何鵬暉，錢 楊，王 猛，楊建濤，趙婷婷，蔣云露，車振明，饒 瑜,*

（1.西華大學食品與生物工程學院，四川 成都 610039；2.四川東坡中國泡菜產(chǎn)業(yè)技術研究院，四川 眉山 620020；3.四川省食品藥品檢 驗檢測院，四川 成都 610097）

腐敗發(fā)酵蔬菜中產(chǎn)膜醭細菌的分離鑒定及其生長特性分析

何鵬暉1，錢 楊1，王 猛2，楊建濤1，趙婷婷1，蔣云露3，車振明1，饒 瑜1,*

（1.西華大學食品與生物工程學院，四川 成都 610039；2.四川東坡中國泡菜產(chǎn)業(yè)技術研究院，四川 眉山 620020；3.四川省食品藥品檢 驗檢測院，四川 成都 610097）

以發(fā)酵蔬菜為研究對象，分離和鑒定其中形成腐敗膜醭的主要微生物，并分析其生長特性。利用胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基分離培養(yǎng)發(fā)酵蔬菜腐敗膜醭中的微生物，挑取50 株單克隆回接到發(fā)酵鹽鹵胰蛋白胨培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將能夠在培養(yǎng)液表面顯著形成膜醭的菌株進行16S rDNA或18S rDNA分子生物學鑒定。結果表明這6 株菌均為細菌，分別為枯草芽孢桿菌、弗氏檸檬酸桿菌、科氏葡萄球菌科氏亞種、普羅威登斯菌、克雷伯氏桿菌屬和陰溝腸桿菌。利用5 種發(fā)酵蔬菜模擬培養(yǎng)基培養(yǎng)上述6 株細菌，發(fā)現(xiàn)不同菌株在不同培養(yǎng)基中產(chǎn)膜醭情況不同?？莶菅挎邨U菌和科氏葡萄球菌科氏亞 種除了能形成膜醭外，還能引起培養(yǎng)基pH值升高，并對氮源需求不高?？死撞蠗U菌屬和普羅威登斯菌僅在發(fā)酵鹽鹵胰蛋白胨培養(yǎng)基和發(fā)酵蔬菜汁胰蛋白胨培養(yǎng)基中形成膜醭。上述細菌可能是發(fā)酵蔬菜腐敗膜醭形成的關鍵細菌和潛在威脅。

膜醭；發(fā)酵蔬菜；模擬培養(yǎng)基；16S rDNA；pH值變化

發(fā)酵蔬菜主要是以乳酸菌為主的復雜微生物體系（由蔬菜和輔料等帶入）在相對封閉的池或壇中自然發(fā)酵而成[1]，世界各地都有生產(chǎn)和食用，如中國泡菜、韓國泡菜[2]以及歐洲的sauerkraut和酸黃瓜等[3-4]。目前，大多數(shù)的發(fā)酵蔬菜產(chǎn)品都已逐漸由原來的家庭作坊生產(chǎn)轉變成工業(yè)化生產(chǎn)，邁向工業(yè)化生產(chǎn)的成熟期[5]。但無論是家庭制作還是工業(yè)化生產(chǎn)的發(fā)酵蔬菜，在整個發(fā)酵過程中和發(fā)酵后都保留有豐富的微生物數(shù)量和多樣性。這樣復雜的微生物菌群中也會存在一些腐敗微生物，它們在一定條件下會打破原有的微生物生態(tài)平衡并大量繁殖，通過生成令人不悅的風味物質或分泌胞外酶破壞蔬菜組織結構[6]、產(chǎn)生腐敗膜醭（pellicle，俗稱“生花”）[7]、代謝發(fā)酵體系中的乳酸引起pH值的升高并促使其他腐敗微生物的生長[8]，進而導致發(fā)酵蔬菜的腐敗，對發(fā)酵蔬菜行業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。

膜醭即聚集在空氣與液體交界面的，被細胞自身分泌的胞外大分子物質包裹使得單細胞個體相互黏附在一起的、有組織的細胞群體[9]。其形成機理為：從細胞水平來看，單一運動細胞經(jīng)過移動互相粘黏形成難運動的細胞長鏈，再通過產(chǎn)生細胞外基質使其對齊并相互黏附；從宏觀來看，先形成薄的膜醭，再變厚，隨后形成成熟膜醭[10]。它是發(fā)酵蔬菜腐敗最常見的現(xiàn)象之一。一般認為發(fā)酵蔬菜鹽鹵表面腐敗膜醭的形成主要由真菌引起，如克魯維畢赤酵母（Pichia kluyveri）和白地霉（Galactomyces candidum）[6]。但敖曉琳等[7]在研究中發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵蔬菜鹽鹵表面的腐敗膜醭中存在著芽孢桿菌。王猛等[11]在比較分析不同鹽濃度四川泡菜腐敗前后的微生物時也發(fā)現(xiàn)，在腐敗膜醭中有細菌存在，但是未對細菌是否形成膜醭進行探討。國內(nèi)外有很多研究者對細菌形成膜醭進行了報道[12-13]，但對能在發(fā)酵蔬菜中存在并形成膜醭的細菌的報道卻很少。因此，本實驗從發(fā)酵蔬菜鹽鹵表面腐敗膜醭中的微生物入手，對其進行分離、回接并鑒定，分析菌種種類及其膜醭形成特性，對發(fā)酵蔬菜表面腐敗膜醭形成的預防和控制提供理論指導。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌種與材料

新鮮筍殼青菜為市售。蔬菜發(fā)酵菌種為Lactobacillus plantarum E11，發(fā)酵蔬菜前期研究中分離并保藏[14]。

1.1.2 試劑與培養(yǎng)基

放線菌酮、DNA Marker、Taq DNA連接酶、dNTPs、DNA提取試劑盒、DNA純化試劑盒 北京天根生化科技有限公司；RNase A 美國Sigma公司。

胰蛋白胨大豆瓊脂（tryptone soy agar，TSA）培養(yǎng)基：胰蛋白胨15 g、大豆蛋白胨5 g、氯化鈉5 g、瓊脂20 g、1 000 mL蒸餾水，pH值為6.0±0.2，121 ℃滅菌30 min。

胰蛋白胨大豆肉湯（tryptone soy broth，TSB）培養(yǎng)基：胰蛋白胨15 g、大豆蛋白胨5 g、氯化鈉5 g、1 000 mL蒸餾水，pH值為6.0±0.2，121 ℃滅菌30 min。

本研究中所用模擬培養(yǎng)基如表1所示。

表 1 用于分析發(fā)酵蔬菜膜醭形成菌特性的模擬培養(yǎng)基Table 1 Preparation of model media used to characterize pellicleforming isolates from fermented vegetable

1.2 儀器與設備

臺式冷凍離心機 美國Beckman公司；聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀、凝膠成像系統(tǒng) 美國Bio-Rad公司；電泳儀 北京六一儀器廠；立式壓力蒸汽滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠；SHA-B恒溫振蕩器 金壇市富華儀器有限公司；SW-CJ-IF潔凈工作臺 蘇州安泰空氣技術有限公司；pHS-3C酸度計成都世紀方舟科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 蔬菜發(fā)酵

將新鮮筍殼青菜用清水洗凈，晾干。取800 g洗凈晾干的筍殼青菜于泡菜壇中，向壇中加入1 500 mL含食鹽質量濃度為6 g/100 mL的涼開水，涼開水中已加入活化的L. plantarum E11（終濃度為106CFU/mL）。在室溫下靜置發(fā)酵和貯藏，直至發(fā)酵鹽鹵表面形成腐敗膜醭。

1.3.2 產(chǎn)膜醭微生物的分離

從長有腐敗膜醭的泡菜壇中用無菌玻璃棒挑取鹽鹵表面的薄膜于5 mL無菌生理鹽水（0.9% NaCl），將其振蕩搖勻后進行等梯度稀釋至10－3～10－5，分別取100 μL各稀釋度的菌懸液均勻涂布于TSA培養(yǎng)基，再倒置于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)24～36 h。

1.3.3 產(chǎn)膜醭微生物的回接

隨機挑取5 0 個形態(tài)不同的單克隆（編號為P1～P50）于5 mL TSB培養(yǎng)基30 ℃搖床培養(yǎng)12～18 h后，取500 μL懸浮液接種于5 mL TFB培養(yǎng)基中，30 ℃靜置培養(yǎng)5～7 d。

1.3.4 產(chǎn)膜醭微生物的分子生物學鑒定

將能夠在TFB培養(yǎng)基表面形成膜醭的單克隆菌株進行分子生物學鑒定。用DNA提取試劑盒分別提取各單克隆菌株的基因組DNA，1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢驗結果。以提取的基因組DNA為模板，細菌以Eu27F（5’-AGAGTTTGATCCTGGC TCAG-3’）和1490R（5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’）為引物，PCR體外擴增條件為：95 ℃、5 min；95 ℃、1 min、50 ℃、1 min、72 ℃、2 min，35 個循環(huán)；72 ℃、10 min，進行擴增16S rDNA片段。真菌以NSl（5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’）和NS4（5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’）為引 物，其PCR體外擴增條件為：94 ℃、3 min；94 ℃、30 s，40 ℃、1 min，72 ℃、1 min，30 個循環(huán)；72 ℃、10 min，進行擴增18S rDNA片段。用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢驗PCR結果。

PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)膠回收純化，送成都擎科生物科技有限公司測序，測得的序列與NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫進行相似性分析，并通過Clustal X軟件多重比對后用MEGA6.0軟件中的Neighbor-Joining法進行構建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.3.5 產(chǎn)膜醭微生物在不同培養(yǎng)基中產(chǎn)膜醭情況分析

將經(jīng)過16S rDNA分子生物學鑒定后的菌株分別接種于TSB培養(yǎng)基，30 ℃、180 r/min搖床培養(yǎng)12～18 h。再分別取培養(yǎng)的菌懸液2 mL接種于50 mL TSB、VJ、FB、TFB、FVJ和TFVJ培養(yǎng)基中，搖勻后，分別分裝到5 支無菌試管中，30 ℃靜置培養(yǎng)10～12 d。于第1、3、5、7、11天觀察膜醭形成情況并取出一支試管進行pH值的測定。

2 結果與分析

2.1 產(chǎn)膜醭菌株的分離

將制備的發(fā)酵蔬菜靜置貯藏至鹽鹵表面形成腐敗膜醭后，用無菌玻璃棒挑取膜醭于5 mL生理鹽水，混勻進行10 倍梯度稀釋后涂布TSA培養(yǎng)基。30 ℃倒置培養(yǎng)后，稀釋度為10－4的TSA上長出212 個菌落，從中隨機挑取50 個單克隆于5 mL TSB培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)過夜，并分別編號為P1～P50。

2.2 產(chǎn)膜醭菌株的回接

取500 μL過夜培養(yǎng)的單克隆P1～P50于5 mL TFB培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)7 d后發(fā)現(xiàn)有部分菌株已形成膜醭。最終篩選出6 株形成膜醭速度快且膜醭較厚的菌株，其編號分別為P5、P11、P17、P29、P37和P48。由圖1可知，P5、P17和P37形成的膜醭厚，且P5和P17的培養(yǎng)液比較透明。P11、P29和P48形成片狀薄膜醭，且培養(yǎng)液比較渾濁。

圖 1 6 株菌株在TFB培養(yǎng)基表面形成膜醭情況Fig. 1 Pellicle formation by six isolates on the surface ofTFB

2.3 產(chǎn)膜醭微生物的分子鑒定結果分析

圖 2 細菌基因組DNA（A）和16S rDNA片段PCR擴增產(chǎn)物（B）瓊脂糖凝膠電泳圖Fig. 2 Agarose gel electrophoresis of genomic DNA of different bacteria (A) and PCR-amplified products of their 16S rDNA (B)

將P5、P11、P17、P29、P37和P48用TSB液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)過夜后，其菌液分別用DNA提取試劑盒提取總基因組DNA，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析。從圖2A可以看到，沒有明顯的拖尾現(xiàn)象，有亮帶，且片段大小超過15 kb，達到DNA提取要求。以基因組DNA為模板，分別進行了16S rDNA和18S rDNA PCR擴增，僅出現(xiàn)16S rDNA擴增產(chǎn)物，片段大小在1～2 kb之間（圖2B），瓊脂糖凝膠電泳條帶清晰。因此判斷這6 株菌株均為細菌。

將PCR擴增的16S rDNA片段與GenBank數(shù)據(jù)庫進行相似性分析，并通過Clustal X軟件多重比對后，用MEGA 6.0軟件中的Neighbor-Joining法構建系統(tǒng)發(fā)育樹見圖3。Devereux等[15]認為當16S rRNA的序列同源性不小于97%時可以認為是一個屬，同源性不小于98%時則可以認為是同一個種。進行鑒定的6 株菌株屬于6 個菌種，菌株P5為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、P11為弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii）、P17為科氏葡萄球菌科氏亞種（Staphylococcus cohnii subsp. cohnii）、P29為普羅威登斯菌（Providencia vermicola）、P37為克雷伯氏桿菌屬（Klebsiella sp.）以及P48為陰溝腸桿菌（Enterobacter cloacae）。

圖 3 基于16S rDNA構建的發(fā)酵蔬菜中產(chǎn)膜醭細菌的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 3 Phylogentic tree based on 16S rDNA sequences of pellicleforming strains

普遍認為，腐敗的發(fā)酵蔬菜表面形成的膜醭主要是由真菌引起的，鐘小廷[16]和饒瑜[6]等研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵蔬菜腐敗膜醭中的真菌主要為畢赤酵母屬；Chapot-Chartier等[17]發(fā)現(xiàn)在一定的條件下Lactococcus lactis能夠形成膜醭。Armitano等[10]發(fā)現(xiàn)不僅革蘭氏陽性菌如枯草芽孢桿菌能夠形成膜醭，革蘭氏陰性菌如Acinetobacter也能形成膜醭。本實驗通過把從膜醭中分離鑒定出來的6 株菌株回接到TFB中，發(fā)現(xiàn)這6 株菌株都能夠形成不同程度的膜醭，充分證明了發(fā)酵蔬菜表面的腐敗膜醭不僅是由真菌引起的，細菌也能夠形成腐敗膜醭。

2.4 產(chǎn)膜醭細菌在不同培養(yǎng)基中產(chǎn)膜醭特性分析

2.4.1 產(chǎn)膜醭細菌在不同培養(yǎng)基中產(chǎn)膜醭情況

將上述6 株菌株接種到TSB、VJ、FB、TFB、FVJ和TFVJ 6 種培養(yǎng)基中，30 ℃靜置培養(yǎng)，觀察其長膜情況（表2）。將不同程度的膜醭形成情況分為4 個層次如圖4所示。由表2可知，枯草芽孢桿菌產(chǎn)膜醭能力很強，能在TSA、VJ、FB、TFB和TFVJ中形成膜醭，且產(chǎn)膜醭量比較多，培養(yǎng)3 d就能夠產(chǎn)生片狀薄膜醭，與Trejo等[18]的研究結果相吻合?？剖掀咸亚蚓剖蟻喎N產(chǎn)膜醭的相關文獻報道非常少，只有少量文獻報道了科氏葡萄球菌科氏亞種能夠在非生命固體表面形成生物膜[19]。本實驗中分離得到的科氏葡萄球菌科氏亞種能在6 種培養(yǎng)基中產(chǎn)生膜醭，在TFB培養(yǎng)基中產(chǎn)膜醭能力最強，能夠產(chǎn)生片狀厚膜醭，其產(chǎn)膜醭時間與枯草芽孢桿菌產(chǎn)膜時間大致相同，但在FVJ培養(yǎng)基中第7天才長膜醭，其原因可能是由于FVJ培養(yǎng)基的pH值較低（約3.5左右）?？莶菅挎邨U菌和科氏葡萄球菌科氏亞種在VJ培養(yǎng)基中成膜情況比在FB和FVJ中好，表明這兩株菌株形成膜醭易受到pH值的影響。

表 2 產(chǎn)膜醭細菌在不同培養(yǎng)基中的膜醭形成情況Table 2 Pellicle-forming abilities of different bacteria in different media

圖 4 不同程度的膜醭Fig. 4 Different degrees of pellicle formation

有很多文章報道了陰溝腸桿菌產(chǎn)生生物膜[20-22]，但是關于產(chǎn)生膜醭的報道卻很少，分析陰溝腸桿菌在6 種不同培養(yǎng)基中成膜情況，發(fā)現(xiàn)它在VJ、TSB、TFB和TFVJ等培養(yǎng)基中能夠產(chǎn)生不同程度的膜醭，在FB和FVJ中不能產(chǎn)生膜醭，究其原因可能是FB和FVJ這兩種培養(yǎng)基pH值較低（低于4.0），抑制其生長[23]?？死撞蠗U菌屬、弗氏檸檬酸桿菌和普羅威登斯菌在5 種模擬培養(yǎng)基中產(chǎn)膜情況大致相同?？死撞蠗U菌屬在TFVJ中產(chǎn)膜量增大，能產(chǎn)生片狀厚膜醭，但在TFB只能產(chǎn)生零星膜醭。弗氏檸檬酸桿菌能在TFB中形成較厚的片狀膜醭，但在TFVJ中能形成片狀膜醭。而普羅威登斯菌在TFB和TFVJ中都只能形成少量膜醭。但是3 株菌株都不能在VJ培養(yǎng)基中形成膜醭，表明發(fā)酵體系的低pH值環(huán)境可能會脅迫這3 株菌株形成膜醭，進而抵抗外界環(huán)境的壓力達到保護自己的目的[16]。

分析培養(yǎng)基對細菌形成膜醭的影響發(fā)現(xiàn)，不同菌株在不同培養(yǎng)基條件下形成的膜醭情況不同。克雷伯氏桿菌屬和普羅威登斯菌在TFB和TFVJ條件下，比TSB條件下更易形成膜醭，說明克雷伯氏桿菌屬和普羅威登斯菌僅在發(fā)酵蔬菜條件下特異的形成膜醭并引發(fā)腐敗。FB和FVJ這2種培養(yǎng)基是最不適合細菌形成膜醭的，雖然這2種培養(yǎng)基的成分與發(fā)酵蔬菜的營養(yǎng)成分也很接近，但缺乏氮源（沒有添加胰蛋白胨），且pH值太低不利于產(chǎn)膜細菌的生長繁殖。而枯草芽孢桿菌和科氏葡萄球菌科氏亞種在FB或FVJ培養(yǎng)基中也能形成膜醭，說明其對氮源需求不高，更有可能是發(fā)酵蔬菜腐敗膜醭形成的關鍵細菌和潛在威脅。

2.4.2 不同培養(yǎng)基培養(yǎng)產(chǎn)膜醭細菌過程中環(huán)境pH值的變化

圖 5 不同培養(yǎng)基培養(yǎng)產(chǎn)膜醭細菌過程中的環(huán)境pH值變化Fig. 5 Changes in pH value during the growth of pellicle-forming strains in different media

由圖5可知，絕大多數(shù)培養(yǎng)基在培養(yǎng)產(chǎn)膜醭細菌的過程中pH值呈上升趨勢，到7.5～8.0趨于穩(wěn)定，部分培養(yǎng)基的pH值沒有變化是因為菌株在培養(yǎng)過程中未能生長。結合表2和圖5進行綜合分析發(fā)現(xiàn)，菌株在生長和膜醭形成過程中培養(yǎng)基pH值升高，究其原因可能是某些模擬培養(yǎng)基中添加了胰蛋白胨，在被菌株利用后引起培養(yǎng)基pH值升高，或者是某些菌株在生長和產(chǎn)膜醭過程中利用代謝產(chǎn)物引起培養(yǎng)基pH值升高。如枯草芽孢桿菌和科氏葡萄球菌科氏亞種在FB或FVJ培養(yǎng)基中開始形成膜醭時pH值高于5.0，表明這兩株菌株除了能形成膜醭外，還能引起培養(yǎng)基pH值升高，這一特性與能利用乳酸引起發(fā)酵蔬菜腐敗的微生物相同，這也是發(fā)酵蔬菜腐敗的另一典型特征[24-25]。

3 結 論

從發(fā)酵蔬菜膜醭中分離出的6 株菌株，經(jīng)16S rDNA分子生物學鑒定均為細菌，分別是枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii）、科氏葡萄球菌科氏亞種（Staphylococcus cohnii subsp. cohnii）、普羅威登斯菌（Providencia vermicola）、克雷伯氏桿菌屬（Klebsiella sp.）和陰溝腸桿菌（Enterobacter cloacae）。將6 株 菌株接種到模擬培養(yǎng)基中，菌株在生長和膜醭形成過程中環(huán)境pH值升高，且不同的菌株在不同培養(yǎng)基中產(chǎn)膜醭情況不同?？莶菅挎邨U菌和科氏葡萄球菌科氏亞種對氮源要求不高，能在沒有加胰蛋白胨的FB和FVJ中形成膜醭，同時在生長繁殖過程中還能引起培養(yǎng)基pH值升高，這也是發(fā)酵蔬菜腐敗的另一典型特征。克雷伯氏桿菌屬和普羅威登斯菌僅在TFB和TFVJ形成膜醭，這些菌株可能是發(fā)酵蔬菜腐敗膜醭形成的關鍵細菌和潛在威脅。在發(fā)酵蔬菜實際生產(chǎn)和腐敗過程中，上述產(chǎn)膜醭細菌共存于同一發(fā)酵蔬菜體系，它們之間的時間和空間地位、協(xié)同或競爭作用等，還有待進一步研究。本實驗將為發(fā)酵蔬菜腐敗膜醭形成機理的研究和腐敗膜醭的防控提供一定的理論基礎。

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Isolation, Identification and Growth Characteristic Analysis of Pellicle-Forming Bacteria from Spoiled Vegetable

HE Penghui1, QIAN Yang1, WANG Meng2, YANG Jiantao1, ZHAO Tingting1, JIANG Yunlu3, CHE Zhenming1, RAO Yu1,*
(1. College of Food and Bioengineering, Xihua University, Chengdu 610039, China; 2. Sichuan Dongpo Chinese Paocai Industrial Technology Research Institute, Meishan 620020, China; 3. Sichuan Institute for Food and Drug Control, Chengdu 610097, China)

The ma in microbes which could form pellicle in spoiled vegetable were isolated and identified. The growth characteristics of these microbes were also analyzed. Tryptone soy agar (TSA) medium was used to isolate the pellicleforming microorganisms. Fifty isolates were selected randomly from TSA medium and inoculated into tryptone soy broth medium supplemented with fermented brine (TFB). Six isolates which could form pellicle on the surface of the medium were subjected to 16S rDNA or 18S rDNA identification. The results showed that the pellicle-forming agents were all ba cteria, which were identi ed as Bacillus subtilis, Citrobacter freundii, Staphylococcus cohnii subsp. cohnii, Providencia vermicola, Klebsiella sp. and Enterobacter cloacae. The pellicle-forming abilities of each isolate in different model media were different. Bacillus subtilis and Staphylococcus cohnii subsp. cohnii could also increase the pH value of the medium and had lower nitrogen requirement. Klebsiella sp. and Providencia vermicola could form pellicle only in TFB and TSA supplemented with squeezed juice from fermented vegetable (TFVJ). The bacteria des cribed above might be the key agents for pellicle formation and pose a potential risk for fermented vegetable quality.

pellicle; fermented vegetable; model media; 16S rDNA; pH variation

10.7506/spkx1002-6630-201710016

TS201.3

A

1002-6630（2017）10-0092-06

何鵬暉, 錢楊, 王猛, 等. 腐敗發(fā)酵蔬菜中產(chǎn)膜醭細菌的分離鑒定及其生長特性分析[J]. 食品科學, 2017, 38(10): 92-97.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201710016. http://www.spkx.net.cn

HE Penghui, QIAN Yang, WANG Meng, et al. Isolation, identification and growth characteristic analysis of pellicle-forming bacteria from spoiled vegetable[J]. Food Science, 2017, 38(10): 92-97. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spk x1002-6630-201710016. http://www.spkx.net.cn

2016-08-02

四川省科技廳應用基礎項目（2015JY0142）；教育部春暉計劃項目（Z2015123）；西華大學研究生創(chuàng)新基金項目（ycjj2016046）

何鵬暉（1991—），男，碩士研究生，研究方向為食品微生物安全。E-mail：240538743@qq.com

*通信作者：饒瑜（1982—），女，副教授，博士，研究方向為食品微生物安全。E-mail：ryfish@163.com