喬伊娜 朱西杰 安婷婷 張 薔

(寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院2015級(jí)碩士研究生，寧夏 銀川 750004)

實(shí) 驗(yàn) 研 究

復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑對(duì)慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠組織中過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ、細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Kappa Bp65信號(hào)通路的調(diào)控對(duì)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶蛋白表達(dá)的影響的實(shí)驗(yàn)研究※

喬伊娜 朱西杰△安婷婷1張 薔1

(寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院2015級(jí)碩士研究生，寧夏 銀川 750004)

目的 探討復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑對(duì)慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎(CUC)模型大鼠組織中過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)γ、細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Kappa B(NF-κB)p65信號(hào)通路的調(diào)控對(duì)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)的影響，揭示其治療CUC的部分作用機(jī)制。方法 將84只SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組，每組14只。除空白組灌腸藥物用0.9%氯化鈉注射液0.85 mL代替，其余5組大鼠均用聚丙烯管插入大鼠肛門上段8 cm結(jié)腸內(nèi)，注入5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)與50%乙醇混合液灌腸。造模成功后，空白組和模型組大鼠予0.9%氯化鈉注射液10 mL/kg灌胃，柳氮磺吡啶片組予柳氮磺吡啶懸濁液，濃度按0.3 g/kg。復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組大鼠分別予復(fù)方蜥蜴散80目、100目、80目+100目等量混合糊劑混懸液。第15 d后麻醉全部大鼠，取結(jié)腸組織病變處包埋，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)PPARγ、NF-κBp65、iNOS在結(jié)腸組織蛋白的原位表達(dá)。結(jié)果 PPARγ、NF-KBp65、iNOS蛋白在腸黏膜炎癥組織表達(dá)均為陽(yáng)性表達(dá)，模型組陽(yáng)性表達(dá)OD值與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散各治療組陽(yáng)性表達(dá)OD值與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方蜥蜴散各治療組陽(yáng)性表達(dá)OD值與柳氮磺吡啶片組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組陽(yáng)性表達(dá)OD值與復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方蜥蜴散80目組陽(yáng)性表達(dá)OD值與復(fù)方蜥蜴散100目組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。iNOS與NF-κBp65蛋白表達(dá)正相關(guān)，NF-κBp65與PPARγ蛋白表達(dá)負(fù)相關(guān)。結(jié)論 復(fù)方蜥蜴散各治療組、柳氮磺吡啶腸溶片組治療CUC均有效，其中以復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組療效最佳。提示了復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑對(duì)腸黏膜損傷可能具有保護(hù)修復(fù)作用，其機(jī)制可能是激活了PPARγ配體抑制調(diào)控PPARγ、NF-κBp65信號(hào)通路中iNOS蛋白的表達(dá)，進(jìn)而影響CUC炎癥的發(fā)生發(fā)展，PPARγ、NF-κBp65、iNOS可能是治療CUC的靶位。

結(jié)腸炎，潰瘍性；中藥療法；慢性病；投藥和劑量；PPARγ；轉(zhuǎn)錄因子RelA；動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)

慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎(chronic nonspecific ulcerative colitis，CUC)是一種以非特異性炎癥病變?yōu)橹?，病變部位主要限于直腸端、結(jié)腸黏膜及黏膜下層，呈連續(xù)性非節(jié)段性分布，伴有腸外多器官損害的疾病[1-2]。CUC病程漫長(zhǎng)，病情常反復(fù)發(fā)作，其預(yù)后與結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生高度相關(guān)[3]，屬胃腸病中的難治病之一。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)γ是調(diào)控眾多基因表達(dá)所必需的核受體，有調(diào)節(jié)炎癥和細(xì)胞增殖的作用，近幾年P(guān)PARγ、細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Kappa B(NF-κB)通路對(duì)CUC作用機(jī)制的研究成為了新熱點(diǎn)。我們通過(guò)大量的臨床應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)復(fù)方蜥蜴散對(duì)胃腸道潰瘍、胃腸道黏膜的修復(fù)具有較好的療效[4]，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑對(duì)CUC模型大鼠進(jìn)行治療，從實(shí)驗(yàn)角度分析復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑通過(guò)對(duì)PPARγ、NF-κBp65信號(hào)通路影響抑制炎癥因子誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá)治療CUC的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 無(wú)特定病原體級(jí)(SPF級(jí))SD大鼠84只，雄性，4～6周齡，體質(zhì)量(180±20)g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(寧)2015-0001，自由飲水，室溫(20±2) ℃，濕度55%～60%，自然光照。相同條件下分籠飼養(yǎng)，喂飼大鼠生長(zhǎng)維持飼料，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)藥品及試劑、儀器 2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)由成都化工股份有限公司提供；柳氮磺吡啶腸溶片(上海信誼嘉華藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H31020557)；復(fù)方蜥蜴散藥物組成：寧夏密點(diǎn)麻蜥、半枝蓮、三七、鹿角霜、黃芪、延胡索等，上藥按照一定比例研粉，由寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院門診部提供；兔抗大鼠PPARγ多克隆抗體、兔抗大鼠多克隆抗體NF-κBp65及兔抗大鼠多克隆抗體iNOS均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修復(fù)液(pH8.0)、磷酸鹽緩沖液(PBS)、檸檬酸鹽緩沖液，PV-6001通用型二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒、ZLI-9018濃縮型二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；石蠟切片機(jī)購(gòu)自無(wú)錫市泰諾精密量?jī)x有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱購(gòu)自上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠；圖像采集系統(tǒng)顯微鏡(BH2-RFCA，日本OLYMPUS公司)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物選擇及分組 將84只SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組，每組14只。

1.2.2 模型制備 按照文獻(xiàn)[5]的方法，應(yīng)用2,4,6-TNBS 100 mg/kg與50%乙醇0.25 mL混合液灌腸法制備CUC模型。除空白組灌腸藥物用0.9%氯化鈉注射液0.85 mL代替，其余5組大鼠用聚丙烯管(外徑2 mm，用石蠟油潤(rùn)滑)，插入大鼠肛門上段8 cm結(jié)腸內(nèi)，注入5% 2,4,6-TNBS與50%乙醇混合液灌腸。造模3 d后，從各組隨機(jī)抽取1只大鼠，殺檢，證明符合CUC的病理診斷。

1.2.3 給藥方法 造模成功后，空白組和模型組大鼠予0.9%氯化鈉注射液10 mL/kg灌胃，柳氮磺吡啶片組予柳氮磺吡啶懸濁液，濃度按0.3 g/kg，連續(xù)給藥14 d，每日1次。復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組大鼠分別予復(fù)方蜥蜴散80目、100目、80目+100目等量混合糊劑混懸液，每只按濃度為0.15 g/mL，每日劑量10 mL/kg(相當(dāng)于成人1 d用量)灌胃，均連續(xù)用藥14 d，所有大鼠15 d末處死。

1.3 觀察指標(biāo)及方法 觀察各組大鼠精神狀態(tài)、食欲、毛色、大便、體質(zhì)量、活動(dòng)、肛周皮毛被污染及存活情況；實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至14 d末，各組大鼠禁食不禁水24 h后，將大鼠固定在鼠解剖臺(tái)上，10%水合氯醛溶液(0.3 mL/100 g體質(zhì)量腹腔注射)麻醉，將大鼠剖腹后，用剪刀剪開(kāi)腸系膜，將直腸至盲腸之間的全部結(jié)腸分離，沿縱軸剖開(kāi)腸管，用近0 ℃的0.9%氯化鈉注射液把腸管內(nèi)殘留物沖去，將黏膜表面沖洗干凈，選取腸黏膜病變區(qū)，從中取3條1 cm×5 mm×5 mm橫切條狀組織，4%多聚甲醛溶液固定24 h后，梯度脫水，石蠟包埋備用，常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色做病理組織學(xué)檢驗(yàn)，鄰近切片做免疫組化染色。

1.4 PPARγ、NF-κBp65、iNOS免疫組化染色步驟 PBS代替一抗作陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，PPARγ陽(yáng)性判斷以核著色、腺體出現(xiàn)黃褐色顆粒為陽(yáng)性染色，NF-κBp65陽(yáng)性判斷以細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核都含有棕色顆粒，但以細(xì)胞核為主，iNOS陽(yáng)性判斷以鏡下細(xì)胞膜或(和)細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色，結(jié)果由2名病理醫(yī)師判定，結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)是：基本未著色、染色與背景相似者為陰性(-)，著色淺、略高于背景者為弱陽(yáng)性(+)，著色明顯高于背景者則為強(qiáng)陽(yáng)性(>++)。采用圖像采集系統(tǒng)顯微鏡中的Image-Pro Plus6.0圖像分析系統(tǒng)，每張切片取陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)最強(qiáng)染色部位，選擇周邊4個(gè)視野和中間1個(gè)視野，測(cè)定陽(yáng)性區(qū)域圖像的平均光密度值(OD值=IOD/Area)。NF-κBp65抗體稀釋濃度為1∶500，PPARγ、iNOS抗體稀釋濃度為1∶100。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況 模型組、柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組各死亡2只，復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組死亡1只。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，空白組大鼠兩眼有神，被毛色白濃密有光澤，活動(dòng)靈敏，進(jìn)食、進(jìn)水量正常，體質(zhì)量增加，糞便呈顆粒狀；模型組、柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組大鼠均有不同程度的病態(tài)表現(xiàn)，如精神狀態(tài)不佳，形態(tài)消瘦，毛色泛黃無(wú)光澤，喜蜷縮，進(jìn)食、進(jìn)水量減少，腹部稍膨隆，稀便伴黏液膿血，肛周有污染等。治療后大鼠的一般情況有好轉(zhuǎn)趨勢(shì)。

2.2 病理組織學(xué)觀察 空白組大鼠結(jié)腸黏膜腺體結(jié)構(gòu)正常，腺體緊密排列整齊；模型組大鼠結(jié)腸黏膜下層及黏膜層可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤(rùn)，隱窩結(jié)構(gòu)紊亂，杯狀細(xì)胞減少；柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組與模型組比較，病理結(jié)果均有不同程度改善，柳氮磺吡啶片組大鼠黏膜下層可見(jiàn)散在嗜酸性粒細(xì)胞，腺體排列整齊，復(fù)方蜥蜴散80目組大鼠結(jié)腸黏膜層可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，復(fù)方蜥蜴散100目組黏膜下層可見(jiàn)散在炎性細(xì)胞，并伴有肉芽組織增生，復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組僅在黏膜層有少許散在炎性細(xì)胞，腺體排列比較整齊(見(jiàn)圖1)。

圖1 各組大鼠結(jié)腸病理組織學(xué)觀察(HE，×100)

2.3 各組大鼠結(jié)腸PPARγ、NF-κBp65、iNOS蛋白表達(dá)的OD值 見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)，與空白組比較，模型組、柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組陽(yáng)性表達(dá)OD值明顯增高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組陽(yáng)性表達(dá)OD值明顯降低，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與柳氮磺吡啶片組比較，復(fù)方蜥蜴散80目組及復(fù)方蜥蜴散100目組陽(yáng)性表達(dá)OD值升高，復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組陽(yáng)性表達(dá)OD值降低，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組陽(yáng)性表達(dá)OD值較復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組降低，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，復(fù)方蜥蜴散80目組與復(fù)方蜥蜴散100目組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明復(fù)方蜥蜴散80目+100目較單獨(dú)應(yīng)用80目與100目治療CUC控制炎癥因子、維持腸道屏障的作用更好，而復(fù)方蜥蜴散80目與100目應(yīng)用于CUC的治療，效果無(wú)明顯差異。

與空白組比較，模型組、柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組陽(yáng)性表達(dá)OD值均降低，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組OD值均明顯升高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組陽(yáng)性表達(dá)OD值明顯低于復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組陽(yáng)性表達(dá)OD值較柳氮磺吡啶片組升高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方蜥蜴散80目組與復(fù)方蜥蜴散100目組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明復(fù)方蜥蜴散激活了PPARγ蛋白參與免疫應(yīng)答調(diào)控，抑制了CUC的發(fā)展，尤其以80目+100目等量混合效果最突出。

組 別nPPARγNF-κBp65iNOS空白組140．44±0．0180．32±0．0230．38±0．021模型組120．25±0．023?0．47±0．020?0．53±0．031?柳氮磺吡啶片組120．37±0．018?△0．40±0．028?△0．44±0．023?△復(fù)方蜥蜴散80目組120．32±0．013?△#○0．43±0．017?△#○0．48±0．227?△#○復(fù)方蜥蜴散100目組120．32±0．017?△#○0．43±0．022?△#○0．47±0．025?△#○復(fù)方蜥蜴散80目+10目組130．41±0．014?△#0．37±0．027?△#0．41±0．216?△#

與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與柳氮磺吡啶片組比較，#P<0.05；與復(fù)方蜥蜴散80+10目組比較，○P<0.05

2.4 各組大鼠結(jié)腸iNOS、NF-κBp65、PPARγ蛋白原位表達(dá)情況 iNOS、NF-κBp65鏡下觀察均為細(xì)胞核或(和)細(xì)胞漿染色，顯棕黃色，各組均有表達(dá)，空白組可見(jiàn)少量陽(yáng)性染色，模型組胞漿可見(jiàn)大量表達(dá)，柳氮磺吡啶片組、復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組表達(dá)均有不同程度降低，以柳氮磺吡啶片組及復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組為最佳(見(jiàn)圖2、3)。PPARγ主要表達(dá)于大鼠結(jié)腸組織中的腸道黏膜及黏膜下層，鏡下觀察胞質(zhì)染色呈黃褐色顆粒即為陽(yáng)性表達(dá)，結(jié)果顯示柳氮磺吡啶片組和復(fù)方蜥蜴散80目組、復(fù)方蜥蜴散100目組、復(fù)方蜥蜴散80目+100目等量混合組大鼠腸黏膜少量細(xì)胞可見(jiàn)黃褐色染色，與模型組比較染色較淺(見(jiàn)圖4)。

圖2 各組大鼠結(jié)腸iNOS蛋白原位表達(dá)情況(免疫組化染色，×100)

圖3 各組大鼠結(jié)腸NF-κBp65蛋白原位表達(dá)情況(免疫組化染色，×100)

圖4 各組大鼠結(jié)腸PPARγ蛋白原位表達(dá)情況(免疫組化染色，×100)

2.5 PPARγ、NF-κBp65、iNOS蛋白表達(dá)的相關(guān)性 CUC大鼠腸組織PPARγ蛋白與iNOS蛋白表達(dá)負(fù)相關(guān)(r=0.869,P<0.01)，iNOS蛋白與NF-κBp65陽(yáng)性細(xì)胞蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.801，P<0.01),NF-κBp65與PPARγ蛋白表達(dá)負(fù)相關(guān)(r=0.869，P<0.01)。

3 討 論

CUC的病因與發(fā)病機(jī)制目前尚無(wú)定論，認(rèn)為腸黏膜免疫反應(yīng)異?？赡苁侵匾h(huán)節(jié)，多種細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)相互作用而形成復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，使腸道發(fā)生炎癥反應(yīng)，損傷腸黏膜化學(xué)屏障[6]。PPAR是一類配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子超家族成員，包括PPARα、PPARβ/δ和PPARγ3種表型[7]，PPARγ表達(dá)受損和CUC發(fā)病有關(guān)，在CUC發(fā)病過(guò)程中有重要作用[8]，PPARγ的配體最初認(rèn)為其主要功能是促進(jìn)調(diào)節(jié)脂肪代謝，最近的研究表明它可明顯減輕CUC動(dòng)物模型的炎癥[9]。我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，PPARγ蛋白在空白組中表達(dá)較強(qiáng)，在模型組中表達(dá)降低，與以往文獻(xiàn)報(bào)道一致，復(fù)方蜥蜴散治療組PPARγ蛋白表達(dá)含量明顯較模型組升高。NF-κB最常見(jiàn)的p65異二聚體具有顯著的促炎活性，研究表明PPARγ和NF-κB p65之間存在信號(hào)通路，PPAR-γ配體激活時(shí)可抑制NF-κB的活化，從而降低炎癥損傷[10]。復(fù)方蜥蜴散作用下小鼠結(jié)腸黏膜組織中NF-κBp65和PPARγ蛋白表達(dá)之間具有負(fù)相關(guān)，提示二者在CUC炎癥發(fā)生中可能共同發(fā)揮作用。目前對(duì)一氧化氮(NO)與CUC關(guān)系的研究越來(lái)越多，NO是一種新型免疫分子和炎癥介質(zhì)，具有活躍的生化性質(zhì)，在炎癥性腸病中主要由iNOS催化產(chǎn)生[11-12]，iNOS催化精氨酸產(chǎn)生NO，過(guò)量的NO還能使血管擴(kuò)張，通透性增加，刺激腸上皮細(xì)胞分泌而導(dǎo)致腸黏膜充血水腫，可能與CUC腹瀉、黏液便、血便等癥狀出現(xiàn)有關(guān)。關(guān)于NO釋放調(diào)控研究發(fā)現(xiàn)可能與NF-κB活化相關(guān)，在多種因素刺激下,IκB(NF-κB的抑制蛋白)磷酸化降解，NF-κB得以釋放，其移入核內(nèi)與靶基因序列上特定位點(diǎn)結(jié)合，啟動(dòng)或調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄；誘導(dǎo)多種促炎因子包括iNOS的過(guò)量表達(dá)[13]。各種研究報(bào)道已證實(shí)iNOS上存在NF-κB結(jié)合位點(diǎn)[14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示復(fù)方蜥蜴散治療作用下大鼠腸組織中NF-κBp65和iNOS的陽(yáng)性表達(dá)較模型組降低，且NF-κBp65與iNOS蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)研究顯示，復(fù)方蜥蜴散組與模型組比較，結(jié)腸組織中PPARγ表達(dá)明顯高于模型組，NF-κBp65、iNOS蛋白表達(dá)降低，說(shuō)明復(fù)方蜥蜴散具有治療CUC的效果，同時(shí)PPARγ和NF-κBp65通路可能參與復(fù)方蜥蜴散對(duì)CUC的治療機(jī)制。我們推測(cè)復(fù)方蜥蜴散可能通過(guò)對(duì)于PPARγ和NF-κBp65炎癥信號(hào)通路的抑制，影響iNOS蛋白表達(dá)，進(jìn)而抑制NO分泌，而影響了CUC炎癥的產(chǎn)生與發(fā)展。NF-κBp65、PPARγ及iNOS可能作為CUC治療的靶位，為其治療提供了潛在的意義。

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(本文編輯：習(xí) 沙)

Experimental study of different particles combination of Compound Lizards Powder on the expression of iNOS protein through effect PPAR γ and NF-κB p65 signaling pathway in CUC model rats

QIAOYina*,ZHUXijie,ANTingting,etal.

*2015GradeMasterofNingxiaMedicalUniversityofTraditionalChineseMedicineCollege,Ningxia,Yinchuan750004

Objective To investigate the effects of different particles combination of compound lizards power on the expression of induced nitric oxide synthase (iNOS) protein through regulate and control peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) γ and nuclear transcription factor Kappa B (NF-κB) p65 signaling pathway in the organization of chronic nonspecific ulcerative colitis (CUC) model rats, and reveals its part mechanism on the treatment of CUC. Methods 80 SD rats were randomly divided into blank group, model group, sulfasalazine group, compound lizard power 80 mesh group, 100 mesh group and 80+100 mesh equivalent mixed group, 14 rats in each group. In addition to blank group were treated by 0.85 ml of 0.9% sodium chloride (Nacl) injection instead of enema drugs, the other five groups were treated by mixture enema of 5% 2,4,6- trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) and 50% ethanol with polypropylene tube inserted into colon of 8 cm upper anus. After the models established successfully, the blank group and model group were given 0.9% Nacl injection by gavage in 10 ml/kg, and the sulfasalazine group was given suspensions of sulfasalazine by 0.3 g/kg. Compound lizard power 80 mesh group, compound lizard power 100 mesh group and compound lizard power 80+100 mesh equivalent mixed group were treated by equivalent mixed paste suspension of compound lizard powder of 80 mesh, 100 mesh and 80 + 100 mesh respectively. All rats were anesthetized after 15 days, the lesion site of colon tissue were taken for embedding, and the protein expression in situ of PPAR γ, NF-κB p65 and iNOS were detected by immunohistochemical method in colonic tissue. Results The protein expression of PPARγ, NF-κB p65 and iNOS in intestinal mucosal inflammatory tissue were positive, and there were statistical differences on OD value of positive expression between model group and blank group (P<0.05). There were statistical differences on OD value of positive expression in sulfasalazine group and compound lizard powder groups, compared with model group (P<0.05). There were statistical differences on OD value of positive expression in compound lizard powder groups, compared with sulfasalazine group (P<0.05). There were statistical differences on OD value of positive expression in compound lizard power 80 mesh group, compound lizard power 100 mesh group and compound lizard power 80+100 mesh equivalent mixed group (P<0.05). There were no statistical differences on OD value of positive expression between compound lizard power 80 mesh group and compound lizard power 100 mesh group (P>0.05). The iNOS was positively correlated with the protein expression of NF-κB p65, and NF-κB p65 was negatively correlated with the protein expression of PPAR γ. Conclusion Compound lizard powder and sulfasalazine enteric-coated tablets has exact effects on the treatment of CUC, and the effects in compound lizard power 80+100 mesh equivalent mixed group was best, which suggest that different particles combination of compound lizard powder may have a protective effect for intestinal mucosal injury, its mechanism may be activated the expression of iNOS protein in PPAR γ and NF-κB p65 signal pathways inhibition and regulation by PPAR γ ligand, and thus affect the occurrence and development of CUC inflammation, the PPAR γ, NF-κB p65 and iNOS may be the target on the treatment of CUC.

Colitis, Ulcerative; Traditional Chinese medicine therapy; Chronic diseases; Administration and dosage; PPAR γ; Transcription factor RelA; Animal; Experiment

10.3969/j.issn.1002-2619.2017.04.022

※ 項(xiàng)目來(lái)源：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：81160482)

喬伊娜(1992—)，女，碩士研究生在讀，學(xué)士。從事脾胃病中醫(yī)藥治療及實(shí)驗(yàn)研究工作。

R574.621；R329.28；R341

A

1002-2619(2017)04-0569-07

2016-10-31)

△ 通訊作者：寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬回醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院消化科，寧夏 銀川 750004

1 寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院2014級(jí)碩士研究生，寧夏 銀川 750004