD法[6-7]同時測定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯離子和鈉離子的含量[8-10]。該方法更加快速、簡便、準(zhǔn)確地對葡萄糖氯化鈉注射液進(jìn)行了定量分析。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Thermo-U3000高效液相色譜儀(美國熱電公司，附帶Corona Ultra電噴霧檢測器)，色譜柱為Thermo Mixed-Mode Hilic(2.1×150mm 1.3μm)。

1.2 材料 醋酸銨(分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；葡萄糖對照品(批號：E1407051， Aladdin，含量≥99.5%)；氯化鈉對照品(批號：GBW(E)060024，中國計量科學(xué)研究院，含量=99.99%)；250mL葡萄糖氯化鈉注射液(批號：E131102K2，湖南科倫制藥有限公司；批號：131228804，安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司；批號：H13121609，廣西裕源藥業(yè)有限公司)，乙腈(色譜純，美國Sigma-aldrich公司)，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Thermo Mixed-Mode Hilic(2.1mm×150mm 1.3μm)；流速：0.3mL/min，柱溫40°C，進(jìn)樣量10μL，流動相為A(50mmol/L醋酸銨)：B(乙腈)。詳見表1。

表1 梯度洗脫

2.2 供試品溶液的制備 取“1.2”項下葡萄糖氯化鈉注射液，精密移取各1mL分別置于1000mL容量瓶中，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，濾過，濾液過0.45μm濾膜，即得。

2.3 對照品溶液的制備 參照2015年版《中國藥典》二部中葡萄糖氯化鈉注射液規(guī)格(7)項下[1]配制，取葡萄糖12.5g和氯化鈉2.25g，精密稱定，置于250mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。作為對照品貯備液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密移取對照品貯備液1mL置于10mL量瓶中，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，再精密移取各1mL分別置于100、50、25、10、5mL量瓶中，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。制成下表所示線性溶液(見表2)。葡萄糖、Cl-、Na+分離度良好，且不受溶劑超純水中雜質(zhì)ClO-等干擾，色譜圖見圖1。精密量取上述“2.2”和“2.3”項下供試品溶液和對照品溶液，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。葡萄糖在0.5～1.0mg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程Y=125.8386X+ 1.2101(r= 0.9993)；氯、鈉在0.09～1.80mg /mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程分別為Y= 33.6836X+ 0.6429(r= 0.9999)、Y= 17.3087X+ 0.0395(r= 0.9999)。

表2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的樣品濃度 (n=5)

2.5 精密度試驗 精密精取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，分別計算葡萄糖、Cl-和Na+的RSD，分別為0.25%、0.11%、0.14%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗 取樣品6份，按“2.2”供試品方法制備，測定峰面積。分別計算6份樣品中葡萄糖、Cl-和Na+的平均含量，分別為12.51g/250mL、2.25g/250mL、2.25g/250mL，RSD分別為1.50%、0.95%和1.58%。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取樣品，在0、4、8、12、16、20、24h內(nèi)進(jìn)樣，測定峰面積，分別計算樣品中不同時間點的葡萄糖、Cl-和Na+含量，RSD為0.93%、0.85%、1.04%。結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗 取已知含量的樣品6份，每份約1mL，精密稱定。分別精密加入“2.3”項下對照品儲備液1mL，按“2.2”供試品方法制備，測定，結(jié)果見表3。葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、Cl-和Na+的平均回收率分別為100.4%、99.8%、100.1%，RSD分別為1.11%、1.02%、1.15%。見表3至表5。

表3 葡萄糖的加樣回收實驗 (n=6)

表4 葡萄糖的加樣回收實驗 (n=6)

表5 葡萄糖的加樣回收實驗 (n=6)

3 討論

3.1 定量方法的選擇 由于葡萄糖和氯化鈉沒有紫外吸收官能團(tuán)，不能通過常規(guī)的高效液相色譜-紫外檢測法(HPLC-UV)同時進(jìn)行檢測。本文建立了一種準(zhǔn)確、快速、簡便的高效液相色譜-電噴霧檢測器法同時測定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯和鈉的含量,可應(yīng)用于其質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究，對其類似化合物的測定也具有參考價值，也可作為醫(yī)院常用的葡萄糖氯化鈉注射液含量檢測的一種有效手段[12-13]。

3.2 色譜條件的選擇 由于Thermo Mixed-Mode Hilic-1 3μm 2.1×150mm色譜柱具有混合模式固定相結(jié)合反相(RP)和親水性交互(HILIC)兩種屬性。高效的硅膠基質(zhì)的混合模式固定相由疏水性烷基鏈組成，末端是二醇基團(tuán)。疏水性基團(tuán)提供反相保留，末端的二醇基團(tuán)則促進(jìn)親水相互作用。其獨特組合提供可調(diào)節(jié)的選擇性，卓越的分離度和峰的不對稱性，適用于各種極性和非極性分子，使同時測定氯和鈉兩種陰陽離子成為可能。

3.3 CAD檢測器的優(yōu)勢 電噴霧檢測器(CAD)是近年發(fā)展起來的一種新型通用檢測器，在靈敏度、重現(xiàn)性和線性方面均具有優(yōu)異的性能，且操作簡便?；谄洫毺氐臋z測原理，它的檢測范圍不受制于化合物的分子結(jié)構(gòu)，可應(yīng)用于任何非揮發(fā)或半揮發(fā)化合物[11,12]，在不具有示差折光檢測器和離子色譜的情況下，能完成對葡萄糖和氯化鈉2個陰陽離子的檢測[13]。

3.4 實際應(yīng)用性 2015年版《中國藥典》二部采用的含量測定方法繁瑣耗時，分別用旋光度法測定葡萄糖含量，硝酸銀滴定法測定氯化鈉中氯含量[1]。研究改用HPLC-CAD法進(jìn)行測定，樣品用超純水直接溶解上機(jī)，大大節(jié)省了前處理時間，同時檢測三個成分含量，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性和耐用性。且葡萄糖、氯和鈉的分離效果好，此方法抗干擾能力強(qiáng)，適宜推廣應(yīng)用。

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Determination of Glucose,Cl-and Na+in Glucose and Sodium Chloride Injection by High Performance Liquid Chromatography with Charge Aerosol Detection(HPLC-CAD)

SUN Liangguang GUO Zhenwang*

Guangxi Wuzhou Institute for Food and Drug Control, Wuzhou 543001，China

Objective To establish a high performance liquid chromatographic with charge aerosol detection(HPLC-CAD) method for the determination of Glucose,Cl-and Na+in Glucose and sodium chloride injection.Methods An Thermo U-3000 HPLC system with a charged aerosol detector was used.The Glucose and sodium chloride injection samples were dissolved by water and injected into a Thermo Mixed-Mode Hilic-1(3μm 2.1×150mm)column at 40℃.The mobile phase was composed of 50 mmol·L-1ammonium acetate-acetonitrile with a flow rate of 0.3mL·min-1.The injection volumn was 10μL.Results The methodology recovery was higher than 99.8%.TheRSDwere less than 2.0%.The calibration curve was linear at 0.05～1.00mg·mL-1, with coefficient of determination over 0.9999.Glucose and sodium chloride injection was detected with little interference from the excipient blend of water.Conclusion The method is accurate,rapid and convenient for releage and stability test of Glucose,Cl-and Na+in Glucose and sodium chloride injection and may be used as reference for similar compounds.

Glucose and Sodium Chloride Injection; HPLC;CAD

孫良廣(1985-)，男，漢族，主管中藥師，研究方向為食品藥品檢驗。E-mail:sunliangguang@163.com

郭振旺(1984-)，男，漢族，碩士,藥師，研究方向為食品藥品檢驗。E-mail:gzhw2005214@163.com

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1007-8517(2017)10-0018-03

2017-03-21 編輯：陶希睿)