夭榮平魏任雄王輝郜都周俊史波崔云

脫敏煎治療男性免疫性不育對精漿炎癥因子表達的影響

夭榮平魏任雄王輝郜都周俊史波崔云

免疫性不育；炎癥因子；免疫珠試驗；脫敏煎

不育癥的發(fā)病因素復雜，其中20%～30%的不育癥與免疫因素有關[1]。西醫(yī)首選類固醇類激素治療男性免疫性不育，但療效尚不滿意。近年來我們運用經驗方“脫敏煎”治療該病取得了較為滿意的臨床效果，但是脫敏煎的具體作用機制尚未明確。炎癥因子異常表達是男性免疫性不育的重要影響因素[2]，本研究通過觀察脫敏煎治療男性免疫性不育影響精漿炎癥因子白介素-6（IL-6）和可溶性細胞黏附分子-1（sICAM-1）在治療前后表達的差異，揭示脫敏煎治療該病的一種可能作用機制，為臨床用脫敏煎治療該病提供實驗依據。

1 資料與方法

1.1 對象選取2012年8月—2015年2月來我院男科就診男性免疫性不育癥患者67例，年齡22～41歲，平均（28.9±13.1）歲,病程2～13年，平均（4.3± 5.5）年，婚齡2.8～13年，平均（5.1±5.4）年，身體健康，夫妻性生活正常，未采取任何避孕措施，女方均經婦科檢查，輸卵管通暢實驗以及B超、內分泌測定等排除女方不孕因素。根據研究對象進入研究的時間順序，采用區(qū)組隨機化方法分為脫敏煎組34例，年齡24～41歲，平均（29.6±14.3）歲；醋酸潑尼松組33例，年齡22～39歲，平均（28.2±11.9）歲。另外選擇同期因女方因素不孕前來檢查的生育力評估正常的健康男性31名為健康對照組，年齡22～35歲，平均（27.1± 13.9）歲。所有對象均簽署知情同意書，并經醫(yī)院倫理委員會同意。各組年齡、婚齡等基線資料方面等差異無統計學意義（P＞0.05），臨床資料有可比性。

1.2 病例選擇依照2000年WHO發(fā)布的免疫性不育的診斷標[3]：性及射精功能正常，在至少一份精液中，混合抗球蛋白反應實驗或免疫珠試驗（immunobead test，IBT）有不少于50%活動精子表面被覆抗體，排除內分泌、遺傳、惡性腫瘤、血液系統疾病、自身免疫性疾病、慢性阻塞性肺疾病及肝腎功能異常者。

1.3 治療方法脫敏煎組患者予脫敏煎方湯（方藥主要組成：女貞子15g，黃芩12g，徐長卿15g，牡丹皮15g，百合10g，丹參30g，防風10g，每劑水煎3次）口服，1天3次，1次200mL連續(xù)用藥60天，為1個療程。醋酸潑尼松組患者口服醋酸潑尼松片，1次5mg，1天3次，60天為1個療程。兩組治療期間均停用其他藥物。

1.4 標本采集方法依WHO要求，采集精液前禁性生活3～7天，排小便，洗凈雙手，用手淫法收集全部精液于干燥消毒的精液采集器內，置37℃多維混勻恒溫箱，觀察精液液化時間，待充分液化后行精子濃度、精子存活率、精子活力、免疫珠試驗等檢查，3000r/min離心15min，取精漿置-80℃冰箱保存待用，用以批量測定測IL-6和sICAM-1。

表1 兩組患者治療前后及健康對照組精液常規(guī)參數比較

表1 兩組患者治療前后及健康對照組精液常規(guī)參數比較

注：與治療前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；PR：前向運動精子；SLT：精液液化時間

?

1.5 檢測方法依照WHO《人類精液檢查與處理實驗室手冊》（第5版）要求進行精液分析[4]，液化時間通過肉眼觀察和顯微鏡進行識別判讀，待精液液化后借用北京偉力計算機輔助精子分析系統，在帶有加熱37℃載物臺的顯微鏡下分析精子活力和精子濃度，精子存活率采用低滲膨脹實驗（HOS），IBT試驗試劑由深圳華康生物醫(yī)學工程有限公司提供（批號為20140401、20141107）。用酶聯免疫吸附（ELSA）方法測定IL-6和sICAM-1的含量,設試劑空白及標本空白，各標本平行測定2次，取平均值（兩次結果偏倚≥10%重新測定），所用試劑盒購自美國Bender MedSystems公司（批號D130301、D130219），分析儀器為芬蘭Denley Dragon酶標儀（波長為450nm），方法按操作說明進行。

1.6 統計學方法應用SPSS17.0軟件進行數據分析。經正態(tài)性檢驗，精液質量參數和精漿IL-6、 sICAM-1符合正態(tài)分布，采用均數±標準差示；多組間比較采用單因素方差分析；兩組間比較采用t檢驗。精液免疫珠試驗呈偏態(tài)分布，用中位數（四分位區(qū)間）表示[M（P25～P75]，采用非參數Mann-Whitney U檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 各組精液常規(guī)參數比較治療前三組對象精子存活率比較差異有統計學意義（F=3.89，P＜0.05）、精子前向運動比率差異有統計學意義（F=5.24，P＜0.01）；脫敏煎組和醋酸潑尼松組治療前、治療后各參數比較均無統計學意義（P＞0.05）；脫敏煎組和潑尼松組治療前后各自比較，精子存活率、前向運動精子比率差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。見表1。

2.2 各組精漿細胞因子水平比較治療前三組比較IL-6（F=6.06，P＜0.01）、sICAM-1（F=7.83，P＜0.01）差異均有統計學意義，但兩治療組治療前IL-6和sICAM-1差異均無統計學意義（P＞0.05）；治療后三組比較，IL-6差異有統計學意義（F=3.46，P＜0.05）、sICAM-1差異有統計學意義（F=5.04，P＜0.01）；脫敏煎組治療后與健康對照組比較，IL-6無統計學意義（P＞0.05），sICAM-1差異有統計學意義（P＜0.05）；醋酸潑尼松組治療后與健康對照組比較，IL-6差異有統計學意義（P＜0.05），sICAM-1差異有統計學意義（P＜0.01）；脫敏煎組治療后IL-6、sICAM-1較醋酸潑尼松組明顯下調（P均＜0.05）；脫敏煎組治療前后比較IL-6、sICAM-1差異均有統計學意義（P＜0.01），醋酸潑尼松組治療前后比較IL-6無統計學意義（P＞0.05），sICAM-1差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者治療前后及健康對照組細胞因子比較

表2 兩組患者治療前后及健康對照組細胞因子比較

注：與治療前比較，*P＜0.01；IL-6：白細胞介素-6；sICAM-1：可溶性細胞黏附分子-1

?

2.3 兩組患者治療前、后免疫珠試驗結果比較兩組治療前差異無統計學意義（U=544.5，P=0.836），治療后差異有統計學意義（U=316.8，P=0.018）。脫敏煎組患者治療前后比較差異有統計學意義（U=58.5，P= 0.000），醋酸潑尼松組治療前后比較差異有統計學意義（U=384.3，P=0.037）。見表3。

3 討論

據統計，全球不育癥患病率5%～30%[5]。免疫因素是不育癥發(fā)病的重要影響因素，在生殖道損傷、生殖系統炎癥感染、外傷及外科手術損傷及梗阻等因素下，使血睪屏障開放調節(jié)異常，導致精母細胞、精子細胞、精子與機體免疫系統接觸發(fā)生自身免疫應答，形成多種類型的抗精子抗體，從而導致男性免疫性不育[6-8]。目前西醫(yī)治療主要用類固醇類藥物[9]，但診治效果尚不滿意，長期使用不良反應較大，易引起內分泌失調、免疫力下降、易感染、腎上腺皮質功能亢進癥以及胃潰瘍等，并且停藥后產生反跳現象。

表3 兩組患者治療前后免疫珠試驗結果比較[%，M（P25～P75）]

經驗方脫敏煎選用女貞子、炒黃芩、徐長卿、牡丹皮、百合、丹參、防風，藥理研究[10]表明，女貞子、百合補腎益氣，并且女貞子可增強細胞表面受體活性，促進T細胞活動，發(fā)揮免疫調節(jié)作用。丹參、丹皮活血化瘀可調節(jié)機體血液循環(huán)，特別是微循環(huán)[11]，另外丹參有自由基清除功能[12]，對已形成的免疫復合物有促進吸收和消除的作用。炒黃芩和徐長卿清熱利濕具有抗菌消炎作用[13]。全方具有活血化瘀、抗菌消炎，調節(jié)細胞因子分泌和免疫功能，增強精漿免疫抑制物活性，加速免疫復合物的消除，從而達到治療男性免疫性不育的功能。IL-6和sICAM-1是重要的炎癥細胞因子，我們前期的研究結果表明[14]，男性免疫性不育患者炎癥因子IL-6、sICAM-1精漿表達水平明顯高于正常人，炎癥因子的異常表達與免疫性不育密切相關。本研究通過分別用脫敏煎和醋酸潑尼松干預男性免疫性不育患者，結果顯示，脫敏煎和醋酸潑尼松組治療前IL-6、sICAM-1精漿表達均明顯差異于健康對照組（P＜0.01），經治療后脫敏煎組和醋酸潑尼松組IL-6和sICAM-1均有不同程度的表達下調，尤以脫敏煎組下調更為顯著（P＜0.05）。提示脫敏煎均對男性免疫性不育病情有一定的改善，在去除炎癥介質、調節(jié)免疫功能方面具有優(yōu)勢。免疫珠試驗是目前公認的最敏感的特異性方法[15]，因此我們選用了免疫珠試驗用以判斷脫敏煎和醋酸潑尼松干預男性免疫性不育的療效判斷，結果顯示，治療后脫敏煎組精子被覆的抗體減少程度大于醋酸潑尼松組（P＜0.05）。提示脫敏煎在改善免疫功能、抑制免疫復合物的形成、去除免疫性不育患者免疫復合物方面可能優(yōu)于醋酸潑尼松。

［1］Dintroma OK，Kulaidzhiew SK，Biakow LS，etal.Methods for the detection of antibodies associateted with immunologicaly reediatedhumaninfertility［J］.AKushGinekol（Sofiia），2002，41（3）：43.

［2］林祥宏，黃先國，孫小紅，等.不育男性精漿細胞因子水平及其與精液質量參數相關性分析［J］.中華男科學雜志，20 11，17（2）：165-167.

［3］WHO.WHO manual for standardized investigation diagnosis and management of the infertile male［M］.Cambridge：Cam-bridge University press，2000：11-46.

［4］世界衛(wèi)生組織編，谷翊群，陳振文，等譯.世界衛(wèi)生組織人類精液檢查與處理實驗室檢驗手冊［M］.第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：10-98.

［5］Hu Z，Xia Y，Guo X，et al.A genome-wide association study in Chinese men identifies three risk loci for non-obstructive azoospermia［J］.Nat Genet，2011，44（2）：183-186.

［6］袁小麗，白汝崗，劉姍姍，等.血睪屏障開放調節(jié)機制研究進展［J］.動物醫(yī)學進展，2006，27（12）：31-34.

［7］呂逸清，陳斌.男性免疫性不育有關病因因素的研究進展［J］.中國男科學雜志，2008，22（6）：64-66.

［8］胡彬，胡承.男性免疫性不育診斷和治療［J］.國外醫(yī)學計劃生育分冊，2001，20（1）：45，63.

［9］盧太坤，歐陽洪根，金冠羽，等.虎杖丹參飲治療免疫性不育男性的臨床研究［J］.中華男科學雜志，2006，12（8）：750-755.

［10］姜南輝.女貞子的化學成分及藥理作用［J］.河南中醫(yī)，2015，35（11）：2848-2849.

［11］常德貴.男性免疫性不育的中醫(yī)論治［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2007，27（11）：969.

［12］利漢其.復方丹參注射液對支氣管哮喘患兒體液免疫及外周血T淋巴細胞亞群的影響［J］.中國實用醫(yī)藥，2016，11（8），161-162.

［13］劉強，劉文彬，張玉芳，等.丹皮酚的酮基衍生物及其藥理活性研究進展［J］.湖南中醫(yī)藥大學學報，2015，35（2）56-59.

［14］史波，魏任雄，崔云，等.免疫性不育男性精漿白細胞介素6和可溶性細胞黏附分子1分析［J］.中華男科學雜志，2014，20（12）：1098-1102.

［15］劉海燕.免疫性不育的研究現狀［J］.世界最新醫(yī)學信息文摘，2014，14（18）：61.

（收稿：2016-06-27修回：2016-08-03）

浙江省寧波市自然科學基金（No.2013A610273）（No.2016A 610200）

浙江中醫(yī)藥大學附屬寧波醫(yī)院檢驗科（寧波315020）

魏任雄，Tel：13429364729；Email：nbxiaowei@163.com