任 潔，程春來，蘆 蘭，杜 淵

(長江航運總醫(yī)院腫瘤科,武漢 430010)

·經驗交流·

肺癌血清標志物PCNA及Bax的表達及與預后的關系

任 潔，程春來△，蘆 蘭，杜 淵

(長江航運總醫(yī)院腫瘤科,武漢 430010)

目的 觀察肺癌血清標志物細胞增殖抗原(PCNA)及Bcl-2相關X蛋白(Bax)的表達及與預后的關系。方法 收集該院100例肺癌患者(肺癌組)及50例健康人血清標本(對照組)，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測肺癌組及對照組血清中PCNA及Bax表達量，同時探討二者與肺癌病理參數(shù)的關系。結果 肺癌組PCNA表達高于對照組，低中分化組PCNA表達高于高分化組，Ⅲ～Ⅳ期PCNA表達高于Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴結轉移組PCNA表達高于無淋巴結轉移組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而肺癌組中Bax表達情況相反，并與PCNA表達負相關，同時肺癌組PCNA和Bax表達與患者性別、年齡、吸煙史、病理類型及腫瘤大小無關。結論 PCNA的表達對肺癌的發(fā)生發(fā)展起促進作用，并與Bax表達負相關，二者的表達可為肺癌的診斷及預后提供判斷依據。

癌，非小細胞肺；細胞增殖抗原；Bcl-2相關X蛋白；預后

肺癌是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一，其病死率居世界首位，近年來其發(fā)病率及病死率呈上升趨勢，給患者及社會帶來沉重負擔[1-2]。手術治療是其目前主要治療方式，但由于肺癌患者早期癥狀不明顯，使得影像學表現(xiàn)不顯著，同時肺癌與肺良性病變鑒別難度較大，導致當患者確診時常處于晚期，所以尋找肺癌高效腫瘤標記物具有重要意義[3]。目前肺癌的確診還是依靠組織病理學或細胞學檢查，但由于醫(yī)療設備限制及患者因素，同時此技術取材不方便，不易反復獲取，創(chuàng)傷較大，使得通過該技術獲取標本受到限制。而血清腫瘤標記物由于取材方便，重復性好，創(chuàng)傷小，易于被患者接受，而且成本低廉，已逐漸廣泛用于肺癌的診斷及治療[4]。腫瘤標記物細胞增殖抗原(PCNA)及Bcl-2相關X蛋白(Bax)是細胞增殖與凋亡相關蛋白，已被證實是胃癌及宮頸癌血清腫瘤標記物[5-6]，同時研究也表明其表達與肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關[7-8]，但未見二者在肺癌血清中的表達情況的報道，所以本研究將探討PCNA與Bax在肺癌血清中的表達及與預后的關系，為肺癌的早期診斷及預后提高判斷依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2015年5月至2016年4月100例病理確診為肺癌患者的血清標本(肺癌組)，所有患者均未接受化療、放療及手術治療，且不患有哮喘、肺間質纖維、冠心病、糖尿病及其他惡心性腫瘤等疾病。其中男58例，女42例，年齡39～77歲，平均58歲；<60歲62例，≥60歲38例；有吸煙者(超過5支/天)62例，無吸煙者38例；小細胞肺癌(SCLC)44例，非小細胞肺癌(NSCLC)56例(包括腺癌29例，鱗癌20例，支氣管肺泡癌7例)；臨床分期(TNM)Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅲ～Ⅳ期64例；病理分化程度低中分化67例，高分化33例；有淋巴結轉移59例，無淋巴結轉移41例；腫瘤大小，<5 mm 72例，≥5 mm 28例。另外選擇50例健康人作為對照組，其中男28例，女22例，年齡38～78歲，平均59歲；<60歲30例，≥60歲30例；有吸煙者28例，無吸煙者22例。本研究已通過本院倫理委員會審批，參與試驗的患者及家屬均簽署知情同意書，參與試驗的所有志愿者均被告知試驗目的，且均同意試驗要求后被采集標本。

1.2 方法 所有志愿者在知情同意并未接受任何治療的情況下，空腹通過外周靜脈采血5 mL置于無抗凝劑的干燥管中，室溫放置30～60 min，并在2 h內2000 r/min離心10 min，然后小心吸取上層血清，置于干燥EP管中，并密封編號置于-80 ℃冰箱待測。采用ELISA法檢測所有血清標本中PCNA及Bax水平，實驗方法分別嚴格按照ELISA試劑盒說明書進行操作，試劑盒均有武漢博士德生物技術有限公司提供。

2 結 果

2.1 兩組血清中PCNA和Bax水平的比較 肺癌組血清中PCNA水平顯著高于對照組，而Bax水平顯著低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見表1。

表1 兩組血清中PCNA和Bax水平的比較

2.2 肺癌血清中PCNA和Bax的表達與臨床病理特征的關系 肺癌血清中PCNA和Bax表達與腫瘤的病理分化程度，TNM分期及淋巴結轉移密切相關。即中低分化組血清中PCNA水平顯著高于高分化組，Ⅲ～Ⅳ期患者血清中PCNA水平高于Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴結患者血清中PCNA水平高于無淋巴結轉移，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。中低分化組血清中Bax水平顯著低于高分化組，Ⅲ～Ⅳ期患者血清中Bax水平低于Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴結轉移患者血清中Bax水平低于無淋巴結轉移，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而肺癌血清中PCNA和Bax表達與患者性別，年齡，吸煙史，病理類型及腫瘤體積無關，見表2。

表2 肺癌血清中PCNA和Bax的表達與臨床病理特征的關系

2.3 PCNA和Bax表達的相關性 經Pearson相關性分析，肺癌血清中PCNA和Bax表達呈負相關(r=-0.458，P<0.01)。

3 討 論

PCNA是真核細胞DNA復制和核苷酸剪切過程所需要的輔助蛋白，是細胞增殖狀態(tài)的評價指標之一。國內外研究已發(fā)現(xiàn)PCNA與肺癌的發(fā)生，臨床分期，預后，復發(fā)，轉移及腫瘤標記物密切相關[7]。而且劉輝琦等[4]的研究還表明血清中PCNA水平與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關。所以本研究首先通過ELISA法檢測肺癌組及對照組血清中PCNA水平，結果表明肺癌組血清中PCNA水平顯著高于對照組，與Liu等[7]研究結果肺癌組織中PCNA表達量高于正常肺組織一致，從而說明血清中PCNA也與肺癌的發(fā)生密切相關。因此進一步檢測肺癌血清中PCNA與臨床病理參數(shù)的關系，結果表明肺癌血清中PCNA的表達與腫瘤分化程度，臨床分期及淋巴結轉移密切相關，而與性別，年齡，病理類型及腫瘤大小無關，與以往的研究結果類似[8-10]。從而說明隨著腫瘤臨床分期越晚，分化程度越低，肺癌血清中PCNA表達越高，細胞增殖越加活躍，腫瘤惡性程度加深，致使肺癌患者預后不佳。

另一方面檢測腫瘤細胞凋亡相關基因的表達也成為腫瘤發(fā)現(xiàn)，診斷及預后的重要手段[11-12]。Bcl-2家族是最常被研究的一類細胞凋亡相關基因，Bax是Bcl-2家族的促凋亡蛋白。劉瑞芳等[12]研究表明肺癌組織Bax陽性表達低于正常組織，并與腫瘤分化程度及淋巴結轉移負相關，且其陽性表達與細胞凋亡正相關。曹文榮等[13]研究表明肺癌組織中Bax表達量低于良性病變灶旁正常肺組織，并與TNM分期，淋巴結轉移密切相關，與病理類型無關。本研究結果表明肺癌血清中Bax表達量顯著低于對照組，此結果與于慧玲等[5]在宮頸癌血清中發(fā)現(xiàn)的Bax的表達趨勢一致，也與劉瑞芳等[12]，曹文榮等[13]研究結果一致。從而說明肺癌血清中Bax表達量與肺癌的發(fā)生密切相關。此外本研究結果還表明肺癌血清中Bax的表達與肺癌腫瘤分化程度，TNM分期及淋巴結轉移，而不與肺癌患者性別，年齡，腫瘤大小，病理類型及吸煙史相關，此結論與Sun 等[6]研究結果一致。從而說明Bax在肺癌的發(fā)生過程中起負調控作用，使細胞凋亡不足，進而使細胞過度增殖進而惡化。

另外通過Pearson相關性分析表明肺癌血清中PCNA與Bax表達量負相關。Xu等[14]研究發(fā)現(xiàn)通過RNA干擾抑制小鼠卵巢中PCNA表達，能顯著的上調促凋亡基因Bax的表達，從而進一步誘導新生小鼠卵母細胞凋亡。說明通過靶向下調肺癌PCNA表達，進而上調Bax表達，能遏制肺癌細胞的過度增殖，促進癌細胞凋亡，最終可能避免癌細胞的轉移擴散。

總之，PCNA的表達對肺癌的發(fā)生發(fā)展起著促進作用，而Bax對肺癌的發(fā)生發(fā)展起著抑制作用，二者的血清學聯(lián)合檢測對于肺癌的早期發(fā)現(xiàn)，診斷及預后具有重要意義。

[1]Siegel R,Ma JM,Zou ZH,et al.Cancer statistics,2014[J].CA Cancer J Clin,2014,64(1):9-29.

[2]Seow WJ,Lan Q.Domestic incense use and lung cancer in Asia:a review[J].Rev Environ Health,2016,31(1):155-158.

[3]汪廣杰，王東，張濤．血清多種腫瘤標志物聯(lián)合檢測對肺癌的診斷價值[J]．重慶醫(yī)學，2015，44(13)：1759-1761．

[4]劉輝琦，劉慧，劉杰，等．胃癌患者血清PCNA蛋白變化及意義[J]．青海醫(yī)學院學報，2011，32(3)：179-180．

[5]于慧玲，李冬梅，屠軍，等．宮頸鱗癌患者血液、癌組織中Survivin、Caspase-3、Bcl-2和Bax的表達及其相互關系[J]．中國婦幼保健，2014，29(26)：4213-4215．

[6]Sun Q,Hua J,Wang Q,et al.Expressions of GRP78 and Bax associate with differentiation,metastasis,and apoptosis in non-small cell lung cancer[J].Mol Biol Rep,2012,39(6):6753-6761.

[7]Liu CY,Liu J,Wang X,et al.Prognostic impact of nm23-H1 and PCNA expression in pathologic stage Ⅰ Non-Small cell lung cancer[J].J Surg Oncol,2011,104(2):181-186.

[8]李娜．肺癌 VEGF及 PCNA 的表達及其與預后的關系[J]．陜西醫(yī)學雜志，2014，43(1)：48-50．

[9]李英杰，于長海，李捷，等．PCNA和Ki-67在非小細胞肺癌組織中的表達及其臨床意義[J]．臨床軍醫(yī)雜志，2011，39(2)：261-263．

[10]張文娟，馬華玲，鄭明軍，等．原發(fā)性非小細胞肺癌組織中Cathepsin D、PCNA的表達及其臨床意義[J]．診斷病理學雜志，2015，22(11)：709-712．

[11]Zhang J,Wang S,Wang L,et al.Prognostic value of Bcl-2 expression in patients with non-small-cell lung cancer:a meta-analysis and systemic review[J].Onco Targets Ther,2015,8:3361-3369.

[12]劉瑞芬，蔣軍廣，張曉燕，等．凋亡相關基因bax在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[J]．中國老年學雜志，2013，33(9)：2002-2003．

[13]曹文榮，閆文修，王雪利．非小細胞肺癌組織中VEGF和Bax的表達及意義[J]．重慶醫(yī)學，2016，45(3)：307-309．

[14]Xu B,Hua J,Zhang YW,et al.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) regulates primordial follicle assembly by promoting apoptosis of oocytes in fetal and neonatal mouse ovaries[J].PLoS One,2011,6(1):e16046.

任潔(1964-)，副主任醫(yī)師，本科，主要從事肺癌綜合治療的研究?！?/p>

，E-mail:22090947@qq.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.10.035

R392.7

B

1671-8348(2017)10-1399-03

2017-01-29

2017-02-20)